| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 建立Sprague Dawley(SD)大鼠的正常膝关节滑膜细胞原代培养方法及脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)炎症模型.方法 选取80～120 g SPF级幼年SD大鼠,分离其滑膜组织,原代培养至第3代,用组织化学染色法和EdU法检测FLS蛋白标志物vimentin和增殖功能.同时,用滑膜组织作对照,检测第3代至第8代原代培养FLS的特征蛋白表达,筛选具有生理功能的高纯度且可用于后续实验的FLS细胞.LPS诱导FLS炎症后,检测LPS制激FLS不同时间点的IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达,根据实验结果确定LPS成功诱导FLS炎症模型的时间点.最后,检测FLS被LPS诱导前后的细胞因子、增殖功能和特征蛋白的表达,为分析FLS炎症模型提供实验数据.结果 采用0.2％I型胶原酶消化法,成功培养了FLS原代细胞.经检测蛋白标志物vimentin,第3代FLS纯度达98％以上.通过FLS特征蛋白检测,筛选出具有生理功能且可用作后续实验的FLS为第3代至第7代原代细胞.通过对LPS诱导后的FLS的细胞因子和特征蛋白分析,确定1μg/mL LPS诱导FLS细胞3 h,能复制出FLS炎症模型.结论 LPS诱导的FLS炎症模型可作为体外研究炎性关节病的细胞模型. |
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