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| 中文名称Chinese name | Necl4基因敲除小鼠抑郁模型 |
|---|---|
| 编号Model number | |
| 英文名称English name | Necl4 knockout induced depression mouse model |
| 物种Species name | 小鼠 |
| 品系Strain name | |
| 人类疾病Human diseases | 抑郁症 |
| 传染性Infectivity | 无 |
| 微生物Microorganism | |
| 类别Category | 基因敲除小鼠模型 |
| 造模因素Modeling factors | 基因造模，需要利用基因打靶工具和保证打靶的准确性。 |
| 制作方法Making method | （1） Necl4全身敲除小鼠的构建 首先从Invitrogen公司获得含有Necl4的基因组DNA的BAC克隆，之后用诱导型Cre重组酶基因(CRE-ERT2)和新霉素耐药基因（NeoR）取代Necl4的第一外显子构建基因靶向载体。通过电穿孔方法将线性化的靶向载体导入小鼠胚胎干细胞（ES）中。在新霉素选择后，用限制性内切酶Spe Ⅰ 酶切ES克隆的基因组DNA，酶切后的野生型等位基因长度为8.9kb，突变型等位基因长度为7.3kb。用3´侧翼探针进行 Southern杂交，筛选出198个独立的ES克隆。最终鉴定出5个同源重组克隆，并将其中2个克隆注射到囊胚中，产生嵌合体小鼠进行生殖系传递，产生F1杂合子小鼠。 （2）小鼠繁殖与饲养 小鼠以杂合子配种繁殖，放置于12小时的明/暗周期的屏障环境中。 （3）小鼠基因型鉴定 小鼠出生后7天至15天剪取其脚趾或/和耳朵进行编号，同时将剪取的组织加入100μl含有蛋白酶K的组织裂解液，置于56℃恒温水浴锅中消化（至少6小时），消化完成后置于85℃金属浴中加热45分钟。样品可以直接用于PCR鉴定小鼠基因型，或于4℃短期保存。 |
| 生物学特征Biological characteristics | |
| 医学用途Medical use | 可用于研究Necl4基因在多种疾病中的功能和机制，为抑郁症的治疗提供新的潜在靶点，也为抑郁症的药物筛选提供新的实验动物模型。 |
| 临床表现Clinical manifestation | |
| 病理表现Pathology | |
| 发病天数Days of onset | |
| 发病过程Pathogenesis process | |
| 临床诊断Clinical diagnosis | |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success | Necl4敲除小鼠在糖水偏好实验中表现出更低的糖水偏好率提示其快感缺失，在强迫游泳实验中的不动时间增加表明其绝望情绪增强，在新环境抑制摄食实验中的首次摄食时间的显著延长也表明其对摄食的兴趣降低。 酶联免疫吸附实验是利用ELISA试剂盒检测抑郁症相关神经递质（5-HT和NA）的浓度，这两种因子能够参与情绪的调节，在抑郁患者中浓度下降。本动物模型的脑组织检测结果显示，Necl4敲除小鼠在前额叶皮层（mPFC）和中脑（MB）中的5-HT浓度显著下降，此外在多个脑区的浓度也有轻微下降，因此推测Necl4敲除会导致小鼠的抑郁情绪增强。 |
| 保藏单位Preservation unit | 中国医学科学院基础医学研究所 |
| 参考文献Reference | 1、Zhu, Y., Li, H., Li, K., Zhao, X., An, T., Hu, X., Park, J., Huang, H., Bin, Y., Qiang, B., Yuan, J., Peng, X., and Qiu, M. (2013) Necl-4/SynCAM-4 is expressed in myelinating oligodendrocytes but not required for axonal myelination. PloS one 8, e64264 2、胡耕，刘枭，舒鹏程，彭小忠。 突触黏附分子 NECL4对大脑皮质 Ca2+ -CaMKII-CDC42信号通路的影响。 基础医学与临床40,2020,7(7) :929-933. 3、Liu, X., Ran, K., Hu, G., Yin, B., Qiang, B., Han, W., Shu, P., and Peng, X. (2023) Indispensable role of Nectin-like 4 in regulating synapse-related molecules, synaptic structure, and individual behavior. FASEB J 37, e22970 |
| 录入/更新时间Date | 2023.10.27 |
| 备注Remarks |
