米诺环素抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力研究

目的:研究米诺环素(minocycline,Mino)抑制炎症小体介导的细胞焦亡改善阿尔茨海默病认知能力的作用机制.方法:脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)诱导大鼠神经细胞株PC12构建神经细胞焦亡损伤模型,将细胞分为对照组、LPS组、LPS+Mino组,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹法检测炎症小体关键蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associat-ed speck-like protein containing CARD,ASC)、Caspase-1及pro-Caspase-1的水平以及焦亡执行蛋白Gasdermin-D(GSDMD)、p30-GSDMD的水平,酶联免疫吸附法检测培养基中白介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平.APP-PS1双转基因小鼠10只,随机分为对照组和实验组,实验组采用50μg的米诺环素灌胃给药,分别在给药前和给药后3周采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知记忆能力,处死小鼠后取海马CA3区检测组织中NLRP3、ASC、Caspase-1及pro-Caspase-1的蛋白表达,以及炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α、焦亡执行蛋白GSDMD、p30-GSDMD的水平.结果:米诺环素可以抑制LPS诱导的细胞凋亡,LPS+Mino组细胞活力显著高于LPS组,而细胞凋亡率显著低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05).而LPS+Mino组中炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于LPS组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于LPS组,GSDMD高于LPS组,培养基中IL-1β、IL-18、TNF-α 的水平低于LPS组,差异具有统计学意义(P<0.05).动物实验中,米诺环素可以显著改善小鼠的认知能力;Morris水迷宫实验中,小鼠潜伏期缩短,相比对照组具有统计学意义(P<0.05).同时小鼠穿越平台次数明显增多,相比对照组具有统计学意义(P<0.05).实验组小鼠炎症小体关键蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1的表达低于对照组,同时焦亡执行蛋白p30-GSDMD低于对照组,GSDMD高于对照组,炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α的水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:米诺环素可以通过抑制炎症小体活化,抑制神经细胞焦亡的发生,同时改善阿尔茨海默病小鼠的认知能力.

2020

2021/07/20

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不同浓度顺铂对C57BL/6小鼠卵巢功能的影响

目的:通过研究不同浓度顺铂对C57BL/6小鼠卵巢功能的影响,探讨能够引起C57BL/6小鼠卵巢早衰的最低有效浓度,从而为临床研究提供一种安全、可靠、便捷的早发性卵巢功能不全(POI)模型构建方案.方法:随机选择SPF级雌性C57BL/6小鼠(6～8周)60只,随机分为对照组、剂量1.0组(1 mg/kg)、剂量1.5组(1.5 mg/kg)、剂量2.0组(2 mg/kg),给药组均连续腹腔注射7d顺铂.结果:1.0组小鼠卵巢受损较轻,卵巢组织形态、卵泡计数及血清激素水平与对照组相比,变化程度较小,无法用于建模;1.5组小鼠卵巢受损较重,体质量下降平稳,一般状态好,死亡率低,动情周期恢复率低,卵巢组织形态、卵泡计数及血清激素水平与对照组差异均有统计学意义(P<0.05),但变化较为平缓,适宜建立POI模型;2.0组小鼠卵巢受损严重,体质量下降明显,全身状况差,出现持续的动情间期,卵巢组织形态、卵泡计数及血清激素水平与对照组差异均有统计学意义(P<0.05),但变化大,不利于实验研究.结论:1.5 mg/kg为建立C57BL/6小鼠POI模型的合适有效浓度,采用该给药方案建立的模型,卵巢组织损伤较为稳定,能够较好地模拟POI患者的激素水平变化,动物耐受性好,有利于治疗研究的开展,适用于POI治疗方案的评价.

2020

2021/07/20

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薄荷油叠加气候箱建立阳虚寒凝型膝痹模型兔

背景:课题组前期用石膏铁丝固定法建立了兔膝骨性关节炎模型,但尚未建立膝骨性关节炎的中医证型的模型.目的:实验拟通过薄荷油叠加气候箱探索建立兔阳虚寒凝型膝痹模型的可行性,为以后的研究奠定基础.方法:将32只实验动物随机分为正常组、模型组、阳虚组、阳虚寒凝组,除正常组外均予石膏制动法固定兔膝关节8周;阳虚组在固定第7周开始每日上午予薄荷油灌胃2周;阳虚寒凝组每日置于4℃的气候箱1.5h,在制动6周后叠加阳虚组操作.灌胃7,14d后用ELISA检测血清中促甲状腺素T4变化:待膝痹造模达到8周后,取关节软骨、半月板、滑膜行组织学评分;同时观察动物行为学,采用红外线热成像仪检测体表温度变化.实验方案经新疆医科大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号为IACUC-20170222026).结果 与结论:①行为学中可观察到阳虚寒凝组出现相关阳虚寒凝证的症状;②阳虚寒凝组兔足部温度低于正常组和模型组(P＜0.05);③阳虚组和阳虚寒凝组血清T4值均低于正常组(P＜0.05);④膝关节Mankin评分:阳虚组、阳虚寒凝组均较正常组高(P＜0.05)较模型组低(P＜0.05);⑤半月板、滑膜苏木精-伊红显示,阳虚组、阳虚寒凝组与模型组比较,组间差异不明显:⑥从组织形态上,结合T4、红外线热成像仪、行为学观察结果,可以说明薄荷油叠加气候箱在一定程度上模拟了疾病状态,可以为阳虚寒凝型骨关节炎模型建立提供一定的参考.

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2021/07/20

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电针干预脊髓损伤大鼠受损节段缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的表达

背景:作者发现,中医"痿病"从气血论治理论与脊髓损伤神经修复的关键环节在于改善组织血氧微环境有着惊人的相似,提出假设:电针刺激可通过干预缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子信号转导,改善脊髓血氧微环境从而促进神经再生.目的:探讨电针干预对脊髓损伤大鼠受损节段缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子表达的影响.方法:120只SD雌性大鼠以微型血管夹夹闭脊髓,保持夹闭状态20 s制作脊髓夹伤模型,随机分为3组:即阿是穴电针组、足阳明胃经电针组和空白对照组,每组40只.电针组造模后第3天开始接受每日1次的电针治疗,阿是穴电针组选择2个阿是穴、足阳明胃经电针组选择双侧伏兔、足三里穴,每周5次.于干预后1,2,3,4,5周对大鼠进行BBB评分之后分别取出损伤的脊髓组织标本,行病理组织观察,并采用免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR技术及Western blot检测损伤脊髓缺氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的基因和蛋白表达.实验方案经广西中医药大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号201712001).结果与结论:①阿是穴电针组及足阳明胃经电针组大鼠的下肢功能评分、缺氧诱导因子1α 及血管内皮生长因子基因及蛋白表达明显高于未经电针干预的对照组;②随着干预时间的推移阿是穴电针组及足阳明胃经电针组的神经元数量均明显高于空白对照组;③结果说明,电针干预可以有效改善脊髓损伤大鼠的下肢功能评分、增加神经元的数量、上调缺氧诱导因子1α 及血管内皮生长因子的mRNA及蛋白表达,从而有效促进脊髓神经功能的修复.

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2021/07/20

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改良法制作兔右冠状动脉缺血再灌注损伤模型

目的 探讨兔右冠状动脉穿线结扎后放松建立兔右冠状动脉缺血再灌注损伤模型的可行性.方法 新西兰大白兔20只,雌雄不限,体重(2.5±0.3)kg,分为两组,缺血再灌注组14只,假手术组6只.假手术组右冠状动脉只穿线不结扎,另一组通过预置缝线结扎30 min后松开线结构建兔右冠状动脉缺血再灌注损伤模型.记录心电图情况、结扎前后肌酸激酶同功酶变化,术后软管插入离体心右冠状动脉验证结扎效果.结果 ST段明显抬高、软管插入右冠状动脉不易拉出并肌酸激酶同功酶升高8例,制模成功率57％(8/14).假手术组上述指标无明显变化.结论 本实验改良制作右冠状动脉缺血再灌注模型,造模成功.

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老年和青年SD大鼠外周血及免疫细胞分型测定分析

目的 比较老年SD大鼠和青年SD大鼠外周血和免疫细胞分型指标差异.方法 12月龄和8周龄的SD大鼠进行外周血细胞计数、白细胞分类、免疫脏器系数、外周血免疫细胞分型、脾免疫细胞分型和脾T细胞P16表达量的检测.结果 与青年大鼠相比,老年大鼠外周血白细胞计数,淋巴细胞百分比下降;红细胞,血红蛋白,中性粒细胞百分比,嗜酸性粒细胞百分比和嗜碱性粒细胞百分比升高;血小板和单核细胞百分比未见差异.胸腺系数、脾系数,老年大鼠与青年大鼠未见差异.外周血免疫细胞分型中,老年大鼠辅助T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞和单核细胞比例升高,B细胞比例降低;脾淋巴细胞分型检测结果显示,老年组大鼠B细胞(CD45RA)低于青年组大鼠(P<0.01),两组CD3未见差异.老年雄性大鼠脾T细胞P16 mRNA表达量与青年雄性大鼠相比有明显升高(P<0.05).结论 老年大鼠外周血细胞及免疫细胞分型改变.脾T细胞P16表达可能作为免疫衰老的生物学标志.文中对检测结果进行了比较分析,将为研究老年疾病及衰老动物模型提供基础数据.

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2021/07/20

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利巴韦林用于病毒感染性疾病国内外文献分析

目的 为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗提供参考.方法 计算机检索Ovid Medline,Ovid EMBase,Cochrane Central Register of Controlled Trials(CENTRAL),以及中国知识基础设施工程(CNKI)数据库,检索时限均为建库至2020年3月10日,对符合纳入标准的文献进行描述性分析,探讨利巴韦林用于感染性疾病的有效性和安全性.结果 初筛文献392篇,筛选后最终纳入利巴韦林用于病毒感染性疾病文献99篇,其中关于流行性感冒37篇、获得性免疫缺陷综合征(HIV)9篇、严重急性呼吸综合征(SARS)8篇、中东呼吸综合征(MERS)13篇、COVID-191篇、寨卡病毒(ZIKV)3篇、登革热病毒(DENV)9篇、拉沙病毒(LV)8篇、汉坦病毒(HV)5篇、基孔肯尼亚病毒(CHIKV)6篇.流行性感冒治疗中,多采用利巴韦林与其他药物(多为奥司他韦)联合抗病毒治疗.体外试验显示,利巴韦林对HIV,SARS-CoV,MERS-CoV均有抑制作用,但临床研究效果不确切;DENV动物实验显示无效;ZIKV,HV,CHIKV体外试验显示有效;建议重新评估对LV的临床疗效.利巴韦林用于COVID-19的研究仅1篇.结论 仍需开展更多规范的回顾性临床病例研究,验证利巴韦林治疗COVID-19的疗效.

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2021/07/20

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延龄草甾体皂苷类成分对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用

目的 探讨延龄草中4个甾体皂苷类单体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法 将96只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(I/R组),尼莫地平片组(Contrast 1组),银杏叶片组(Contrast 2组),偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y2T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-〔α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)〕-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称Y3T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-〔α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)〕-β-D-吡喃葡萄糖苷(Y4T组)中、高剂量组,偏诺皂苷元(YP组)中、高剂量组.采用改良Zea Longa线栓法构建局灶性脑I/R损伤动物模型,Sham组不插入线栓,其余操作同I/R组,各给药组在造模手术前连续给药8 d,造模后各组进行神经功能缺陷评分,然后麻醉处死,取材检测.干湿称重法检测大鼠脑指数,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法检测大鼠脑梗死体积,试剂盒法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸的活性和一氧化氮(NO)、Ca2+的含量,酶联免疫吸附试验检测大鼠脑组织中炎症介质肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的变化,苏木素-伊红(HE)染色观察海马CAI区和皮质层区病理学改变.结果 与I/R组比较,给药各组能明显降低脑I/R大鼠翻正反射恢复时间、减轻I/R部位的病理损伤,降低脑组织含水量、减少脑梗死体积,提高SOD活性,降低MDA、谷氨酸、NO和Ca2+含量,抑制激活小胶质细胞释放TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子,病理形态学有明显改善,差异均有统计学意义(P<0.05;P<0.01).结论 延龄草中4个甾体皂苷类单体对局灶性脑I/R损伤具有明显保护作用,其机制可能与抗炎及抗氧化应激有关.

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2021/07/20

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梁河家鼠鼠疫疫源地鼠疫噬菌体的分离及其流行病学意义

目的 调查梁河县家鼠鼠疫疫源地宿主动物中是否携带鼠疫噬菌体,并探讨其流行病学意义.方法 2017年采集梁河家鼠鼠疫疫源地4个曾流行过鼠疫乡镇的鼠类标本,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,同时挑取部分噬菌体进行电镜扫描.结果 共获得338份标本(黄胸鼠234只,臭鼩鼱43只,其余61只),分离到29株鼠疫噬菌体,总分离率为8.58％(29/338),其中19株分离自黄胸鼠,分离率为8.12％(19/234),8株分离自臭鼩鼱,分离率为18.6％(8/43);4个乡镇全部有分离到鼠疫噬菌体,其中遮岛镇分离率最高为16.13％(5/31);初次分离这些鼠疫噬菌体时,其噬斑在双层平板上表现为大(直径≥2.0 mm)、中(≥1.0 mm,≤2.0 mm)及小(≤1.0 mm)3种噬斑;2株有代表性噬菌体皆为肌尾病毒科噬菌体.结论 梁河家鼠鼠疫疫源地中普遍存在鼠疫噬菌体,黄胸鼠是主要的携带宿主,所分鼠疫噬菌体为肌尾病毒科噬菌体且具有多态性,值得进一步研究.

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2021/07/20

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MRTF-A诱导自噬从而缓解脑缺血再灌注大鼠皮层神经细胞损伤

目的:研究心肌素(myocardin)相关转录因子A(MRTF-A)对脑缺血再灌注大鼠皮层神经细胞损伤的影响.方法:90只SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注模型组和MRTF-A实验组.采用慢病毒注射及大脑中动脉栓塞法处理动物.Longa's 5分法进行神经功能评分;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评价脑梗死体积;透射电镜(TEM)观察自噬溶酶体形成;Western blot检测MRTF-A、自噬相关蛋白(LC3-I、LC3-II和beclin-1)及凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)的表达水平;TUNEL联合免疫荧光法检测神经细胞凋亡率与LC3蛋白表达分布的相关性.结果:假手术组、模型组和实验组的神经功能评分分别为0、2.57±0.20和1.71±0.18,脑梗死体积百分率分别为0、(31.67±2.73)％和(12.00±1.16)％;与模型组相比,实验组的神经功能评分和梗死体积百分率均显著降低(P<0.01).TEM结果显示,模型组神经细胞核膜结构不完整,细胞器肿胀变形,伴随有自噬溶酶体形成;实验组神经细胞损伤较模型组有所缓解,自噬溶酶体形成增多.Western blot结果显示,造模后Bcl-2/Bax比值显著下降(P<0.01);与模型组相比,实验组LC3-II/LC-I和Bcl-2/Bax比值及beclin-1和MRTF-A蛋白表达量均显著升高(P<0.05或P<0.01).与假手术组[(3.31±2.72)％]相比,模型组神经细胞凋亡率[(57.02±11.04)％]明显升高(P<0.01);高表达MRTF-A后,实验组神经细胞凋亡率[(42.10±5.20)％]较模型组明显降低(P<0.05).假手术组的LC3蛋白分布均匀呈弥散状;与模型组对比,实验组的LC3蛋白荧光强度显著上升(P<0.05),在神经细胞胞浆中聚集明显,呈斑片状.结论:脑缺血再灌注损伤诱导大鼠皮层神经细胞凋亡和轻微自噬反应;在皮层神经细胞中上调MRTF-A表达后,MRTF-A可通过增强自噬水平有效抑制脑缺血再灌注过程中皮层神经细胞损伤.

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