当前位置：
> Cas9基因敲入工具鼠
| 品系名称 | Cas9基因敲入工具鼠 |
|---|---|
| 编号Number | |
| 英文名称English name | B6J.129(Cg)-Gt(ROSA)26Sortm1.1(CAG-cas9*,-EGFP)Fezh/J |
| 常用名称Common name | Rosa26-Cas9 knockin on B6J |
| 基因信息Genetic information | |
| 疾病名称Disease name | |
| 制作类型Production type | CRISPR;Cas9 |
| 制作方法Making method |
使用 Rosa26-LSL-Cas9 靶向载体制备 Rosa26-Cas9 基因敲入。该载体设计有（从 5' 到 3'）一个 5' 同源臂、一个广泛表达的 CAG 启动子、loxP 侧翼的 3xSV40 polyA 终止盒、一个 3X-FLAG 表位标签、一个哺乳动物密码子优化的 cas9 基因（源自酿脓链球菌 Cas 9 [SpCas9]），侧翼有 2 个核定位信号、一个 P2A 核糖体跳跃剪切肽序列、一个增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) 基因、一个土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件、牛生长激素 polyA、pPGK-Neo-pA 阳性选择盒和一个 3' 同源臂。该载体电转化入源自 129 的 R1 胚胎干 (ES) 细胞。将正确靶标的 ES 细胞注射到 C57BL/6N 囊胚中。将获得的嵌合小鼠通过与 C57BL/6N 小鼠杂交进行生殖系遗传检测。然后将小鼠与 FVB 背景的 β 肌动蛋白驱动的 Cre 重组酶品系（品系货号 003376 https://www.jax.org/strain/003376 ）杂交，以切除 floxed STOP 盒。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 小鼠（品系货号 000664 |
| 背景品系Background lines | |
| 表型特征Phenotypic characteristics |
Rosa26-Cas9 基因敲入小鼠具有 CAG 启动子驱动广泛表达 cas9 和 EGFP。EGFP 荧光广泛存在于脑、肾、肝、脾和心脏组织中，可在全脑中检测到 Cas9 蛋白。对多个器官（包括脑、肾、肝、脾、心脏组织）的分析表明，组成型 cas9 表达不会导致任何可检测到的毒性、形态学异常、肿瘤形成或 DNA 损伤或凋亡标志物的上调。通过病毒传递 cas9 的基因编辑受载体容量限制，而 Rosa26-Cas9 小鼠只需要特定的 gRNA 来同时产生单个或多个突变。混合遗传背景和 C57BL/6J 同源背景下，Rosa26-Cas9 基因敲入纯合小鼠可存活且可繁育。有些小鼠具有白色腹部斑点。 |
| 引物序列Primer sequence | |
| 应用领域Application area | |
| 繁殖方式Mode of reproduction | |
| 保存状态Save state | |
| 提供单位Provide unit | 杰克森实验室 |
| 提供者Provider | Massachusetts Institute of Technology |
| 参考文献Reference | Platt RJ; Chen S; Zhou Y; Yim MJ; Swiech L; Kempton HR; Dahlman JE; Parnas O; Eisenhaure TM; Jovanovic M; Graham DB; Jhunjhunwala S; Heidenreich M; Xavier RJ; Langer R; Anderson DG; Hacohen N; Regev A; Feng G; Sharp PA; Zhang F. 2014. CRISPR-Cas9 Knockin Mice for Genome Editing and Cancer Modeling. Cell 159(2):440-55 PubMed: 25263330 MGI: J:213550 |
| 录入/更新时间Date | 2022.5.23 |
| 备注Remarks |
