阴道途径SHIVSF162P3恒河猴感染模型

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中文名称Chinese name	阴道途径SHIVSF162P3恒河猴感染模型
编号Model number
英文名称English name	Vaginal route SHIVSF162P3 Ganges RIver monkey infection model
物种Species name
品系Strain name
人类疾病Human diseases
传染性Infectivity	是
微生物Microorganism
类别Category	感染性动物模型
造模因素Modeling factors	感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。
制作方法Making method	1、实验用病毒：感染毒株为SHIVSF162p3中国恒河猴细胞适应株，中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为1×104 TCID50/mL。 2、感染动物：选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A01、Mamu-A02、Mamu-B08、Mamu-B17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位，后肢抬高，暴露阴道口。用2mL预冷的无菌PBS清洗阴道。再将稀释好的适当浓度的病毒液1mL缓慢推入。实验猴保持此姿势30min。 4、SHIVSF162p3阴道感染猴样品采集和指标测定：感染采取小量多次的方法,共感染13次。前6次使用20TCID50的SHIVSF162p3,后7次使用30TCID50的SHIVSF162p3，间隔4-7d，进行阴道感染。在每次感染前及13次感染结束后,采EDTA抗凝血3mL，分别测定外周血CD4+/CD8+比值及血浆病毒载量。 5、SHIVSF162p3阴道感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、SHIVSF162p3阴道感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。
生物学特征Biological characteristics	血清学检测可检出病毒。
医学用途Medical use	主要用于艾滋病研究和药物评价。
临床表现Clinical manifestation	无。
病理表现Pathology	6只实验猴的CD4+/CD8+比值在某一段时间内均有一个急剧下降的过程，总体有一个下降的趋势。1-1在感染后37d CD4+/CD8+比值迅速从感染后31d的1.51下降到0.50，并且持续走低，到300d时，已降低到0.35。1-2和1-4总体没有太大的变化，但分别在感染后31d和37d有一个下降过程。1-2由27d的3.89直降到1.55，其后又迅速回升，始终徘徊在3.0附近；1-4由2.72直降到1.69，并维持在这个水平上，只在182d有一个小幅波动。1-3和1-5变化基本相同，分别在感染后45d和64d降到最低，并且出现倒置，其中1-5甚至降到0.5以下，其后反弹并一直维持在0.8-1.0之间。1-6与1-3、1-5趋势相同，变化幅度小，没有出现倒置，始终维持在1.0以上，最低值1.02出现在85d。
发病天数Days of onset
发病过程Pathogenesis process
临床诊断Clinical diagnosis	1、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血病毒载量结果 6只实验猴都先后出现了血浆病毒载量（图1）。1-1感染后27d出现载量，37d达到高峰（6.498×107copies/mL），57d载量检测阴性消失，但在85d载量再次出现，直至246d载量一直都维持在105copies/mL左右。1-2病毒载量出现最早，初次感染后的23d达到5.665×105copies/mL，27d达到高峰（2.1×107copies/mL），随后下降，至57d检测呈阴性，共持续了4周时间，并且一直到第246d都持续阴性。1-3和1-4的载量变化与2号相似，只是载量出现时间稍晚，1-3的载量出现在37d,高峰期在45d,也达到了107copies/mL的水平，但只维持了2周的时间；1-4比1-2晚4d出现载量，出现时载量也已达到105copies/mL的水平，高峰期出现在31d（4.72×106copies/mL），维持了3周左右的载量。不同的是，它们分别在感染后154d和203d出现一过性小幅反弹，载量水平只在103-104copies/mL之间。1-5和1-6的载量出现最晚，均出现在感染后50d,并且不连续，没有明显的高峰，始终维持在104-106copies/mL的水平。图1 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴血浆病毒载量结果 Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 2、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果 6只实验猴的CD4+/CD8+比值在某一段时间内均有一个急剧下降的过程，总体有一个下降的趋势。1-1在感染后37d CD4+/CD8+比值迅速从感染后31d的1.51下降到0.50，并且持续走低，到300d时，已降低到0.35。1-2和1-4总体没有太大的变化，但分别在感染后31d和37d有一个下降过程。1-2由27d的3.89直降到1.55，其后又迅速回升，始终徘徊在3.0附近；1-4由2.72直降到1.69，并维持在这个水平上，只在182d有一个小幅波动。1-3和1-5变化基本相同，分别在感染后45d和64d降到最低，并且出现倒置，其中1-5甚至降到0.5以下，其后反弹并一直维持在0.8-1.0之间。1-6与1-3、1-5趋势相同，变化幅度小，没有出现倒置，始终维持在1.0以上，最低值1.02出现在85d（图2）。图2 SHIVSF162p3小剂量多次阴道途径感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值 Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3 3、SHIVSF162p3阴道感染恒河猴外周血CD4+T细胞绝对数结果所有实验猴的CD4+细胞绝对数在感染50天内都基本保持稳定，在1000个/µL全血上下浮动，随后均有逐步下降，但下降幅度不大，最低值始终在600以上（具体数据未显示）。只有1-1下降幅度较大，到感染后274d时，已降到293个细胞/µL猴血（图3）。图3 SHIVSF162p3阴道途径感染恒河猴1-1 外周血CD4+T细胞绝对数的变化 Fig.3 The CD4+ T cell counts in Chinese-original rhesus macaques 1-1 infected IVAG with repeated low dose of SHIVSF162p3
评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success
保藏单位Preservation unit
参考文献Reference	1.丛喆，刘浩，朵建英，王卫，蒋虹，高虹，杨志伟，Sylvain Fleury,魏强，秦川。B亚型SHIVSF162p3中国恒河猴小剂量多次阴道粘膜感染。中国比较医学杂志，2011，21（2）：44-48。Efficient Repeated Low-Dose Intravaginal Infection with SHIVSF162p3 in Chinese-Origin Rhesus Macaques. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011，21（2）：36-43. 2.Bomsel M, Tudor D, Drillet AS, Alfsen A, Ganor Y, Roger MG, Mouz N, Amacker M, Chalifour A, Diomede L, Devillier G, Cong Z, Wei Q, Gao H, Qin C, Yang GB, Zurbriggen R, Lopalco L, Fleury S. Immunization with HIV-1 gp41 subunit virosomes induces mucosal antibodies protecting nonhuman primates against vaginal SHIV challenges. Immunity. 2011 Feb 25;34(2):269-80.
录入/更新时间Date	12-03-20
备注Remarks

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