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背景:课题组前期研究表明,葡萄糖依赖性促胰岛素多肽新型类似物DAIa2GIP对软骨细胞有保护作用,但其作用机制尚不清楚.目的:观察葡萄糖依赖性促胰岛素多肽新型类似物DAIa2GIP拮抗白细胞介素1β诱发软骨细胞线粒体凋亡的效应,同时探究其分子生物学机制.方法:提取SD大鼠幼鼠肋软骨细胞,SABC免疫组化染色法鉴定后,取传代培养第3代细胞不同处理分为6组:①正常对照组;②白细胞介素1β诱导组;③白细胞介素1β+DAla2GIP孵育组;④白细胞介素1β+DAla2GIP+pro3GIP(GIPR拮抗剂)孵育组;⑤DAla2GIP孵育组;⑥pro3GIP孵育组.药物处理48 h后进行线粒体膜电位及Annexin-V FITC kit(磷脂酰丝氨酸外翻分析)细胞凋亡检测、激光共聚焦显微镜细胞钙超载测定及ELISA法测定细胞色素C含量.实验方案经山西医科大学动物实验伦理委员会批准.结果与结论:①SABC免疫组化染色法显示,所提取细胞Ⅱ型胶原可显影,为软骨细胞;②线粒体膜电位保持程度:白细胞介素1β+DAla2GIP孵育组明显高于白细胞介素1β诱导组,均低于正常对照组;软骨细胞凋亡率:白细胞介素1β+DAla2GIP孵育组明显低于白细胞介素1β诱导组,均高于正常对照组;钙超载程度以荧光强度进行比较:白细胞介素1β+DAla2GIP孵育组明显低于白细胞介素1β诱导组,均高于正常对照组;软骨细胞线粒体细胞色素C的释放:白细胞介素1β+DAla2GIP孵育组显著低于白细胞介素1β诱导组(P＜0.01),均高于正常对照组(P＜0.01);上述4项指标,白细胞介素1β诱导组与白细胞介素1β+DAla2GIP+pro3GIP孵育组比较差异无显著性意义,两组均低于正常对照组;正常对照组、DAla2GIP孵育组及pro3GIP孵育组比较均差异无显著性意义;③结果说明,DALa2GIP孵育可以有效拮抗白细胞介素1β诱导的大鼠软骨细胞线粒体功能障碍,从而拮抗其所致的软骨细胞凋亡,这一过程中DALa2GIP可以有效降低细胞钙超载程度,并且减少细胞色素C等的释放. |
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