鼠胚胎期和出生后毛囊下段启动再生表达的Wnt5a

背景:Wnt5a是唯一在真皮高表达,与毛囊真皮成分发生密切相关的信号分子.目的:通过观察E12.5-E15.5胎龄的大鼠胚胎皮肤和大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生过程Wnt5a的表达,初步研究毛乳头胚胎发生和体外再生的启动机制.方法:将孕SD大鼠在E12.5、E13.5、E14.5、E15.5麻醉后处死,取出完整胚胎制作石蜡切片;另取单个SD大鼠触须毛囊切除毛乳头,毛囊上段拔除毛干后移植至Nu/Nu裸鼠背部皮肤;分别取以上胎龄的大鼠胚胎皮肤及裸鼠背部移植部位的毛囊标本,用酶标免疫组化法观察Wnt5a在大鼠胚胎皮肤及大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生过程的表达,苏木精-伊红染色观察大鼠触须毛囊上段移植后毛囊下段的再生情况.动物实验均已获得汕头大学医学院动物伦理委员会批准.结果与结论:①E12.5 Wnt5a在表皮细胞表达;E13.5 Wnt5a在表皮细胞表达增强;E14.5 Wnt5a表达由表皮转移至真皮,在真皮细胞浆明显表达;E15.5 Wnt5a表达在真皮结缔组织明显增强,在表皮的表达消失;②大鼠触须毛囊上段移植后第3天开始至第9天,毛囊上段向下形成新的毛球部,恢复完整毛囊结构,再生过程相关组织Wnt5a均呈强阳性表达;③Wnt5a在胚胎毛囊发生前后和毛囊下段再生模型毛乳头形成的部位呈现高表达,说明Wnt信号通路与毛乳头再生有密切的关系,其中Wnt5a可能扮演了非常主要的角色.

2020

2021/07/20

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建立兔胫骨VX2骨肿瘤模型的方法

背景:关于兔的VX2肿瘤模型方法有多种,但各方法的可靠性无人探究,课题组在原有方法上进行了改良,进行了此项研究.目的:探讨兔VX2肿瘤组织块、细胞悬液分别经改良法与传统植入法进行兔胫骨VX2骨肿瘤造模的可靠程度.方法:将健康成年新西兰大白兔40只随机分为2组,其中组织块组植入肿瘤组织块进行胫骨VX2肿瘤造模,细胞悬液组植入肿瘤细胞悬液进行胫骨VX2肿瘤造模,2组实验动物左侧胫骨均采用穿刺针植入,右侧胫骨均采用传统法植入.造模成功1h后对穿刺孔周围进行超声检查明确穿刺孔有无血肿,于第3周处死所有实验动物,进行双侧胫骨X射线检查明确肿瘤生长范围,取肿瘤及穿刺部位周围软组织进行大体及病理学检查对比肿瘤大小,并明确有无肿瘤细胞局部浸润.结果 与结论:①组织块组有1只实验动物于术后死亡,脱组,细胞悬液组所有实验动物均存活;②X射线检查可见组织块组肿瘤均侵犯皮质层,细胞悬液组皮质层未侵及;肿瘤大体观察可见组织块组肿瘤侵犯骨皮质长度大于细胞悬液组;③组织块组改良法、传统法植入1h后分别有1例,7例穿刺孔周围血肿;细胞悬液组改良法、传统法植入1h后分别有2例,9例穿刺孔周围血肿;④组织块组改良法、传统法植入后3个月分别有1例,8例出现肿瘤局部浸润;细胞悬液组改良法、传统法植入后分别有2例,11例出现肿瘤局部浸润;⑤结果表明,组织块植入较细胞悬液植入制作兔VX2骨肿瘤更易培养出大的瘤体,从而使实验更易于观察,且组织块植入后肿瘤局部浸润率较细胞悬液法要低;同时采用改良法植入可有效降低造模过程中肿瘤细胞局部浸润率.

2020

2021/07/20

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PCB118暴露对青春期雄性ICR小鼠精子发生的影响及机制

目的 观察青春期雄性ICR小鼠暴露PCB118对精子发生的损害作用,探究其与睾酮合成过程相关的作用机制.方法 36只4周龄雄性ICR小鼠随机分为3组,每组12只,每日ig给予PCB118(50和500μg·kg-1)或溶媒(玉米油),连续4周.给药结束后计算脏器系数;HE染色观察睾丸组织病理变化,统计曲细精管直径、生精上皮厚度和精原细胞相对数目;检测附睾精子数目、精子活力和精子畸形率;用放射免疫法检测血清睾酮水平;RT-qPCR法检测睾丸中与睾酮合成相关的酶和雄激素受体(Ar)mRNA水平;Western印迹法和免疫组织化学法检测AR蛋白和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达.结果 与溶媒对照组相比,PCB118500μg·kg-1组肝系数明显下降(P<0.01),PCB1182个剂量组睾丸、附睾、肾和脾系数均无显著变化.PCB1182个剂量组睾丸组织中出现精原细胞缺失、曲细精管空泡化,曲细精管直径、生精上皮厚度和精原细胞相对数目均显著下降(P<0.05,P<0.01);附睾中精子数量显著减少,畸形率显著增加(P<0.05),但精子活力无显著变化;血清睾酮水平显著下降(P<0.05);睾丸中Ar及与睾酮合成相关的酶类固醇合成急性调节酶、胆固醇侧链裂解酶、3β-羟基类固醇脱氢酶、17-20裂解酶和17β-羟基类固醇脱氢酶的mRNA表达水平显著下降(P<0.05);AR和PCNA蛋白表达显著下降(P<0.05).结论 PCB118导致生精细胞增殖抑制,精子质量下降,该作用与其降低血清睾酮水平、下调睾酮合成相关酶mRNA水平、降低AR蛋白和mRNA表达以及降低PCNA蛋白表达有关.

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2021/07/20

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miR-148a-5p参与了高蛋氨酸饮食诱导ApoE-/-小鼠的肝细胞凋亡

背景:高蛋氨酸饮食可以导致ApoE-/-小鼠发生肝损伤,微小RNA(miRNA)参与细胞存活、分化和细胞凋亡等各种细胞过程,具有重要意义.目的:探讨miR-148a-5p在高蛋氨酸饮食诱导ApoE-/-小鼠肝细胞凋亡中的作用.方法:12只ApoE-/-小鼠随机分为2组,每组6只,ApoE-/-对照组为普通饮食,ApoE-/-高蛋氨酸组为高蛋氨酸饮食.苏木精-伊红染色观察2组肝组织形态学变化;TUNEL染色观察肝细胞的凋亡情况;Western blot测定Bax、Bcl-2的表达改变;荧光定量PCR检测miR-148a-5p的表达;运用Target Scan靶基因预测软件预测miR-148a-5p的靶基因;双荧光素酶活性实验明确其靶向关系.结果与结论:①与对照组相比,ApoE-/-高蛋氨酸组肝脏组织肝小叶结构发生明显紊乱,部分细胞呈胞浆疏松化变性,肝细胞凋亡增加,Bax的表达明显上升且Bcl-2的表达显著下降(P<0.01);②荧光定量PCR结果显示,ApoE-/-高蛋氨酸组miR-148a-5p的表达增加(P<0.05);③靶基因预测软件提示,Bcl-2为miR-148a-5p的潜在靶基因;④双荧光素酶活性实验确定了miR-148a-5p与Bcl-2的靶向关系(P<0.05);⑤肝细胞中过表达miR-148a-5p后Bax的表达显著上升且Bcl-2的表达明显下降(P<0.01);⑥提示在高蛋氨酸饮食诱导的ApoE-/-小鼠肝细胞中,miR-148a-5p通过负调控Bcl-2促进肝细胞凋亡,这可能是造成肝损伤的机制之一.

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2021/07/20

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中药调节肠道菌群降低血糖的作用及机制研究进展

2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)是一种威胁患者健康的代谢性疾病,现代医学以控制血糖稳定与预防并发症为主要治疗手段,患者需要终生服用降糖药.化学药疗效确切,但长期服用后容易引发系列的副作用,严重的限制了其推广和使用.中药(Traditional Chinese Medicine,TCM)降血糖的历史悠久,在T2DM这类复杂疾病的治疗中独具优势,但其作用机制尚不十分清楚.最新研究表明,TCM可以通过调节肠道菌群来改善葡萄糖代谢从而降低血糖,这给T2DM的防治提供了新的方法 和思路.本文综述TCM及其有效成分、复方制剂通过调节肠道菌群降低血糖的作用及机制最新进展,为后续开展TCM降血糖研究提供参考和建议.

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2021/07/20

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α-突触核蛋白A53T突变损伤小鼠认知功能

目的 探索α-突触核蛋白A53T转基因小鼠认知功能,运动功能与焦虑样行为学的改变以及病理学变化特点.方法 选用背景为C57BL/6的α-突触核蛋白A53T转基因小鼠作为实验组,同窝阴性小鼠为对照组.采用旷场及圆筒实验检测小鼠的焦虑状态;转棒及抓力实验评价小鼠的运动协调能力以及前肢张力;水迷宫及条件恐惧实验评价小鼠的认知能力.通过免疫组织化学染色法研究模型小鼠脑内病理特征;通过电镜观察模型小鼠脑内线粒体变化.结果 与对照组比较,α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动距离增加,呈现过度活跃状态;对条件恐惧记忆的时间缩短,出现认知障碍;圆筒、转棒与抓力实验及水迷宫实验未见统计学差异.模型组小鼠黑质、纹状体、梨状皮层及海马的α-synuclein磷酸化水平增加,前额叶路易小体沉积,黑质纹状体α-synuclein沉积增多,黑质TH阳性细胞数量显著减少;与对照组比较,电镜观察模型组小鼠脑内线粒体嵴及其内容物不清,线粒体形态改变.结论 突触核蛋白A53T转基因小鼠出现认知功能受损,并且早于运动障碍发生;病理特征表现为α-synuclein/LBs沉积于前额叶、皮层,黑质多巴胺能神经元缺失以及线粒体形态改变,可作为一种突触核蛋白相关认知障碍性疾病如路易氏体痴呆和帕金森病痴呆的动物模型.

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2021/07/20

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肠炎沙门菌sifA基因缺失株的无痕构建及其在巨噬细胞内的增殖特性研究

目的 本研究旨在探究sifA基因对肠炎沙门菌胞内寄生和增殖的影响,以探索肠炎沙门菌的致病机理.方法 根据同源重组原理,无痕构建肠炎沙门菌C50041的sifA基因缺失株,通过蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法对基因缺失株进行鉴定,并从生物学特性、胞内沙门菌增殖、sifA基因在胞内外菌中表达等方面,分析sifA基因对肠炎沙门菌的影响.结果 成功构建肠炎沙门菌C50041AsifA,蓝白斑、抗生素耐药性、PCR和基因测序方法证明该菌株是正确的.其生长速度和生化特性没有发生改变.△sifA株感染巨噬细胞后,其胞内沙门菌量显著少于其野生株.sifA基因在spiC基因缺失株中表达量增加.结论 肠炎沙门菌C50041△sifA被成功构建,其在巨噬细胞内的增殖量显著降低,sifA基因表达可能受spiC基因调控,本研究为深入探究肠炎沙门菌在细胞内增殖及sifA基因的功能奠定基础.

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2021/07/20

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环形外固定架联合骨膜烧灼构建大鼠胫骨萎缩性骨不连的新模型

背景:建立标准萎缩性骨不连动物模型是研究萎缩性骨不连的发生机制与治疗的必要条件,而目前常见的造模方法不能准确模拟萎缩性骨不连的临床实际.目的:构建一种新型萎缩性骨不连动物模型.方法:30只雄性SD大鼠随机分成实验组和对照组,均行右侧胫骨中下段截骨,采用环形外固定架固定,维持4 mm缺损间距;其中实验组烧灼截骨端周围1 mm骨膜,对照组不处理骨膜.实验于2018-01-02经广州中医药大学第一附属医院实验动物伦理委员会批准,批号:TCMF1-2018002.结果 与结论:造模后每组分别出现1例外固定架松动,2组均未发生感染;影像学检查显示造模后6周,2组胫骨骨折断端间均无骨性连接,且无进一步愈合迹象;实验组第12周时影像学与组织学显示呈典型萎缩性骨不连表现;对照组第12周影像学显示8只模型呈现肥大性骨不连特征,6只模型影像学具有萎缩性骨不连特征.提示采用环形外固定支架配合烧灼断端骨膜可成功构建萎缩性胫骨骨不连模型.

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2021/07/20

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降脂模型研究进展

高脂血症是一种脂质代谢紊乱性疾病,也是导致冠心病、脑梗死、动脉粥样硬化等心脑血管疾病的首要因素,已成为危害全人类身体健康的"第一杀手".目前,研发高效低毒的新靶点降脂中药对改善高脂血症及其继发的心脑血管性疾病至关重要.但是,由于我国中药成分的复杂性和配伍的多样性,依靠单一的降脂模型很难对发挥疗效的有效成分和具体的降脂机制进行深层次的研究.因此,建立一个理想的高脂模型是筛选降脂中药和研究高脂血症中医发病机理的关键因素之一.本文从细胞模型、哺乳动物模型和斑马鱼模型三个方面对目前几种最常用的降脂模型进行了综述,总结归纳了各种模型的常用造模方法及各自的优缺点,以期为复制高脂血症的模型选择、高脂血症的机制研究以及筛选高效降脂中药提供参考和实验依据.

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2021/07/20

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C57BL/6 J、BALB/c、ICR品系小鼠学习记忆能力的行为学差异

目的 比较C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠学习记忆能力的行为学差异.方法 按品系将10周雄性C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠分为三组,每组10只,进行旷场实验、Barnes迷宫实验、Y迷宫实验、条件恐惧实验,比较三个品系小鼠学习记忆能力.结果 旷场实验,C57BL/6J组总移动距离、大移动距离、速度、中央区移动距离百分比、中央区停留时间少于ICR组和BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.05);C57BL/6J组小运动移动距离多于ICR组和BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.01);Barnes迷宫实验测试阶段,C57BL/6J组与ICR组在目标区域停留时间大于BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.05).Y迷宫实验三组小鼠自发转换率,进臂停留时间与次数等差异均无统计学意义.条件恐惧实验中三组小鼠僵直时间百分比差异均无统计学意义.结论 三个品系中,C57BL/6J小鼠自发活动最低,旷场实验焦虑水平最高,空间参考记忆优于ICR组和BALB/c小鼠,三个品系空间工作记忆及空间识别记忆无显著性差异.

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2021/07/20

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