骨碎补总黄酮抑制NF-kB信号通路干预大鼠椎间盘退变

背景:椎间盘退变是由于一系列的机械压迫、炎性因子、基质金属蛋白酶等共同作用导致的.骨碎补总黄酮被证实具有抗炎作用,但其延缓椎间盘软骨细胞作用和机制尚不明确.目的:探讨骨碎补总黄酮干预SD大鼠颈椎间盘退变模型的作用机制并对其临床价值进行分析.方法:SD大鼠50只(雌雄各半)随机分为2组:10只作为假手术组,40只大鼠用于建立动静力失衡性颈椎间盘退变大鼠模型.通过病理学方法鉴定造模成功后,取36只颈椎间盘退变模型大鼠随机分为骨碎补总黄酮低、中、高剂量组和模型各9只.假手术组和模型组每日分别给予4 mL生理盐水灌胃,骨碎补总黄酮低、中、高剂量组分别给予62.5,125,250 mg/kg的骨碎补供试液灌胃,各组共喂养1个月,然后分别取出大鼠的C3-4,C4-5,C5-6,C6 7椎间盘组织,采用免疫组织化学、ELISA测定肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶3蛋白表达;RT-PCR检测肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶基因表达;Western Blot检测IkBα的磷酸化水平.实验方案经安徽医科大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①RT-PCR、免疫组织化学、ELISA和Western blot检测显示模型组IkBα的磷酸化水平、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶3 mRNA及蛋白表达显著高于假手术组(P＜0.01);骨碎补总黄酮干预各组IkBα的磷酸化水平、肿瘤坏死因子α、基质金属蛋白酶3 mRNA及蛋白表达显著低于模型组,以骨碎补总黄酮低剂量组干预效果最佳;②结果说明,骨碎补总黄酮高、中、低剂量均能通过抑制退变椎间盘中NF-kB信号通路激活,以及细胞内基质金属蛋白酶3和肿瘤坏死因子α的表达,保护椎间盘软骨细胞,延缓椎间盘,但以低剂量骨碎补总黄酮干预效果最佳.

2020

2021/07/20

查看

心脏高表达基因hhole通过ERK结合位点抑制心肌肥厚信号分子ANF的转录活性

目的 探讨心脏高表达基因hhole调控心肌肥厚信号分子ANF的转录活性的分子机制.方法 利用生物信息学在线软件分析hhole蛋白的分子结构.利用酶切法和环状诱变技术突变得到hhole基因的突变体重组质粒.将突变体和野生型的重组质粒分别转染HEK293细胞系,测定荧光素酶报告基因ANF的转录活性.结果 生物信息学分析发现hhole蛋白含有ERK结合位点和多聚脯氨酸序列.利用酶切法构建了4个截短突变体重组质粒,环状质粒定点诱变的方法构建了3个定点突变的突变体.荧光报告系统分析发现pCMV-tag2B-TD与pCMV-tag2B-hhole全长均能强烈地抑制ANF的转录活性.结论 hhole蛋白主要通过其ERK结合位点抑制心肌肥厚信号分子ANF的转录活性.

2020

2021/07/20

查看

音猬因子缓释聚多巴胺纤维蛋白支架促进大鼠脊髓损伤的修复

背景:近来多数研究将组织工程材料与干细胞或因子复合来改善动物脊髓损伤模型损伤处的微环境,以增加作用时长、提高恢复效果与预后.目的:观察音猬因子-聚多巴胺-纤维蛋白支架修复大鼠脊髓损伤的效果.方法:采用真空冷冻干燥机制作纤维蛋白胶,将其置入盐酸多巴胺溶液中浸泡24 h进行交联,再将交联后的支架置入音猬因子溶液中吸附交联24 h,制备音猬因子-聚多巴胺-纤维蛋白支架.取60只雌性SD大鼠建立脊髓损伤模型,随机分4组处理:A组不植入任何材料,B组植入纤维蛋白支架,C组植入聚多巴胺-纤维蛋白支架,D组植入音猬因子-聚多巴胺-纤维蛋白支架,术后12周内进行下肢运动功能BBB评分;术后12周取脊髓损伤处组织,分别进行组织学观察(苏木精-伊红与免疫组化)与Western blot检测.实验方案经江苏大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①从术后2周开始各组大鼠下肢运动功能开始恢复,D组术后5-12周的BBB评分高于其他3组(P＜0.05),D组下肢运动功能恢复最好;②苏木精-伊红染色显示,C、D组可见新生的神经纤维组织,C组新生神经纤维组织的量与密度低于D组;③免疫组织化学染色显示,D组横断处可以观察到大量线性排列的新生神经纤维,髓磷脂碱性蛋白、生长相关蛋白和神经丝蛋白阳性率高于其他3组,胶质纤维酸性蛋白阳性率低于其他3组;④Western blot检测显示,D组髓磷脂碱性蛋白、生长相关蛋白和神经丝蛋白高于其他3组(P＜0.05),胶质纤维酸性蛋白表达低于其他3组(P＜0.05);⑤结果表明,音猬因子-聚多巴胺-纤维蛋白具有良好的缓释性能,对大鼠脊髓损伤修复有明显促进作用.

2020

2021/07/20

查看

尼帕假病毒感染金黄地鼠模型的建立

目的 建立尼帕病毒假病毒动物感染模型,降低活病毒动物模型的生物安全风险.方法 利用HIV骨架体系包装尼怕病毒假病毒,然后以不同剂量,不同的途径实验感染金黄地鼠,动态检测尼帕假病毒在金黄地鼠体内发光和分布情况.结果 除灌胃(IG)外、腹腔注射(IP)、胸腔注射(IC)途径均能使金黄地鼠感染尼帕假病毒,以IP组的感染效果较好,假病毒感染后体内分布主要在心脏、脾脏、胰、肝脏,从第1d可以检出假病毒发光,第2d基本达到发光高峰,持续至6 d后开始下降,11d发光消失.结论 成功建立尼帕病毒假病毒金黄地鼠动物感染模型建立成功,可以部分代替尼帕病毒的活病毒试验,降低生物安全风险.

2020

2021/07/20

查看

弥散张量成像预测3D打印支架促进脊髓损伤后运动功能恢复

背景:弥散张量成像作为一种基于MRI相对较新的方法,目前己成为神经影像学领域检查诊断的重要手段.目的:使用弥散张量成像数据预测3D打印胶原/丝素蛋白支架在脊髓损伤后运动功能恢复中的作用,并探讨运动功能与弥散张量成像之间的相关性.方法:制备普通胶原/丝素蛋白支架和3D打印胶原/丝素蛋白支架.取成年雌性SD大鼠40只(由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供),随机分为4组,每组10只:假手术组仅切除T10椎板;模型组制作T10脊髓全横断损伤模型;普通支架组、3D打印支架组建立T10脊髓全横断损伤模型后分别植入普通胶原/丝素蛋白支架和3D打印胶原/丝素蛋白支架.术后1,2,3,4,6,8周进行后肢BBB评分与斜板实验,术后8周进行后肢电生理检测,评估运动功能;术后8周进行腰椎弥散张量成像检查,并分析弥散张量成像参数与大鼠运动功能的相关性.动物实验获得中国人民武装警察部队特色医学中心研究动物伦理委员会的批准(伦理号:27653/58).结果 与结论:①自术后3周起,3D打印支架组的BBB评分高于模型组、普通支架组(P＜ 0.05或P＜ 0.01);自术后2周起,3D打印支架组的斜板实验角度高于模型组、普通支架组(P＜0.05或P＜0.01);②3D打印支架组的运动诱发电位振幅大于模型组、普通支架组(P＜ 0.05或P＜0.01),运动诱发电位潜伏期短于模型组、普通支架组(P＜ 0.05或P＜0.01);③弥散张量成像显示,造模3组的神经纤维轨迹不规则,均缺乏神经纤维的连续性,但3D打印支架组的断端再生神经纤维束数量多于模型组、普通支架组(P＜ 0.01);3D打印支架组距离脊髓损伤正中心9,7.5,4.5,-3,-6,-7.5,-9 mm处的分数各向异性值均高于模型组、普通支架组(P＜ 0.05或P＜0.01);④术后8周,BBB评分、斜坡角度、运动诱发电位振幅、运动诱发电位潜伏期与从大鼠头到尾的弥散张量成像分数各向异性值之间存在正相关;⑤结果表明,弥散张量成像可被用作有效预测指标来评估实验和临床病例中脊髓损伤的神经系统修复.

2020

2021/07/20

查看

器官芯片与工程化人体组织在药物研发中的应用前景

背景:器官芯片是指在体外建立的模拟人体生理或病理状态的小型组织或器官.目的:综述单器官芯片和复合器官芯片的设计理念,讨论其在药物发展和精准医疗中的潜力、应用前景,以及目前尚未解决的问题.方法:通过计算机检索在PubMed数据库、CNKI中国期刊全文数据库收录的相关文献.英文检索词为“Organs-on-a-chip, drug development, cell culture, Organoids, microfluidic systems, induced pluripotent stem cells,liver”,中文检索词为“器官芯片,药物研发,肝脏,微流控系统,血脑屏障,肿瘤”,最终纳入68篇文献进行归纳总结.结果 与结论:器官芯片技术集合了工程化人体组织工程、半导体制造以及不同来源的成人体细胞培养等领域的最新研究进展,突破了现有细胞和动物模型的限制,将整个器官或系统的活动、力学特性、生理反应等体现在3D微流体细胞培养芯片上.通过将人类细胞与生理相关微环境相整合,模拟体外的人类生理或病理状态,使得它们有望用于补充并减少药物、医学设备及生物材料的临床应用前的动物实验,也为筛选药物的不良反应提供有利的体外平台.

2020

2021/07/20

查看

黄葵胶囊对阿霉素肾病大鼠肾组织MCP-1表达及对肾组织病理损伤的影响

目的 探讨黄葵胶囊对阿霉素肾病(AN)大鼠肾组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达及对肾组织病理损伤的影响.方法 选择30只清洁级雄性SD大鼠作为实验动物,分为正常组大鼠10只,剩余的20只为建模大鼠.根据随机数字表法,将这20只大鼠分为模型对照组(n=10)及治疗组(n=10).分析各组大鼠一般状况、比较各组24 h尿蛋白定量变化情况、不同时点血生化指标水平、不同时点肾组织光镜检查结果 、不同时点肾组织MCP-1阳性表达情况.结果 (1)第2周、第8周模型对照组与治疗组24 h尿蛋白定量水平均高于相应时点的正常对照组大鼠24 h尿蛋白定量水平(P均<0.05),且治疗组24 h尿蛋白定量水平均分别显著小于模型对照组对应时点的24 h尿蛋白定量水平(P均<0.05);(2)第2周、第8周模型对照组与治疗组血Scr水平均高于相应时点的正常对照组大鼠血Scr水平(P均<0.05),且治疗组血Scr水平均分别显著小于模型对照组对应时点的血Scr水平(P均<0.05);第2周、第8周模型对照组与治疗组血Alb水平均低于相应时点的正常大鼠血Alb水平(P均<0.05),且治疗组血Alb水平均分别显著高于模型对照组对应时点的血Alb水平(P均<0.05);(3)光镜HE染色结果 :经光镜检查,正常对照组大鼠肾小球、肾间质、肾小管等均正常.第2周末时,模型对照组少数大鼠肾小球存在基质与系膜细胞轻度增生,有少量肾小球包氏囊厚度增大,球囊发生粘连现象,少量肾小管出现扩张,剩余大鼠的肾组织无显著异常现象;第8周末时,模型组大鼠肾小球存在局灶节段硬化的现象,出现包氏囊厚度增加以及球囊出现粘连,某些肾小管出现萎缩,部分肾间质出现纤维化现象,且在光镜下可探查局灶性炎症细胞发生浸润反应.在同一时间节点,治疗组大鼠肾脏病变较模型组大鼠要更加轻微;(4)第2周、第8周模型对照组与治疗组MCP-1在肾组织阳性表达指数均高于相应时点的正常大鼠MCP-1在肾组织阳性表达指数(P均<0.05),且治疗组第2中、第8周时MCP-1在肾组织阳性表达指数均分别显著小于模型对照组对应时点的MCP-1在肾组织阳性表达指数(P均<0.05).结论 黄葵胶囊能够降低ADR肾病大鼠24 h尿蛋白量、血Scr、MCP-1阳性表达指数及提高血Alb水平,改善大鼠肾组织功能.

2020

2021/07/20

查看

一种新型大鼠高脂血症急性胰腺炎模型的构建和评价

背景与目的:目前高脂血症急性胰腺炎(HTG-AP)研究中,动物模型的构建方法尚不统一,且模型制备有一定困难.故本研究探讨一种采用高脂血症诱导物poloxamer-407(P-407)联合L-精氨酸构建大鼠HTG-AP模型的新方法.方法:将72只雄性SD大鼠随机均分为正常对照组和低(0.12 g/kg)、中(0.25 g/kg)、高(0.50 g/kg)3个剂量P-407组.正常对照组大鼠不予干预,其余3组大鼠分别腹腔注射各自剂量的P-407,1次/d诱导高脂血症,每组分别于1、2、4周后随机各取6只大鼠,腹腔注射20％ L-精氨酸(2.5 g/kg)2次(间隔1h)诱导胰腺炎,并于24 h后剖杀,取血检测各组大鼠血清肝肾功能指标以及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LIPA)水平,取胰腺组织观察组织病理学变化并评分.结果:各剂量P-407组与正常对照组比较,血清肝肾功能指标在各时间点均无明显变化(均P＞0.05);而血清TG、TC水平在每个时间点均明显升高,且呈时间与剂量依赖性(均P＜0.05),其中低剂量P-407组各时间点TG水平未达到HTG-AP血脂标准(TG＞11.3 mmol/L),而高、中剂量P-407组分别在实验1、2周后TG水平达HTG-AP血脂标准.各剂量P-407组与正常对照组比较,血清AMY、LIPA明显升高,胰腺病理损伤评分明显增加,且均呈明显的时间与剂量依赖性(均P＜0.05).结论:采用适当剂量的P-407(0.25～5.0 g/kg)联合L-精氨酸的方法可在短时间内(1～2周)构建稳定的大鼠HTG-AP模型.该模型操作简便,可靠性好,可为相关领域的研究提供便利的工具.

2020

2021/07/20

查看

针刀松解联合丹参注射液关节腔注射治疗骨性关节炎模型兔

背景:丹参注射液与针刀松解术都是临床中治疗骨关节炎很常用的技术,目前缺乏对2种治疗方法联合使用的研究.目的:对比单独使用针刀松解术、单独使用丹参注射液与两种方法联合使用治疗兔模型骨关节炎的效果.方法:实验方案经黑龙江中医药大学动物实验伦理委员会批准.50只新西兰白兔分为5组:空白对照组;模型组;丹参注射液组;针刀组;针刀联合丹参注射液组.除空白对照组外,其他4组兔均制备膝关节骨关节炎模型.造模成功后,对针刀组兔内外侧支持带、内外侧膝眼,膝关节上方髌上囊、股四头肌各肌肌腹,膝关节内侧股薄肌肌腹及止点、收肌肌群肌腹及止点和胫骨平台附近部位进行针刀松解;空白对照组及模型组兔关节腔注射生理盐水0.3 mL;丹参注射液组兔关节腔每次注射0.3 mL丹参注射液;针刀联合丹参注射液组:每周进行1次针刀治疗同针刀组,每次针刀干预之后,关节腔注0.3 mL丹参注射液.上述干预每周1次,持续5周.对各组兔膝关节软骨进行大体观察及病理切片组织学观察,ELISA检测关节液白细胞介素1、肿瘤坏死因子α水平.结果 与结论:①大体观察:模型组膝关节磨损较为严重,针刀组、丹参注射液组、针刀联合丹参注射液组膝关节轻度磨损;②病理切片评分:丹参注射液组评分略高于针刀组和针刀联合丹参注射液组差异无显著性意义;③ELISA检测结果:针刀联合丹参注射液组白细胞介素1、肿瘤坏死因子α水平显著低于或针刀组或丹参注射液组(P＜0.05);④结果说明,在兔膝关节骨关节炎模型中降低白细胞介素1、肿瘤坏死因子α水平方面,针刀松解术结合丹参注射液关节腔注射治优于单独使用针刀或单独使用丹参注射液关节腔注射.

2020

2021/07/20

查看

新型季铵盐戊二醛消毒液杀菌效果评价

为了评价一种新型季铵盐戊二醛消毒液的杀菌效果,采用喷雾消毒法,比较5种市售常用消毒液(复合过氧乙酸、季铵盐戊二醛、微酸性次氯酸、漂白水、乙醇)的喷雾消毒效果;进一步采用悬液定量杀菌试验,比较季铵盐戊二醛和复合过氧乙酸对大肠埃希菌(E.coil)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、绿脓杆菌(P.aeruginosa)和白色念珠菌(C.albicans)的杀灭效果.喷雾消毒结果显示,季铵盐戊二醛1∶100倍稀释和复合过氧乙酸1∶24倍稀释下喷雾杀灭率达100％;悬液定量杀菌试验结果显示,季铵盐戊二醛1:1 000倍稀释对S.aureus的杀灭对数值＞7,1∶500倍稀释对Ecoil杀灭对数值＞7,1∶ 100倍稀释对P.aeruginosa的杀灭对数值＞7;复合过氧乙酸1∶1000倍稀释液对E.coil、S.aureus、P.aeruginosa的杀灭对数值均＞7;季铵盐戊二醛和复合过氧乙酸1∶500倍稀释对C albicans的杀灭对数值均＞6,杀菌效果均达标.表明新型季铵盐戊二醛和复合型过氧乙酸消毒液对E.coil、S.aureus、P.aeruginosa及C.a/bicans均有强的杀灭能力.

2020

2021/07/20

查看