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目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4/6 (cyclin-dependentkinases 4/6,CDK4/6)抑制剂哌柏西利对人恶性黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:体外培养人黑素瘤A2058、SK-MEL-5和A375细胞,以耐药A2058细胞作为阴性对照.用不同浓度的哌柏西利处理细胞24和48 h后,采用CellTiter-Glo(R)发光法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞增殖的影响.碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞中细胞周期相关蛋白[CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)和磷酸化Rb (phospho-Rb,p-Rb)]表达的影响.Annexin V-FITC/PI双染法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞凋亡的影响.采用NOD/SCID小鼠建立A2058、SK-MEL-5和A375细胞的皮下移植瘤模型,将小鼠分为2组[哌柏西利(80 mg/kg)处理组和乳酸钠缓冲液处理组],通过体内实验验证哌柏西利的安全性和疗效.结果:与阴性对照A2058细胞相比,哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用(P值均＜0.001).哌柏西利能够引起SK-MEL-5和A375细胞中G1期细胞所占比例增高(P值均＜0.05);蛋白质印迹法检测发现哌柏西利能够使SK-MEL-5和A375细胞中细胞周期G1/S期检查点关键蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1以及p-Rb的表达水平明显下调(P值均＜0.001).哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞均未见明显的促凋亡作用(P值均＞ 0.05).在荷瘤小鼠模型中,哌柏西利安全性高,对小鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用[对SK-MEL-5细胞移植瘤的抑制率为(64.6±9.8)％,对A375细胞移植瘤的抑制率为(76.3±6.6)％](P值均＜0.001).结论:哌柏西利对黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用,可引起细胞周期G1期阻滞. |
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