氧化应激和炎症反应在甲状腺功能亢进小鼠肾损伤中的作用

目的:探究氧化应激和炎症反应在甲状腺功能亢进(甲亢)所致小鼠肾损伤中的作用.方法:40只SPF级雄性昆明小鼠被随机分成甲状腺素处理组(T4组)和对照组,每组各20只.T4组小鼠按照1 mg/kg的剂量腹腔注射T4稀释液以构建甲亢动物模型,对照组给予同等体积的生理盐水.造模7周后称量小鼠体重,麻醉后解剖小鼠进行肾脏取材,并测量胫骨长度.滤纸吸干水分称量肾脏重量,检测肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察肾组织的病理变化,Western blot和免疫组化方法检测肾脏中4羟基壬烯醛(4-HNE)修饰蛋白、白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的水平.结果:造模结束后,T4组小鼠体重较同期对照组减轻,且肾脏体积明显增大,肾脏重量增加,肾脏重量/体重比值和肾脏重量/胫骨长度比值均明显升高(P<0.05);T4组小鼠肾组织中,肾小管管腔变大,肾小管上皮细胞出现肿胀、脱落、空泡样变性等病理变化;T4组小鼠抗氧化指标SOD活性下降,与氧化损伤有关的MDA含量增加,4-HNE修饰蛋白增多(P<0.05);此外,炎症相关的IRAK1和TRAF6蛋白在T4组中的表达明显升高(P<0.05).结论:甲状腺激素水平过高会造成小鼠肾脏肥大和肾结构损伤,其机制可能与氧化应激水平升高和炎症反应增强有关.

2020

2021/07/20

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五味子素B诱导高甘油三酯血症小鼠模型的方法研究

目的:探讨高甘油三酯血症模型建立的新方法及其可能机制,并观察以橄榄油(olive oil,OO)和羧甲基纤维素钠(carboxymethyl cellulose sodium,CMC)溶液配制五味子素B(schisandrin B,Sch B)对其诱发小鼠高甘油三酯血症(hypertriglyceridemia,hTG)模型的影响,以便优化本模型的制作过程.方法:ICR小鼠,雄性,分为6组,每组10只动物:OO组、OO/Sch B组、OO/非诺贝特(fenofibrate,FF)组、CMC组、CMC/Sch B组、CMC/FF组.Sch B和FF的剂量分别为1和0.15 g·kg-1,一次灌胃给药后48 h用生化法检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein,LDL)、葡萄糖(glucose,GLU)水平和谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性,以及肝TG和TC含量;血清载脂蛋白B48(apolipoprotein B48,Apo B48)和极低密度脂蛋白胆固醇(very low-density lipoprotein,VLDL)用酶联免疫法检测.结果:OO/Sch B和CMC/Sch B均可升高小鼠血清和肝TG水平、降低肝GLU含量,但与CMC/Sch B组比较OO/Sch B组小鼠血清TG升高是前者的2.68倍,肝TG升高是前者的4.02倍(P＜0.01);OO组血清TG,TC和GLU与CMC组无明显差异,但OO组肝TG,TC和GLU水平高于CMC组(P＜0.01);OO/Sch B组和CMC/Sch B组小鼠血清LDL水平均显著升高(P＜0.01),但前者大于后者38.04％ (P ＜0.01).OO/Sch B和CMC/Sch B均可使小鼠肝指数增加(P＜0.01),但前者比后者增加明显(P＜0.05);OO/Sch B组小鼠血清ALT活性高于对照组81.14％(P ＜0.01).OO/Sch B和CMC/Sch B均抑制小鼠的体重增加,抑制率分别为47.78％和31.90％.结论:Sch B可成功诱导hTG小鼠模型,且用橄榄油配制Sch B诱导hTG模型优于用CMC溶液配制,为hTG的研究提供了一种新的造模途径.

2020

2021/07/20

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1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定

目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定.方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA.PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定.结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1:2.56×105,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×109 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74％、1.42％和0.63％,与其他物质交叉反应率均小于0.05％.结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础.

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2021/07/20

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美洲大蠊提取物Ento-A对湿热型溃疡性结肠炎模型大鼠的改善作用研究

目的:研究美洲大蠊提取物Ento-A对湿热型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的改善作用.方法:将70只大鼠随机分为正常对照组(n=8)和造模组(n=62),造模组大鼠采用高糖高脂、辛辣饮食联合2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制湿热型UC动物模型.将造模成功的48只大鼠随机分为模型对照组、美沙拉嗪组(300 mg/kg)、肠炎宁(300 mg/kg)和Ento-A低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg,以提取物计),每组8只.正常对照组和模型对照组大鼠灌胃生理盐水,其余各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续给药14 d.末次给药后,对大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤指数(CMDI)及病理组织学(HS)进行评分,测定大鼠脾指数、肝指数和结肠指数,并采用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中白细胞介素8(IL-8)、IL-17、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平和结肠组织中IL-2、前列腺素E2(PGE2)、髓过氧化物酶(MPO)水平.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠DAI评分、CMDI评分、HS评分、结肠指数以及血清中IL-8、IL-17、MDA水平和结肠组织中MPO、PGE2水平显著升高(P<0.01),血清中SOD水平和结肠组织中IL-2水平显著降低(P<0.01).与模型对照组比较,Ento-A高剂量组大鼠DAI评分、CMDI评分及血清中IL-17、MDA水平和结肠组织中PGE2水平显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中SOD水平和结肠组织中IL-2水平显著升高(P<0.01);Ento-A中剂量组大鼠CMDI评分、HS评分以及血清中IL-8、IL-17、MDA水平和结肠组织中PGE2、MPO水平显著降低(P<0.05或P<0.01),结肠组织中IL-2水平显著升高(P<0.01);Ento-A低剂量组大鼠HS评分以及血清中IL-17、MDA水平和结肠组织中MPO、PGE2水平显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中IL-2水平显著升高(P<0.01).结论:美洲大蠊提取物Ento-A可能通过调节免疫系统平衡、减少炎症损伤,发挥其对湿热型UC模型大鼠的改善作用.

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2021/07/20

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精胺对高糖引起的大鼠心肌纤维化的影响及其机制

目的:观察精胺对糖尿病心肌病(DCM)及高糖处理的心肌成纤维细胞(CFs)的保护作用并探讨其机制.方法:①动物实验:24只雄性Wistar大鼠随机分为正常组(Control),糖尿病组(T1D)和精胺组(T1D+Sp),每组8只.采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg/kg)复制1型糖尿病大鼠模型,精胺组在STZ注射前两周每天腹腔注射精胺(Sp,5 mg/(kg·d)),随后隔天注射,饲养至12周.检测各组大鼠血糖、胰岛素水平、射血分数(EF)和缩短分数(FS),并对大鼠心脏组织进行Masson染色和Sirius red染色.②细胞实验:出生1～3 d的大鼠心脏提取原代CFs,随机分为正常组(Control),高糖组(HG)和精胺组(HG+Sp,每组n=6).高糖(HG,40 mmol/L)处理CFs复制细胞模型,精胺组在高糖处理前给予Sp(5μmol/L)预处理30 min.CCK8检测细胞活性,ELISA法检测培养基中胶原含量,Western blot测定细胞周期相关蛋白(PCNA、CyclinD1及P27)的表达.结果:与Control组相比,T1 D大鼠血糖显著上升,胰岛素水平和心脏功能降低;染色结果显示心肌胶原含量增加.同时,HG组细胞活力与培养基中胶原含量明显增加,PCNA、CyclinD1表达上调,而P27表达下调.精胺能减轻上述变化,表现为改善心脏功能,调节细胞周期蛋白表达和减轻心肌纤维化水平.结论:精胺可减轻糖尿病心肌病心肌纤维化的发生,其机制可能与调节细胞周期有关.

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2021/07/20

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含笑内酯衍生物ACT001对肺纤维化的治疗作用研究

目的 评价含笑内酯衍生物ACT001对肺纤维化(pul-monary fibrosis,PF)的治疗作用及药理机制.方法 分别建立由百草枯、博来霉素诱导的两种PF动物模型,在动物一般生活状态、体重、肺系数、肺组织羟脯氨酸及肺组织胶原百分含量、炎症因子、肺组织病理切片等方面评价ACT001的药效,探究ACT001对肺纤维化的治疗作用及初步的药理机制.结果 ACT001可改善百草枯和博来霉素诱导的PF小鼠模型的一般生活状态、增加其体重、降低肺泡炎症、降低小鼠肺系数、降低小鼠肺组织羟脯氨酸及胶原百分含量,并且可以调控PF过程中的TGF-β1、TNF-α及IFN-γ等关键细胞因子的表达及上皮-间充质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志蛋白的表达.结论 ACT001通过抑制NF-κB的活化,抑制上皮-间充质转变及炎症因子的释放等发挥治疗PF的作用,有望开发为治疗PF的新药.

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脊髓损伤恒河猴下肢残留跨步能力的评估

目的 观察评估脊髓损伤后恒河猴的下肢残留跨步能力.方法 成年雌性恒河猴4只,胸椎T7-9右半侧切除脊髓组织1 cm.分别在脊髓损伤前、脊髓损伤后6周和12周,采用VICON系统进行双下肢步态测试,获取动物在跑步机上连续跨步中的双下肢步态周期时长,步长、步高、膝/踝关节角度幅值以及联动参数比值,并量化分析.结果 脊髓损伤后,恒河猴双下肢的协调性破坏,右下肢明显拖拽;左下肢步态周期时长显著增加(P<0.001),膝/踝关节角度屈曲/伸展的幅值均显著增大(P<0.001).联动参数比值在脊髓损伤前后均无显著性差异(P>0.05).左下肢步态周期时长与步长(r=0.838,P=0.001)、步高(r=0.726,P=0.007)和踝关节角度变化幅值(r=0.766,P=0.004)均相关,踝关节角度变化幅值与步长呈正相关(r=0.627,P=0.029).结论 脊髓损伤后恒河猴健侧肢体步态模式发生改变.健侧下肢代偿性调整运动策略,以适应患侧下肢功能的缺失.

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2021/07/20

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miR-146 a-5 p通过调控Notch2表达对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌损伤的影响

目的:探究miR-146a-5p调控Notch2表达对心肌缺血再灌注大鼠心肌损伤的影响及作用机制.方法:将大鼠分为Control组、MI/R组、MI/R+mimic mock组、MI/R+mimic组,构建MI/R大鼠模型并使用相应的慢病毒处理,检测各组大鼠心脏LVEDD、LVESD和心肌梗死面积,RT-PCR检测miR-146a-5p基因表达水平,ELISA检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组化检测Ki67阳性细胞率,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Notch2、Hes1蛋白水平.将细胞分为Control组、OGD/R组、OGD/R+mimic mock组、OGD/R+mimic组、OGD/R+pc-Notch2组、OGD/R+mimic+pc-Notch2组,缺糖缺氧复糖复氧诱导心肌细胞损伤并转染对应的mimic,RT-PCR检测miR-146a-5p和Notch2基因表达水平,Western blot检测Notch2蛋白水平,MTT检测细胞活性、Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA水平,生物信息学及荧光素酶报告实验检测miR-146a-5p和Notch2的靶向关系.结果:在动物实验中,与Control组比较,MI/R组miR-146a-5p基因表达水平降低、LVEDD、LVESD水平升高,心肌梗死面积,CK-MB、CK、LDH水平升高,心肌细胞凋亡率升高,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平降低,MDA水平升高,IL-6、IL-1β、TNF-α 水平升高,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低;与MI/R组比较,MI/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高、LVEDD、LVESD水平降低,心肌梗死面积、CK-MB、CK、LDH水平降低,心肌细胞凋亡率降低,Ki67阳性细胞率升高,SOD、GSH-Px水平升高,MDA水平降低,IL-6、IL-1β、TNF-α 水平降低,Bax、Notch2、Hes1蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高.在细胞实验中,与Control组比较,OGD/R组miR-146a-5p基因表达水平降低,Notch2基因和蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R组比较,OGD/R+mimic组miR-146a-5p基因表达水平升高,Notch2基因和蛋白表达水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低,OGD/R+pc-Notch2组Notch2蛋白表达水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+mimic组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平升高,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,SOD水平降低,MDA水平升高;与OGD/R+pc-Notch2组比较,OGD/R+mimic+pc-Notch2组Notch2蛋白水平降低,细胞活力升高,细胞凋亡率降低,SOD水平升高,MDA水平降低.在荧光素酶报告实验中,与Notch2 wt组比较,Notch2 wt+miR-146a mimic组荧光素酶活性显著降低.结论:miR-146a-5p能够在大鼠心肌缺血再灌注中减轻心肌损伤,其作用机制与抑制Notch2基因的表达有关.

2020

2021/07/20

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儿科用中药发育毒理学研究及评价进展

自古医家便有重视小儿用药的"不药之药"、"谨慎用药"等合理用药和安全用药的原则,结合幼龄动物毒理学试验(Juvenile animal study)等现代医学模式对中药开展深入研究,有助于了解儿科用中药发育毒理学特点.在开展儿科用中药安全性评价时,需要设定更为全面的发育毒理学评价指标,结合儿童发育特性、中药特色以及现代医学法规,关注临床相关指标,开展儿科用中药毒动学研究.同时还需要考虑儿童生理基础和药物代谢特点以及不同发育阶段影响药动学等因素.国家立法和监管是完善真正属于中药安全性评价科学体系的重要保障;呼吁中西医结合联动研发,调动药物研发和安全性评价人员的积极性,促使儿科用中药的非临床安全性评价工作步入正轨,以推动儿科用药研发的发展.

2020

2021/07/20

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鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的研究进展

熊去氧胆酸(UDCA)被广泛用于临床上治疗肝胆疾病,起初主要是从天然熊胆和熊胆汁中提取,但是活熊资源十分有限,且违反了动物保护法.目前,由于鹅去氧胆酸廉价易得,是合成熊去氧胆酸和其他甾体化合物的主要原料.本文对这一领域的研究进展进行综述,为日后的相关研究提供参考.

2020

2021/07/20

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