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背景:线粒体凋亡通路是细胞凋亡中的重要通路,前期动物实验发现补肾壮督方可通过抑制线粒体凋亡通路改善椎间盘退变,但其作用机制还有待研究.目的:观察补肾壮督方含药血清对人髓核细胞线粒体凋亡通路关键蛋白的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制.方法:①37只SD雄性大鼠,随机分为正常组、低剂量中药组[0.506 g/(kg·d)]、中剂量中药组[1.012 g/(kg·d)]及高剂量中药组[2.024 g/(kg·d)],连续灌胃2周,灌胃结束后制备含药血清;②人髓核细胞随机分为正常组、模型组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组,模型组用200 μmol/L H2O2处理6h,正常组不进行任何处理,低、中、高剂量含药血清组造模后用体积分数为2％含药血清干预48 h.透射电镜观察髓核细胞的超微结构,流式细胞术检测髓核细胞凋亡率和线粒体膜电位,qPCR和Western blot检测Apaf1、Bcl-2、Bax及Cytc的表达.结果 与结论:①与正常组相比,模型组出现明显的细胞凋亡形态特征,髓核细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均显著增加(P＜0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P＜0.05);②补肾壮督方含药血清干预后,髓核细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均明显下降(P＜0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著增加(P＜0.05);③补肾壮督方含药血清可有效抑制髓核细胞凋亡,并呈剂量依赖性,可能通过减少Apaf1、Cytc、Bax蛋白及mRNA表达,增加Bcl-2蛋白及mRNA表达,抑制线粒体凋亡通路,从而改善椎间盘退变. |
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