广州市鼠形动物肠道产ESBL大肠埃希菌分布及病原特征分析

目的 获得鼠形动物肠道产ESBL大肠埃希菌分布特征、菌型特点及相关耐药机制.方法 2016年9月-11月,在广州市城区内某居民区捕捉鼠形动物.从鼠形动物肠道内容物中分离耐头孢噻肟大肠埃希菌并进行产ESBL表型确认实验.Vitek2 compact进行产ESBL大肠埃希菌的抗生素敏感实验.PCR检测产ESBL大肠埃希菌的CTX-M、TEM、SHV和OXA等ESBL基因,并测序鉴定CTX-M亚型.对CTX-M大肠埃希菌进行MLST和PFGE分析.结果 共捕获鼠形动物123只,包括57只黄胸鼠、54只褐家鼠、11只臭鼩睛和1只黑毛鼠.分离到35株耐头孢噻肟大肠埃希菌,经表型确认实验证实全部是产ESBL菌株,检出率为28.5％(35/123).35株产ESBL菌株对氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟、环丙沙星以及左氧氟沙星的耐药率很高,分别为100％(35/35)、91.4％(32/35)、97.1％(34/35)、100％(35/35)、100％(35/35)、88.6％(31/35)、80％(28/35)和74.3％(26/35).35株菌一共检出CTX-M耐药基因37个,有2株菌各携带2种CTX-M耐药基因,其中blactx-m-79 23株,blactx-m-55 6株,blactx m123 4株,blactx-m-15 2株,blactx-m-65和blactx-m-27各1株.MLST结果发现鼠形动物肠道分离的产ESBL大肠埃希菌具有遗传多样性,无优势克隆.结论 鼠形动物产ESBL大肠埃希菌的耐药率很高,产ESBL耐药机制主要是菌株携带CTX-M型基因.本研究检出的几种CTX-M型ESBL基因也见于人临床或健康人群菌株.MLST和PFGE的结果发现产ESBL大肠埃希菌具有遗传多样性.本研究结果表明鼠型动物是产ESBL大肠埃希菌的重要储存宿主.

2020

2021/07/20

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雷公藤甲素干预脊髓损伤模型Thy-YFP转基因小鼠调节自噬及抑制细胞凋亡

背景:研究表明,在脑卒中大鼠模型中,雷公藤甲素治疗减少了缺血性病变区域面积、水含量和神经细胞死亡.此外,雷公藤甲素能通过抑制星形胶质细胞增生、小胶质细胞活化和抑制炎症反应促进脊髓损伤修复.目的:研究雷公藤甲素对Thy-YFP转基因小鼠脊髓损伤后细胞自噬和细胞凋亡的影响,探讨雷公藤甲素对脊髓损伤的保护作用及机制.方法:将60只Thy-YFP转基因小鼠随机分为4组,分别是假手术组、二甲基亚砜组、甲基强的松龙组和雷公藤甲素组.假手术组只进行椎板切除术,不损伤脊髓;其他3组建立脊髓损伤模型.雷公藤甲素组、二甲基亚砜及假手术组小鼠术后立即分别腹腔注射雷公藤甲素[0.2 mg/(kg·d)]或等量5％二甲基亚砜-生理盐水溶液,连续给药7 d;甲基强的松龙组小鼠于术后30 min、6 h、24 h腹腔注射甲基强的松龙溶液(30 mg/kg).BMS评分检测小鼠运动功能恢复情况,苏木精-染色及Nissl染色法检测各组脊髓组织恢复情况,免疫印迹及免疫荧光染色检测各脊髓组织中自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、p62及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平.动物伦理获得河北北方学院批准(W20200002).结果与结论:①雷公藤甲素及甲基强的松龙组脊髓损伤后运动功能改善,神经细胞死亡减少;②雷公藤甲素处理后自噬相关蛋白LC3B上调,p62降低,细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bax降低,抗凋亡蛋白Bcl-2升高;③结果表明,雷公藤甲素能促进脊髓损伤后运动功能恢复,其机制与促进自噬和抑制凋亡有关.结果提示雷公藤甲素可能对脊髓损伤具有潜在的神经保护作用.

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2021/07/20

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小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

目的 建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测.方法 选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证.同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测.结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×101 ～1×109)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/μL.重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5％.检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性.79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78％.建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47％.结论 建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测.

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2021/07/20

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地龙及其混淆品原动物的形态及DNA双重条形码鉴定

目的 基于线粒体cytochrome coxidase Ⅰ (CO Ⅰ)和16 S rRNA基因开发DNA双重条形码鉴定方法,由此验证并补充形态鉴定,以期建立一种准确、有效地鉴定地龙及混淆品原动物的方法.方法 对收集到的66份样品依据形态特征进行初步鉴定,使用优化后的引物同时扩增CO Ⅰ和16 S rRNA序列.优化一步法双重PCR实验条件.用MEGA 5.1计算地龙及其混淆品的种内、种间遗传距离,基于K2P模型构建NJ树.结果 COⅠ和16 S rRNA双重DNA条形码鉴定与形态鉴定结合,可准确鉴别地龙及混淆品原动物.结论 形态鉴定是分子鉴定的基础,分子鉴定是形态鉴定的有力补充.二者结合可最大程度地实现地龙及其混淆品原动物的准确鉴定.DNA双重条形码鉴定方法也可为地龙药材鉴定以及其他动物药材的分子鉴定提供参考.

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2021/07/20

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PCR鉴定骨肽类制剂中动物源性成分

目的 基于分子鉴定技术建立适用于骨肽类制剂的种属鉴定方法,并对部分国内骨肽类制剂生产企业所使用的骨骼原材料的种属来源进行鉴定.方法 以骨肽生产过程中的热压提取中间体作为供试品,采用优化的CTAB法提取核酸,通过PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳进行动物源性成分鉴定.结果 采用成功建立的适用于骨骼热压提取中间体的鉴定方法对9家企业的样品进行检测,均只检出猪源性成分,未检出牛或羊源性成分.结论 9家企业均使用猪骨作为骨肽类制剂的原材料,符合相关药品标准规定.

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2021/07/20

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基于多角度光声介观成像方法的小动物肿瘤特异性成像

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2021/07/20

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酒精性股骨头坏死动物模型的研究进展

近年来,非创伤性股骨头坏死发病呈逐年上升的趋势.在我国,非创伤性股骨头坏死最常见的危险因素是应用糖皮质激素和长期摄入酒精,其中酒精性股骨头坏死已成为我国非创伤性股骨头坏死的首要危险因素[1] .迄今为止,酒精性股骨头坏死的发病机制尚不完全清楚,尽管多种学说的提出,目前仍缺乏行之有效的股骨头坏死防治方法 ,动物实验成为探索股骨头坏死发病机制的重要途经,更是进一步研究和评价股骨头坏死有效的治疗方法 的重要手段.传统的股骨头坏死模型通常通过直接破坏实验动物股骨头的血供而造模成功,其疾病进程与长年累月饮酒后发生的股骨头坏死显然不同,酒精性股骨头坏死有其独特之处.

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2021/07/20

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通过体外循环心脏手术实验比较两种全身麻醉方案的优劣

目的 比较评价小尾寒羊等大动物实验中氯胺酮和丙泊酚进行全身麻醉的优劣,探索更适合大动物实验的围术期麻醉管理策略.方法 选取雄性健康小尾寒羊36只,于2017年3月1日至12月1日在空军军医大学第一附属医院行二尖瓣反流模型构建手术.采用随机数字表法将实验室分为氯胺酮组和丙泊酚组,每组18只.氯胺酮组采用单纯肌内注射氯胺酮进行麻醉诱导,丙泊酚组采用丙泊酚复合芬太尼全凭静脉进行麻醉诱导.比较2组的一般资料、手术相关指标、血气及循环指标.结果 丙泊酚组麻醉诱导时间明显短于氯胺酮组[(3.2 ±2.5)min比(19.5±5.4)min],差异有统计学意义(P＜0.05).2组手术时间、体外循环时间、术后气管导管拔除时间及麻醉维持阶段异氟醚吸入时间、丙泊酚用量、死亡率差异均无统计学意义(均P ＞0.05).体外循环后丙泊酚组动脉血氧分压高于氯胺酮组,动脉血二氧化碳分压、呼气末二氧化碳分压低于氯胺酮组[(300 ±58)mmHg(1 mmHg =0.133 kPa)比(210 ±52)mmHg、(40±4) mmHg比(45 ±4)mmHg、(30 ±4) mmHg比(35 ±4) mmHg],差异均有统计学意义(均P＜0.05).气管插管前后丙泊酚组血流动力学更平稳.结论 在小尾寒羊的麻醉诱导过程中,相比于氯胺酮,丙泊酚复合芬太尼麻醉诱导时间短、插管容易、血流动力学稳定,更加安全、有效.丙泊酚复合芬太尼的围术期麻醉方案更适合大动物体外循环心脏手术实验.

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2021/07/20

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啮齿类动物子宫内膜异位症模型的研究进展

子宫内膜异位症为妇科的常见病、多发病.约5％～10％的育龄期女性患有子宫内膜异位症,且达50％的内异症患者合并不孕.子宫内膜异位症的发病机制尚不清楚,阐明子宫内膜异位症的发病机制尤为重要.已有很多报道利用动物模型对子宫内膜异位症的发病机制进行研究.本篇综述主要介绍啮齿类动物子宫内膜异位症的模型建立方法、应用及模型的特点.

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2021/07/20

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加减驻景方对脉络膜新生血管动物模型TLR-4、NF-κB和IL-6表达的影响

目的 观察加减驻景方对实验性CNV动物模型炎症信号因子表达的影响.方法 氪激光诱导BN大鼠建立CNV动物模型,造模后大鼠被随机分为4组:模型组、中药组、西药组和联合组.模型组大鼠用生理盐水灌胃,中药组用加减驻景方灌胃,西药组玻璃体腔注射康柏西普,联合组用加减驻景方灌胃和玻璃体腔注射康柏西普.光凝后7 d、14 d、21 d处死大鼠取材,通过免疫组织化学法、RT-qPCR和Western blotting技术检测CNV组织中TLR-4、NF-κB、IL-6 mRNA和蛋白的相对表达量.结果 (1)免疫组化:模型组和各治疗组TLR-4、NF-κB、IL-6蛋白表达均呈阳性,随光凝时间延长,各治疗组目的蛋白表达量均低于模型组,治疗组中西药组表达量最高,中药组次之,联合组最低(P<0.05).(2)RT-qPCR:模型组与各治疗组各目的基因mRNA相对表达量较空白组均显著增多(P<0.05).各治疗组目的基因mRNA相对表达量均低于模型组(P<0.05).治疗组NF-κB mRNA相对表达量由高到低依次为中药组、西药组和联合组(P<0.05).TLR-4 mRNA相对表达量联合组最低(P<0.05),西药组与中药组比较无统计学意义(P>0.05).IL-6 mRNA相对表达量中药组最低(P<0.05),西药组与联合组比较无统计学意义(P>0.05).(3)Western blotting:模型组与各治疗组目的蛋白相对表达量较空白组均显著增多(P<0.05).各治疗组目的蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05).西药组TLR-4蛋白相对表达量高于中药组和联合组(P<0.05).中药组NF-κB蛋白相对表达量高于西药组和联合组(P<0.05).中药组IL-6蛋白相对表达量低于西药组与联合组(P<0.05).均有统计学意义.结论 TLR-4/NF-κB/IL-6信号通路的激活促进了CNV的生成,加减驻景方通过抑制TLR-4/NF-κB/IL-6信号通路活性,发挥抑制CNV的作用.

2020

2021/07/20

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