新型荧光靶向前哨淋巴结示踪剂的验证研究

背景与目的:示踪剂是前哨淋巴结活检的关键,传统荧光示踪剂无法靶向前哨淋巴结且荧光强度弱.探寻一种近红外荧光强度更大、穿透力更好的新型增强近红外荧光示踪剂聚甲川菁染料分子Cy754,并将其与利妥昔单抗(rituximab,Rit)结合形成新型近红外荧光靶向示踪剂Cy754-Rit.方法:化学合成新型增强近红外荧光示踪剂Cy754,检测其相对分子质量、激发光谱、吸收光谱等,将其与Rit进行直接偶联.测定Cy754-Rit标记率,检测新型示踪剂中单抗分子完整性和免疫活性.采用近红外成像仪将Cy754-Rit与吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)-Rit的荧光强度作比较,检测其安全限度,通过前哨淋巴结动物模型验证其前哨淋巴结的定位特性,并与Cy754、ICG-Rit、核素进行对比.结果:Cy754的相对分子质量为818,激发波长为740 nm,发射波长为760 nm.直接偶联并纯化的Cy754-Rit保持了分子完整性和免疫活性.Rit上的Cy754标记率为100％.Cy754-Rit的荧光强度优于ICG-Rit(3.08×1010 vs 6.56×108).透析纯化后的新型增强靶向示踪剂中未检测到细菌和热原.实验动物局部注射,观察2周后,局部及全身无红肿也无皮疹,无死亡.Rit与Cy754偶联的最佳的物质的量比为1∶80.Cy754-Rit能够准确地定位前哨淋巴结,其定位特性与核素相似,但发射荧光穿透力优于ICG-Rit(14.3 mm vs 13.2 mm).结论:Cy754-Rit的制备工艺简便、高效、无放射性,其荧光强度较传统荧光靶向示踪剂明显增强.经动物模型局部注射能够准确地定位到前哨淋巴结,显像清晰稳定,穿透力好,但仍需临床试验进行相关验证.

2020

2021/07/20

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两种可注射Pluronic F-127水凝胶复合物修复兔软骨缺损的效果差异

背景:预实验显示,SOX9基因转染的骨髓间充质干细胞可在Pluronic F-127水凝胶内良好的生长与增殖,促进细胞外基质的分泌,增加软骨基质的表达.目的:利用慢病毒基因诱导方式将SOX9基因转导至骨髓间充质干细胞中,将其与可注射Pluronic F-127水凝胶复合,观察PluronicF-127水凝胶复合物修复软骨缺损的效果.方法:利用慢病毒基因诱导方式将SOX9基因转导至骨髓间充质干细胞中,转染48 h后与PluronicF-127水凝胶复合.取60只新西兰大白兔(武汉科技大学实验动物中心提供),建立右侧膝关节股骨髁软骨缺损模型,随机分3组处理:模型组缺损部位未植入任何材料,对照组植入未转染的骨髓间充质干细胞与Pluronic F-127水凝胶复合物,实验组植入SOX9基因转染的骨髓间充质干细胞与Pluronic F-127水凝胶复合物.术后4,12周取缺损部位组织,分别进行Micro-CT三维重建、苏木精-伊红染色、番红O染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色与Wakitani软组织损伤修复组织学评分.实验获得武汉科技大学伦理委员会批准.结果 与结论:①术后12周Micro-CT三维重建显示,模型组缺损区域未见明显的修复,中央仍有较大的凹陷;对照组可见明显的修复,中央凹陷区域明显减小,可见较多的再生骨小梁结构;实验组缺损部位基本完成修复;②术后12周苏木精-伊红染色显示,模型组缺损区仍未见骨小梁结构,细胞分布紊乱,未见软骨陷窝;对照组可见较多的骨组织重建,缺损区域主要由软骨样组织与纤维组织填充;实验组骨组织重建较充分,缺损区域主要由软骨样细胞与软骨样细胞外基质填充,细胞呈柱状排列,与周围软骨相似;③术后12周番红O染色与Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示,模型组可见少量糖胺多糖表达,未见Ⅱ型胶原表达;对照组可见较多的糖胺多糖与Ⅱ型胶原表达,实验组糖胺多糖与Ⅱ型胶原表达最多;④实验组Wakitani软组织损伤修复组织学评分高于对照组与模型组(P＜0.05);⑤结果表明,负载SOX9基因转染骨髓间充质干细胞的PluronicF-127水凝胶复合物可促进软骨缺损的修复.

2020

2021/07/20

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有氧运动可改善糖尿病肾病模型小鼠肾脏的氧化应激损伤

背景:研究证实,长期有规律的有氧运动能够有效降低血糖,改善胰岛素抵抗,是治疗糖尿病肾病的重要措施,但有关其具体机制不明.目的:探讨有氧运动对糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤的影响及其与核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)信号通路的关系.方法:雄性C57/BL6小鼠随机分为正常对照组、糖尿病肾病组及有氧运动治疗组,每组8只.除正常对照组外,其他2组小鼠均采用多次小剂量腹腔注射链脲佐菌素(40 mg/kg,连续注射5d)建立糖尿病小鼠模型(4周后24 h尿蛋白含量＞30 mg提示糖尿病肾病造模成功).糖尿病小鼠造模成功8周后,有氧运动治疗组小鼠进行为期8周的跑台有氧运动,1 h/d,5 d/周.治疗8周后,测量尾动脉收缩压、24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血脂及血肌酐、血尿素氮水平;取肾脏组织匀浆,测定丙二醛水平及总超氧化物歧化酶活性;观察肾脏组织肾小球系膜区细胞外基质积聚情况,并检测肾脏组织活性氧水平及核因子E2相关因子2核蛋白和血红素氧合酶1蛋白表达.实验方案经河南省中医药研究院动物实验伦理委员会批准(批准号为HPHT2015019).结果 与结论:①与正常对照组比较,糖尿病肾病组小鼠24 h尿微量白蛋白排泄率、血糖、血肌酐、尿素氮、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白-胆固醇以及尾动脉收缩压等指标水平显著增加,肾脏肾小球系膜区细胞外基质显著积聚,活性氧水平和丙二醛水平显著增加;与糖尿病肾病组比较,有氧运动治疗组上述各项指标显著降低;②与糖尿病肾病组比较,有氧运动治疗组小鼠总超氧化物歧化酶活性增强,肾小球系膜区细胞外基质积聚显著减少,肾脏组织细胞核蛋白核因子E2相关因子2和总蛋白血红素氧合酶1的表达上调;③结果说明,有氧运动能够降低糖尿病肾病小鼠肾脏氧化应激损伤,可能与Nrf2/HO-1通路激活有关.

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2021/07/20

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二乙酰吗啡干预离体乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的变化

背景:阿片类药物可调控心肌细胞膜电位和Ca2+电流的变化,但是目前二乙酰吗啡是否诱导心肌节律、细胞动作电位和钙离子电流改变尚未见报道.目的:探讨二乙酰吗啡对离体SD乳鼠心肌细胞动作电位和钙离子电流的影响.方法:①体外培养SD乳鼠心肌细胞,采用5个浓度二乙酰吗啡(0,10-2,10-3,10-4,10-5 mol/L)和20 mol/L维拉帕米作用于心肌细胞;②将细胞分为对照组、二乙酰吗啡组、二乙酰吗啡+维拉帕米组.后2组分别以二乙酰吗啡、二乙酰吗啡+维拉帕米(浓度20 μmol/L)联合干预心肌细胞;对照组加入等量PBS.实验于2018-05-21经新疆医科大学第一附属医院动物实验医学伦理委员会批准,批准号IACUC201805-K1.结果 与结论:①当不同浓度二乙酰吗啡干预心肌细胞24 h后,心肌细胞形态异常数量亦随其浓度的改变而明显增加,呈剂量依赖性改变.当二乙酰吗啡浓度逐渐升高,细胞存活数量亦逐渐减少,细胞胞质体积缩小,胞膜收缩,伪足减少,细胞核结构模糊.②与对照组相比,当加入二乙酰吗啡干预心肌细胞后,心肌细胞自发性搏动频率和节律差异有显著性意义.静息膜电位负值降低,动作电位中动作电位时程显著增加,动作电位幅度显著减小.③与对照组相比,二乙酰吗啡组中心肌膜电位改变数量明显增加,当加入维拉帕米后,心肌膜电位改变细胞数量有所降低.与对照组相比,心肌膜电位改变细胞数量有所升高.④提示二乙酰吗啡可致离体SD乳鼠心肌细胞形态异常,心肌自发性搏动频率和节律显著增加,心肌细胞膜电位和动作电位发生改变,钙通道阻滞剂维拉帕米对二乙酰吗啡引起的心肌细胞节律异常有一定改善作用.

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2021/07/20

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高通量氙光传递窗与紫外传递窗灭菌效果观察

目的 传递窗作为实验动物屏障设施内物品传递的通道,主要是通过紫外灯照射物品表面达到消毒目的.针对其照射时间长、使用频率高、影响因素复杂、且消毒效果不稳定等问题,本研究对比了紫外传递窗和高通量氙光传递窗在不同时间点的杀菌效果.方法 比较分析两种传递窗在不同的时间点对5种标准菌株(金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌)的杀菌效果.结果 高通量氙光传递窗1 min杀菌率达99.85％,5 min可达100％;紫外传递窗5 min达不到杀菌效果,对不同菌种灭菌效率差异大,照射30 min杀菌率方可达99.91％.结论 与传统的紫外传递窗相比,高通量氙光传递窗5 min即可达到杀菌效果,它有望替代紫外传递窗.

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2021/07/20

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恒河猴肺中阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

目的 对死亡的恒河猴肺脏炎症组织采样进行病原菌分离、培养、鉴定及药敏试验,确诊病原菌及药物敏感性,指导疾病诊疗、预防和临床用药.方法 解剖柜条件下解剖死亡猴,分别采集肉眼病变明显和正常肺组织,用灭菌接种环在肺切面部位采样,接种在SS琼脂培养基进行培养,培养时间24 h观察细菌生长情况,进行生化鉴定和8种药敏试验.结果 菌落呈白色或乳白色、圆形、湿润、不透明,进一步分离培养,经梅里埃微生物生化鉴定,确定该细菌为阴沟肠杆菌,ID:99.9％,T:0.71,ID编码:35074753311;药敏试验表明该菌对氨苄西林,头孢呋辛中等敏感;对诺氟沙星、阿米卡星、庆大霉素、头孢曲松、头孢哌酮,头孢噻肟敏感.动物实验表明该分离菌对实验小鼠具有致病性.结论 该恒河猴肺部感染阴沟肠杆菌,头孢哌酮,头孢噻肟等药物可作为治疗临床用药.

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2021/07/20

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原儿茶酸可减轻退变软骨细胞的损伤

背景:已有研究表明多种抗氧化剂由于对炎性因子存在抑制作用而表现出抗关节炎作用,但是原儿茶酸虽具有抗氧化和抗炎作用,但其是否也对骨关节炎有治疗作用,尚无相关报道.目的:探讨原儿茶酸在体外对白细胞介素1β 诱导炎症的软骨细胞的生物学包括表型和细胞代谢的影响,为骨关节炎疾病提供一种潜在的药物保护手段.方法:收集乳鼠股骨软骨细胞,以10 mg/L的白细胞介素1β 干预建立退变模型,以10,30和50 mg/L原儿茶酸对细胞进行治疗.实验于2017年10月经广西医科大学动物实验伦理委员会批准,批准号201710008.结果与结论:10-50 mg/L原儿茶酸可促进软骨细胞的增殖,其中30 mg/L原儿茶酸对关节软骨细胞的保护作用最强,对退变的关节软骨细胞具有促进增殖的作用,同时原儿茶酸有效促进软骨细胞生长,细胞外基质的合成和聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和Sox9的mRNA表达,同时下调炎症相关基因基质金属蛋白酶13的表达.表明原儿茶酸可促进软骨细胞增殖和维持软骨细胞表型,为进一步研究其在体内进行骨关节炎治疗和关节软骨退变损伤修复提供依据.

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2021/07/20

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蛹虫草多糖促进CETP-tg小鼠胆固醇逆转运

目的:本研究验证蛹虫草多糖(CMPS)在体内外促进胆固醇逆向转运(RCT)的效应,并探讨相关机制.方法:采用CETP-tg小鼠作为动物模型,通过同位素示踪技术检测体内的RCT效率;酶法测定血浆脂质水平.采用RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞作为细胞模型,油红O染色和总胆固醇试剂盒检测泡沫细胞胆固醇外排后剩余脂质含量.Western blot分析泡沫细胞及小鼠肝脏内涉及胆固醇转运、摄取、转化的相关蛋白水平.结果:CMPS灌胃4周后,高脂饮食CETP-tg小鼠血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇浓度分别降低24％、23％和22％,体内RCT过程加速,血浆、胆汁、肠道及粪便外排通路中3H-胆固醇放射活性明显升高,同时,肝脏中胆固醇受体SR-B1和LDLR及转化酶CYP7A1蛋白表达上调,分别增加了105％、71％和58％.体外实验显示:CMPS促进了巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇外排,细胞内脂质和TC水平明显降低,同时,上调了巨噬细胞PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1信号通路相关蛋白的表达.结论:CMPS促进了外周巨噬细胞中多余胆固醇的流出和体内胆固醇经肝脏途径外排,其机制可能与PPARγ-LXRα-ABCA1/ABCG1通路激活有关.

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2021/07/20

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组织工程技术在股骨头坏死治疗应用中的新理念

背景:股骨头坏死是骨科疑难病,早期采用保头术式,其中尤以植骨类手术为代表,自体骨与异体骨为常用的植骨材料,但自体骨移植创伤性大且供骨来源有限,异体骨虽来源丰富,但存在严重的免疫排斥反应和吸收风险.随着组织工程技术的发展,股骨头坏死的治疗又进入了新的模式.目的:综述组织工程技术治疗股骨头坏死的研究现状与新进展.方法:由第一作者检索2000至2019年PubMed数据库及CNKI数据库,英文以“osteonecrosis of femoral head, tissue engineering technology, mesenchymal stem cells, biomaterials, growth factor, bone grafting,hip preserving”为关键词,中文以“股骨头坏死,组织工程技术,间充质干细胞,生物材料,生长因子,植骨,保髋”为关键词,选择运用组织工程技术治疗股骨头坏死方面的文献,排除Meta分析类和重复研究文章,共纳入53篇代表性文献进行分析.结果 与结论:随着细胞学与材料学的不断发展,组织工程技术治疗股骨头坏死已取得较大进展,包括基因修饰的不同种类间充质干细胞修复骨坏死、3D打印及纳米技术应用于支架材料、生长因子的表达与股骨头坏死的关系等.理想的生物支架复合体应接近机体自身组织生物学特性,其通过有效的生物力学性能为坏死区提供支撑,从而降低坏死区压力,结合细胞因子作用促进毛细血管修复与再生及成骨细胞的分化增殖等,完成坏死区新生骨的再生.但目前这些研究大多数尚处于动物实验阶段,随着纳米技术、临床医学及组织工程学的快速发展,性能完全的人工制造仿生替代植骨材料将有望诞生,给保髋患者带来福音.

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2021/07/20

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海马保护性全脑放疗对神经认知功能的影响

目前,众多文献报道:海马保护性全脑放疗(hippocampal avoidance whole brain radiotherapy,HA-WBRT)可显著改善病人在放疗结束后的认知功能障碍,提高记忆力、注意力和计算力、回忆能力、语言能力等.笔者对HA-WBRT改善认知功能的作用存在质疑,基于海马结构的组成,海马结构在人类认知方面的作用以及相关动物实验、临床实践的科学数据,对HA-WBRT保护、改善认知功能提出问题,对相关问题作一综述.

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2021/07/20

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