短发夹RNA沉默TRPV2基因抑制大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变的实验研究

目的 利用短发夹RNA(shRNA)技术构建TRPV2基因的沉默表达慢病毒载体,探究其在大鼠脊柱侧凸模型椎间盘退变中的作用.方法 本研究采用经典的双足大鼠脊柱侧凸模型构建的方法 .根据基因沉默干扰原理,构建shRNA TRPV2干扰载体,根据实验目的,将SD大鼠分成对照组、模型组和shRNA组.对上述动物模型摄X线片,对椎间盘髓核组织进行HE染色,对椎间盘髓核组织进行II型胶原蛋白和Aggrecan蛋白的免疫组织化学染色,利用RT-PCR和Western blot检测髓核组织中炎性因子iNOS、COX-2、MMP-9和凋亡因子Caspase-6、Caspase-3和Caspase-9的mRNA和蛋白表达水平.结果 慢病毒量转染效率较高,为(92.3±2.7)％.对照组SD大鼠无明显侧凸,模型组SD大鼠脊柱向左侧凸,Cobb's角为(31.22±2.18)°;shRNA组SD大鼠脊柱向左侧凸,Cobb's角为(18.07±3.09)°.RT-PCR结果 显示,模型组髓核组织中炎性因子iNOS、COX-2、MMP-9和凋亡相关因子Caspase-3,6,9的mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);shRNA组各组分的mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05);shRNA组髓核组织中iNOS、COX-2、MMP-9、Bad、Bax和凋亡相关因子Caspase-3,6,9的mRNA表达水平均低于模型组(P<0.05).Western blot蛋白检测结果 与RT-PCR结果 相同.HE染色显示,模型组大鼠椎间盘髓核组织分布紊乱无序,还有纤维断裂.shRNA组大鼠髓核组织有瘢痕愈合,也有正常的髓核组织,排列有序.免疫组织化学染色结果 显示,shRNA组髓核组织中II型胶原蛋白和Aggrecan蛋白的蛋白表达水平均高于模型组(P<0.05).结论 shRNA-TRPV2可以抑制脊柱侧凸鼠模型中髓核细胞的凋亡,降低髓核组织中iNOS以及炎性因子COX-2和MMP-9的表达,对髓核组织的退变起到保护作用.

2020

2021/07/20

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基于NF-κB信号通路探究活血定痛方对心肌缺血再灌注损伤动物模型的保护作用

目的:基于核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探究活血定痛方对心肌缺血再灌注损伤动物模型的保护作用.方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、复方丹参滴丸组,活血定痛高、低剂量组,活血定痛高剂量+NF-κB抑制剂组,各组动物连续给药2周,活血定痛高剂量组+二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组于造模后次日腹腔注射PDTC;结扎左冠状动脉前降支造模,检测左心功能及Na+-K+-ATP酶.各组动物腹主动脉取血,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白T(cTnT),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px).蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌NF-κB,NF-κB抑制蛋白α(IκBα),NF-κB抑制蛋白激酶(IκκB)的蛋白表达.结果:与模型组比较,复方丹参滴丸组和活血定痛高、低剂量组可不同程度降低血清中CK-MB,cTnT,TNF-α,IL-6,IL-1β,MDA的水平,增加SOD,GSH-Px水平,上调心肌组织Iκκ水平激酶IκBα和IκκB的蛋白表达水平,提高心肌缺血再灌注模型动物心肌能量代谢过程中的Na+-K+-ATP酶活性(P＜0.05);而活血定痛高剂量组+PDTC并未降低血清中CK-MB,cTnT,TNF-α,IL-6,IL-1β,MDA的含量,增加SOD,GSH-Px水平,上调心肌组织Iκκ水平激酶IκBα和IκκB的蛋白表达水平,与模型组比较差异无统计学意义.结论:活血定痛方可通过上调心肌缺血再灌注模型心肌组织中IκBα和IκκB的蛋白表达,抑制NF-κB信号通路的活化,降低炎症介质表达及自由基产生,提高心肌能量代谢过程中的Na+-K+-ATP酶活性,达到较好的抗心肌缺血再灌注损伤的作用.

2020

2021/07/20

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参连复脉颗粒治疗室性期前收缩的药效学实验研究

目的 研究参连复脉颗粒对室性期前收缩的药效作用及最佳有效药物浓度.方法 选取小鼠、豚鼠和大鼠作为研究对象,分别采用氯化钙、哇巴因和乌头原碱诱导动物心律失常模型,观察口服参连复脉颗粒不同剂量组的抗心律失常药效作用.结果 实验一:与对照组比较,参连复脉颗粒大剂量组、中大剂量组、中剂量组小鼠心律失常持续时间均有一定程度缩短(P<0.05或P<0.01).实验二:参连复脉颗粒大剂量组哇巴因诱发室性心律失常的消耗量较对照组显著增加(P<0.05或P<0.01),与美西律组比较差异无统计学意义(P>0.05);参连复脉颗粒中剂量组、小剂量组也能够一定程度增加哇巴因的消耗量.同时参连复脉颗粒各剂量组心律失常出现时间均有一定程度延长,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).实验三:与对照组比较,参连复脉颗粒大剂量组、中剂量组大鼠心律失常持续时间均有一定程度缩短(P<0.05或P<0.01).提示大、中剂量组与阳性对照药(胺碘酮或美西律)在心律失常出现时间或缩短持续时间程度有相同的作用趋势,差异无统计学意义(P>0.05).结论 参连复脉颗粒大、中剂量组对氯化钙、哇巴因、乌头原碱引起的室性期前收缩均有一定的拮抗作用,与胺碘酮或美西律作用相似,中剂量为最低起效剂量.

2020

2021/07/20

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基于数据挖掘的黄褐斑动物模型应用分析

目的 分析黄褐斑动物模型应用现状,为探讨黄褐斑理论知识、探究新疗法、研制新药物打好动物实验基础,提高治疗黄褐斑的科学性、严谨性、安全性.方法 以"黄褐斑"为主题,检索中国知网、万方数据库、维普数据库中关于黄褐斑的实验研究文献,时间范围分别为"1960-2019、1990-2019、1979-2019".归纳分析文献中动物模型的应用、相关指标的检测等.结果 共筛选出104篇实验研究文献,以采用雌性KM小鼠复制黄褐斑动物模型最为常见,其造模方法以紫外线照射最为常用;造模时间以30 d最为常见,最短不少于7 d;给药时间大多分布在28～31 d.在指标的测量中,可分为表观指标、生化指标及病理指标,以生化指标的检测为主,侧重于皮肤及血清中氧化相关因子的变化.结论 目前对黄褐斑的实验研究及理论探讨与黄褐斑发病现状严重失衡,应增加动物实验研究;建立复合动物模型、具有中医病症特点的动物模型是未来重要发展方向.此外,对药物作用机制的研究仅局限于体内、体表氧化与抗氧化失衡,忽略内分泌失调等相关因素,随着体表"神经-内分泌-免疫"(NEI)网络的提出与深入研究,探讨在黄褐斑的治疗中,是否可以通过调节体内、体表NEI网络而发挥整体、局部疗效可能是未来重要研究方向,值得进一步深入探讨.

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2021/07/20

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云南省泸西县小型哺乳动物携带斑疹伤寒立克次体调查

目的 了解云南省泸西县小型哺乳动物携带斑疹伤寒立克次体状况及其分子生物学特征,调查斑疹伤寒自然疫源地,为立克次体疾病的预防控制提供科学依据.方法 用鼠笼和鼠夹法在云南省泸西县居民区及野外捕获小型哺乳动物,捕获的动物进行分类鉴定,活体取血并分离血清,采用间接免疫荧光试验检测血清中斑疹伤寒抗体.捕获动物均剖取脾脏并提取DNA,采用巢式PCR检测动物脾脏中斑疹伤寒立克次体groEL基因,阳性标本进行序列测定,通过美国国立生物技术信息中心网站对基因序列进行BLAST比对,构建系统进化树进行同源性及进化分析.结果 2015年8月至2017年9月在泸西县共捕获小型哺乳动物193只,其中居民区64只,以黄胸鼠为优势鼠种;野外129只,以大绒鼠和中华姬鼠为优势鼠种.获得动物血清83份.动物脾脏巢式PCR扩增,居民区动物血清均为阴性,野外捕获动物中检测到2株groEL基因阳性标本(LX2和LX89),带菌鼠种为大绒鼠,带菌率为1.04％.对2份阳性标本测序,然后在基因BANK库中经BLAST比较分析,LX2和LX89相似性为100％,并与斑疹伤寒莫氏立克次体株(GenBank号:AF075440)相似性分别为100％和98％.系统进化树分析表明,LX2和LX89在同一分支,它们与斑疹伤寒莫氏立克次体AF075440株、AY191590株和AY191591株等遗传关系非常近.83份动物血清莫氏立克次体抗体阳性4份,阳性率为4.82％.结论 云南省泸西县存在以大绒鼠为主要宿主的斑疹伤寒自然疫源地.

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2021/07/20

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骨刺散对大鼠佐剂关节炎模型继发性病变的影响

目的:探讨骨刺散对大鼠佐剂关节炎模型继发性病变足肿胀及体质量和脏器系数的影响.方法:取80只Wistar大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,阳性预防组,阳性治疗组(0.5 mL/只),大、小剂量骨刺散白醋预防组,大、小剂量骨刺散白醋治疗组(0.6 g/只,0.3 g/只).除空白对照组外其余各组造模,在右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.l mL致炎,制备佐剂诱导关节炎大鼠模型.注射佐剂当日即开始给药为阳性预防组,第8天开始给药为阳性治疗组,每日给药1次,到造模21天后,停药观察3天,第24天取血杀剖动物,秤取胸腺、脾质量.注射佐剂前及后3h以及间隔一定日期各测左右足爪容积1次,每隔7天,测体质量1次.结果:造模后11天,模型对照组大鼠左后踝关节肿胀明显,于第17 d达到高峰.给予骨质宁搽剂和骨刺散后,大鼠左侧继发性肿胀有明显改善.与空白对照组比较,模型对照组大鼠体质量增长缓慢;与模型对照组比较,阳性药物组,骨刺散大、小剂量组大鼠体质量明显增长,但预防组相比治疗组效果要好.与空白对照组相比,模型对照组大鼠脾脏和胸腺指数显著下降,阳性药物组,大、小剂量骨刺散组脾脏和胸腺指数恢复正常.结论:骨刺散能明显抑制大鼠佐剂性关节炎致炎足肿胀、对大鼠体质量有一定的改善作用,明显增加大鼠胸腺、脾脏系数.

2020

2021/07/20

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补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

背景:膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病,其发病率和致残率高,已严重影响患者的生活质量.研究发现,补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状,但其具体机制仍未阐明.目的:通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制.方法:6月龄SD雌性大鼠,随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组,模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型,术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃,阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃,空白对照组和模型组以生理盐水灌胃.连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织,采用ELISA检测血清雌二醇含量,分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平.结果与结论:与空白对照组比较,模型组白细胞介素1β表达量明显升高,雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P<0.05);与模型组比较,实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P<0.05),雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05);与阳性对照组比较,实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体 α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P<0.05),SRY相关蛋白9表达量明显降低(P<0.05).实验结果表明,IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变,补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用.

2020

2021/07/20

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兽用头孢噻呋在食品动物中的研究进展

头孢噻呋是第三代头孢菌素,在全球范围内被批准用于治疗猪、反刍动物(牛、绵羊和山羊)和马的呼吸道疾病,还被批准用于治疗牛的足腐病和子宫炎感染.许多国家还将头孢噻呋用于雏鸡的早期死亡和火鸡幼禽的感染.本文综述了头孢噻呋的结构活性、适应症、代谢、毒性以及在环境中的降解.同时,从食品动物残留、快速代谢和降解、环境中的非持久性等几个方面对头孢噻呋的安全性进行了总结.头孢菌素的环境脆性尚未被广泛研究,但可能是这类抗生素在动物中使用安全性方面的一个重要特征.

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2021/07/20

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喜炎平注射液抗Ⅱ型登革病毒作用的体内及体外实验研究

目的 分别通过体外和体内实验研究喜炎平注射液对Ⅱ型登革病毒(Dengue virus serotype 2,DENV2)的抗病毒作用.方法 体外实验以利巴韦林注射液作为阳性对照药物,分别以灭活、抑制进入、治疗性给药以及预防联合维持治疗的方式处理人肝癌细胞株HePG2细胞,在不同时相点收获上清和细胞,分别利用间接免疫荧光(indirect immuno-fluorescence assay,IFA)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测DENV2的病毒载量,从而评价喜炎平注射液的体外抗DENV2作用.体内实验以SCID小鼠为实验鼠,腹腔注射HePG2细胞,建立模型小鼠,腹腔注射感染DENV2,次日给予不同剂量(1、2、4 mg/只)的喜炎平注射液,连续给药4 d,部分小鼠于感染第6日取材,利用IFA检测实验鼠脾、肝及血清中病毒载量,并观察实验鼠的生存率.结果 体外实验显示,喜炎平注射液能够灭活DENV2,并抑制DENV2进入细胞,同时无论是治疗还是治疗联合预防给药,均可对DENV2的复制具有良好的抑制作用,即在病毒感染早期及晚期,喜炎平均可发挥抗病毒作用,且优于利巴韦林.进一步在体内实验中同样显示喜炎平具有较好的抗病毒作用,可以降低实验鼠脾、肝及血清中病毒载量,并可提高实验鼠的生存率.结论 喜炎平注射液具有明显的抗DENV2病毒的作用,可为DENV感染的治疗提供新的候选药物.

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2021/07/20

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磁环构建大鼠胆肠吻合模型的实验研究

目的 探讨磁环构建大鼠胆肠吻合模型的可行性.方法 设计并加工适用于大鼠胆肠吻合模型的磁环.10只雄性SD大鼠结扎胆总管,2周后胆总管扩张.利用磁环完成胆总管十二指肠吻合操作.记录吻合时间、术后存活率及并发症发生情况.28 d后获取吻合口标本,肉眼观察胆肠吻合口愈合情况.结果 10只SD大鼠中,1只大鼠胆总管结扎后1周出现胆漏并死亡,1只因胆总管未见明显扩张而剔除实验,其余8只大鼠利用磁环顺利完成胆肠吻合手术操作,平均吻合时间(5.22±1.83)min.术后28 d获取胆肠吻合口标本,肉眼观察可见吻合口黏膜层连续性良好,吻合口通畅.结论 磁环可用于构建大鼠胆肠吻合模型,且具有操作简单、吻合效果可靠等优点.

2020

2021/07/20

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