静脉途径SHIV-1157ipd3N4恒河猴感染模型

> 静脉途径SHIV-1157ipd3N4恒河猴感染模型

中文名称Chinese name	静脉途径SHIV-1157ipd3N4恒河猴感染模型
编号Model number
英文名称English name	Venous route SHIV-1157ipd3N4 Ganges RIver monkey infection model
物种Species name
品系Strain name
人类疾病Human diseases
传染性Infectivity	是
微生物Microorganism
类别Category	感染性动物模型
造模因素Modeling factors	感染毒株为SHIV-1157ipd3N4，中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×102 TCID50/mL。
制作方法Making method	1、实验用病毒：感染毒株为SHIV-1157ipd3N4，中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×102 TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：10只恒河猴随机分为6个剂量组，由10-1至10-6，分别经后肢静脉感染稀释好的病毒液1mL。G1005V、G1006V、G1007V（10-1 ，50TCID50），G1008V、G1009V 、G1010V（10-2，5TCID50），G1011V、G1012V、G1013V（10-3，0.5TCID50），G1014V（10-4，0.05TCID50）。 4、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、70及84d采集EDTA抗凝血4mL，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数和血浆结合抗体水平。 5、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴血浆病毒载量的测定：TRIzol法提取血浆中病毒RNA，Quantitect SYBR Green RT-PCR Kit测定血浆病毒RNA载量。 6、SHIV-1157ipd3N4静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。 7、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度检测：恒河猴血浆样品灭活后系列稀释，用“人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）”检测交叉性体液免疫反应，高于Cut-off值的最大血浆稀释度定义为SHIV特异性总结合抗体滴度。
生物学特征Biological characteristics	病原血清学检测出病原。
医学用途Medical use	主要用于艾滋病防控研究和疫苗、药物评价。
临床表现Clinical manifestation	无。
病理表现Pathology	无。
发病天数Days of onset
发病过程Pathogenesis process
临床诊断Clinical diagnosis	1、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果 50 TCID50感染猴中G1005V和G1007V均在感染后7d就检出血浆病毒载量，G1006V也在14d阳转。5 TCID50感染猴G1008V、G1009V、G1010V的血浆病毒载量则均出现在感染后14d。6只感染猴高峰期的载量都在105 -107copies/mL之间，42d后载量水平均有所下降，但随后反弹（图1）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间未出现血浆病毒载量。图1 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 2、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 50 TCID50感染猴G1005V、G1006V、G1007V在感染后21d均有下降，随后反弹。5 TCID50感染猴中除G1010V外， G1008V和G1010V也在21d下降并反弹。G1009V则不降反升，但它在56d有一次大幅下降，但也仍然在1以上（图2）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间基本保持恒定。图2 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 3、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果各剂量组之间在CD4+T细胞绝对数上变化基本相同。感染猴中除了50 TCID50感染猴G1007V和5 TCID50感染猴G1008V在实验后期有升高外，其它4只在整个实验期间基本保持水平（图3）。未感染的4只实验猴则整体呈现逐渐上升的趋势。图3 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数 Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4 4、SHIV-1157ipd3N4静脉感染恒河猴外周血总结合抗体滴度测定 50 TCID50感染猴G1005V和G1007V的抗体在感染后21d就出现了，另一只感染猴G1006V也在28d阳转。与此同时，5 TCID50感染猴中只有G1009V在21d抗体阳性，其它两只感染猴G1008V和G1010V抗体阳转时间为42d。42d以后，6只感染猴之间的抗体水平逐渐接近了（图4）。0.5TCID50和0.05TCID50感染猴G1011V、G1012V、G1013V、G1014V在实验期间未检出抗体。图4 SHIV-1157ipd3N4静脉感染中国恒河猴外周血总结合抗体滴度 Fig.4 The titers of Ab in Chinese-origin rhesus macaques infected intravenously with SHIV-1157ipd3N4
评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success
保藏单位Preservation unit
参考文献Reference	1.丛喆，蒋虹，金光，陈霆，王卫，陶真，姚南，熊竞，吴芳新，陈志伟，魏强。SHIV1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉感染中国恒河猴有效浓度的确定。中国比较医学杂志，2011，21（4）：12-15。Titration of a Stock by Intravenous Inoculation of Chinese-Origin Rhesus Macaques. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011，21（4）：12-15. 2.Xue J, Cong Z, Xiong J, Wang W, Jiang H, Chen T, Wu F, Liu K, Su A, Ju B, Chen Z, Couto MA, Wei Q, Qin C. Repressive effect of primary virus replication on superinfection correlated with gut-derived central memory CD4(+) T cells in SHIV-infected Chinese rhesus macaques. PLoS One. 2013 Sep 2;8(9):e72295. 3.Wang W, Cong Z, Jiang H, Chen T, Jin G, Xiong J, Qin C, Wei Q. Comparison of viral burden and disease progression in Chinese-origin rhesus macaques infected with common experimentally applied chimeric virus: SHIV-1157ipd3N4, SHIV-162P3, or SHIV-KB9. J Med Primatol.2014 Aug;43(4):247-57.
录入/更新时间Date	12-03-20
备注Remarks

> 静脉途径SHIV-1157ipd3N4恒河猴感染模型

联系方式

快速导航