Akt-Kv4.3-CaMKⅡ在有氧运动抑制压力负荷小鼠心肌肥厚中的作用及其机制

目的 探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)-离子通道Kv4.3(Kv4.3)-钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在有氧运动抑制压力负荷小鼠心肌肥厚中的作用及其机制.方法 60只实验小鼠均分为5组:假手术(SHAM)组、主动脉缩窄手术(TAC)组、假手术+有氧运动(SHAM+E)组、主动脉缩窄术+有氧运动(TAC+E)组,主动脉缩窄术+有氧运动+Akt抑制剂Perifosine(TAC+E+Peri)组.高分辨率小动物超声系统评价小鼠心功能及肥厚程度,麦胚凝集素(WGA)染色检测心肌细胞横截面积;荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ANP表达,Western blot检测蛋白心房钠尿肽(ANP)、p-Akt、Kv4.3、p-CaMKⅡ表达水平.结果 与SHAM组相比,TAC促进心肌肥厚,恶化心功能(P<0.01).给予有氧运动训练后,TAC+E组较TAC组小鼠心功能改善,心肌肥厚程度减轻(P<0.01).同时Western blot检测显示,TAC组较SHAM组p-Akt、Kv4.3表达降低,p-CaMKⅡ上调(P<0.01);TAC+E组p-Akt和Kv4.3表达较TAC小鼠增加,p-CaMKⅡ下调(P<0.01).而给予Akt抑制剂Perifosine后,相比于TAC+E组,TAC+E+Peri组心功能恶化、心肌肥厚程度和ANP表达增加,心肌细胞横截面积增大,同时伴随Kv4.3表达降低、p-CaMKⅡ增高(P<0.01).结论 有氧运动训练能够通过调节Akt-Kv4.3-CaMKⅡ信号通路抑制压力负荷心肌肥厚.

2020

2021/07/20

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免疫缺陷小鼠和人源化小鼠模型在干细胞质量控制中的应用

干细胞具有自我更新和多向分化的能力,在治疗糖尿病、脑损伤、急性心梗等疾病的治疗中有着巨大的潜力.由于干细胞产品种类繁多、批次差异性大、性质复杂,因此干细胞产品临床前的质量控制尤为重要.干细胞作为活性外源物质具有免疫原性,免疫缺陷小鼠和人源化小鼠在干细胞质量控制中发挥极大作用.本文综述了干细胞的免疫学特性、总结了常用的免疫缺陷和人源化小鼠模型,概述了免疫缺陷和人源化小鼠模型在干细胞质量控制中的应用,以期为干细胞质量控制标准化提供资料和信息.

2020

2021/07/20

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CCR5拮抗剂新药理作用及机制研究进展

C-C趋化因子受体5(C-C chemokine receptor 5,CCR5)是G蛋白偶联受体家族成员,在多种细胞表面表达,CCR5与其特异性配体结合而发挥生物学作用.随着对CCR5 蛋白的深入研究发现,CCR5作为辅助受体不仅介导HIV的感染过程,还参与许多疾病的病理过程.因此,CCR5拮抗剂非抗HIV药理作用不断被发现,其抗肿瘤、抗炎、抗排异等活性作用的研究逐渐增多,拓宽了其临床适应症.本文简要综述了CCR5拮抗剂的新发现药理作用及机制研究进展,以期为CCR5拮抗剂的进一步研究和开发提供参考.

2020

2021/07/20

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斑马鱼白血病模型的研究进展

斑马鱼是一种脊椎动物有机体,因具有保守的造血过程和独特的实验优势,尤其适合用于研究人类白血病.目前,研究斑马鱼的最新技术包括转基因技术、基因组编辑技术和移植技术,通过这些技术现已构建了许多白血病模型.斑马鱼的通体透明与先进的谱系追踪和成像技术相结合,揭示了白血病发生、发展的许多细节.凭借这些优势,斑马鱼成为白血病研究中具有独特优势的模式生物之一,此外,基于斑马鱼的高通量药物筛选的进步有望加速新型白血病疗法的开发.

2020

2021/07/20

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旋毛虫肌幼虫期外泌体的分离和小RNA鉴定

目的 分离纯化旋毛虫肌幼虫分泌的外泌体,并进行鉴定,为研究旋毛虫免疫逃逸机制提供新的线索.方法 采用超速离心法提取旋毛虫肌幼虫期外泌体,通过透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析、免疫印记和小RNA测序对其进行鉴定.结果 旋毛虫肌幼虫期外泌体为有膜的泡状物,直径约80～200 nm,表达外泌体特异性标记蛋白CD63和Enolase,含1 266个已知的miRNA.结论 经形态、粒径及标记蛋白分析证实成功分离旋毛虫肌幼虫期外泌体,同时构建旋毛虫肌幼虫期外泌体的小RNA文库,鉴定出多种功能性小RNA,为深入研究旋毛虫肌幼虫期外泌体内小RNA分子的应用提供数据.

2020

2021/07/20

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胶原三股螺旋重复蛋白1基因真核表达载体的构建及其与microRNA-30b关系初探

目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系.方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+ 3'UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体.采用Nhe Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系.两组间比较采用独立样本t检验.结果 采用Nhe Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功.2 μg和4μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90％、89％和85％、83％.在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P＜0.05).而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P＜0.05).结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反.

2020

2021/07/20

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雷帕霉素对大鼠肾缺血再灌注后心肌损伤的作用及机制研究

目的 探究雷帕霉素(rapaycin,RAPA)对大鼠肾缺血再灌注(renal ischemia reperfusion,RIR)后远隔器官心脏损伤的影响.方法 40只大鼠随机平均分为四组:空白组、假手术组、RIR组和雷帕霉素处理组,每组10只.雷帕霉素处理组的大鼠接受雷帕霉素灌胃给药.术后24 h处死每组大鼠,收集血液,脾和心脏.测定血浆中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)的水平.用PAS染色半定量分析表示心脏病理损伤程度.TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况.流式细胞仪检测NKT细胞数量的百分比.RT-qPCR方法检测CXC趋化因子配体10(CXCL10)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factoR-1α,HIF-1α)mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达.结果 RIR组血清BUN值和SCr值高于假手术组.雷帕霉素处理组血清CK值和CK-MB值水平低于模型组.心脏病理损伤的半定量评分表明,雷帕霉素处理组的病理损伤评分明显低于RIR组.雷帕霉素处理组心脏和外周血NKT细胞百分比明显高于RIR组.雷帕霉素处理组脾NKT细胞百分比低于RIR组.雷帕霉素处理组HIF-1αmRNA和VEGF mRNA的表达程度低于RIR组.雷帕霉素处理组CXCL10 mRNA的表达水平高于RIR组.结论 RAPA可以显著上调CXCL10的表达水平,促进NKT细胞从脾到外周血在心脏中的集聚.RAPA还可以抑制HIF-1α表达水平从而对RIR后心脏发挥保护作用.

2020

2021/07/20

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P2RX7介导的细胞焦亡和凋亡参与TSA缓解的烟草烟雾暴露所致的小鼠子宫损伤过程

目的 探索 P2RX7 介导的细胞焦亡和凋亡是否参与了曲古抑菌素 A(trichostatin A,TSA)缓解的烟草烟雾(ciga-rette smoke,CS)暴露所致的雌性小鼠子宫损伤过程.方法 通过烟草烟雾(cigarette smoke,CS)暴露30 d方法 制备CS暴露小鼠模型,CS暴露的同时给予TSA进行治疗;HE 染色观察CS暴露后小鼠子宫组织形态学变化;Western blot 技术检测小鼠子宫肌层P2RX7,细胞焦亡相关蛋白(IL-1β、ASC、NLRP3和cleaved caspase-1)和细胞凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3和cleaved caspase-9)的表达水平;Real time-PCR技术检测 Hdac1,P2rx7,Il-1β和 Asc的mRNA转录活性.结果 HE 染色结果 显示,CS暴露后小鼠子宫肌层明显变薄,间质细胞和腺体数量明显减少;Western blot 结果 显示,TSA 明显抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织P2RX7、细胞焦亡和凋亡相关蛋白的表达;Real time-PCR 结果 显示,TSA 抑制了CS暴露诱导的小鼠子宫组织中 Hdac1,P2rx7 和Asc的mR-NA转录活性升高.结论 P2RX7 介导的细胞焦亡和凋亡参与了TSA 缓解的CS暴露所致的小鼠子宫损伤过程.

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2021/07/20

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绵羊肝脏、肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达分析

目的 探讨绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达谱,为虫体生长、发育调控特异性蛋白筛选奠定基础.方法 提取寄生于绵羊肝脏与肺脏棘球蚴原头节蛋白质样本进行SDS-PAGE分析后,利用iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析(LC-MS/MS)寄生于绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节蛋白质表达谱,通过Mascot软件和GO软件分析寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节的差异表达蛋白质.结果 本研究共鉴定了1229个有意义的蛋白质点,通过肝脏与肺脏比较有无差异性(肝脏原头节VS肺脏原头节)和调节趋势后获得217个差异表达蛋白质,在肝脏上调蛋白74个(脂肪酸绑定蛋白、a纤维蛋白原、环氧化物酶、过氧化氢酶、酰基COA合成酶、载脂蛋白A4、磷酸化酶、6-磷酸葡萄糖内脂酶、乙酰辅酶酰基转移酶、还有一些未鉴定的蛋白等);下调蛋白143个(乳酸脱氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、内质网氧化还原酶、肌动蛋白、肌球蛋白、天冬酰胺酶、铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、热休克蛋白90、胶原纤维Ⅰ,胶原纤维Ⅳ、波形蛋白、玻连蛋白、磷脂转运蛋白、磷酸甘油酸激酶).结论 本研究发现寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节蛋白质表达存在差异.

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2021/07/20

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沉默Hoxa9基因可促进胫骨骨折后的成骨分化及骨折愈合

背景:研究表明,Hoxa10基因受到miRNA的调节后与成骨分化存在一定的关联性,但有关Hoxa9在成骨分化和胫骨骨折愈合中的表达和功能尚未见报道.目的:初步探讨Hoxa9对体外骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其体内模型的骨折损伤的治疗作用.方法:①体外实验:在成骨诱导培养基中培养小鼠骨髓间充质干细胞,分别进行Hoxa9基因被shHoxa9沉默或被MSCV-Hoxa9过表达处理;②体内实验:构建胫骨骨折模型大鼠,分别用Hoxa9和shHoxa9干预.结果与结论:①体外实验qRT-PCR及Western blot检测显示,Hoxa9的过表达能够明显抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化(P<0.05),细胞中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均下调(P<0.05),细胞中钙化结节的数量、成骨分化能力及碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05),而沉默Hoxa9的表达可逆转上述现象;②体内实验组织学染色结果表明,经Hoxa9干预的大鼠组织中骨性损伤明显增加,未发现组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨,shHoxa9干预大鼠显示骨的大小和数量明显增加,检测到组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨;③体内实验qRT-PCR及Western blot检测发现,Hoxa9干预的大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均下调(P<0.05);而shHoxa9组大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均上调(P<0.05);④上述数据说明,沉默Hoxa9基因可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,进而促进骨折愈合.

2020

2021/07/20

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