伊班膦酸钠干预骨关节炎模型大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号通路的变化

背景:丝裂原活化蛋白激酶信号通路参与成骨细胞与破骨细胞的分化,与软骨下骨重建过程密切相关,在骨关节炎的发生发展中起重要作用.双膦酸盐作为骨吸收抑制剂,主要用于骨质疏松的治疗.目的:探讨伊班膦酸钠对大鼠骨关节炎的治疗效果,以及其对丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响.方法:实验方案经南华大学附属第一医院动物实验伦理委员会批准.30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组.模型组和治疗组行双侧去卵巢及前交叉韧带切断术,假手术组大鼠只切除卵巢周围与卵巢大小相仿的脂肪组织,切开双侧膝关节腔,但不切断前交叉韧带.术后1周,治疗组予以腹腔注射伊班膦酸钠10μg/kg,模型组予以腹腔注射等量生理盐水,假手术组不作干预.12周以后,处死实验动物,进行关节软骨的组织形态学观察及Mankin评分,软骨下骨的Micro-CT扫描及骨组织显微结构定量分析,检测丝裂原活化蛋白激酶信号通路中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)和c-Jun氨基酸末端激酶(JNK)的mRNA表达量及蛋白表达水平.结果 与结论:①模型组软骨结构明显破坏,Mankin评分较假手术组明显增高,而治疗组的Mankin评分较模型组显著降低(P＜0.01);②与假手术组比较,模型组中的骨密度、骨体积分数、骨小梁数量降低,骨小梁分离度显著增高(P＜0.01);与模型组相比,治疗组的骨密度、骨体积分数、骨小梁数量增加,骨小梁分离度明显下降(P＜ 0.01);③模型组中的ERK1、JNK mRNA表达和蛋白表达较假手术组明显增加(P＜0.05,P＜ 0.01);与模型组相比,治疗组中的ERK1、JNK mRNA表达和蛋白表达显著降低(P＜0.05);④结果说明,伊班膦酸钠可能通过抑制ERK1、JNK丝裂原活化蛋白激酶信号通路的表达改善膝骨关节炎大鼠的软骨下骨的微结构,抑制软骨的退变.

2020

2021/07/20

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基于16S rRNA高通量测序技术分析Ⅰ型骨质疏松大鼠肠道菌群结构变化

目的 探讨Ⅰ型骨质疏松大鼠肠道菌群的结构变化.方法 采用去势法建立Ⅰ型骨质疏松大鼠模型(n=24):雌性SD大鼠随机分为4组(n=6),实验动物自由进食水,12h光照周期.分别在去势前和去势后4、8、12周共4个时间点,采用直接收集法采集大鼠粪便.利用16S rRNA高通量肠菌基因测序技术,在phylum(门),class(纲),order(目),family(科),genus(属),species(种)级别分析肠道菌群的变化规律.结果 厚壁菌门与拟杆菌门是肠道菌群的主要构成肠菌,无论在去势前或去势后,二者含量之和均超过肠道菌群总量的90％.厚壁菌门含量在去势后下降并且持续到术后8周,其含量在术后12周显著增加(P＜0.05);拟杆菌门的含量变化趋势与此相反.另外,在纲、目级别的物种差异变化趋势较为一致.普雷沃氏菌属、Odoribacter含量在术后12周明显降低(P＜0.05),而螺杆菌属与Alistipes在术后12周含量显著增多(P＜0.05).在种级别的分类中,白色瘤胃球菌在术后12周显著增多(P＜0.05),而单形拟杆菌含量显著降低(P＜0.05).结论 Ⅰ型骨质疏松大鼠的肠道菌群在不同分类级别的结构组成上发生了显著性改变,为研究肠道菌群和骨质疏松症的关系提供理论依据.

2020

2021/07/20

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骨髓间充质干细胞关节腔注射治疗兔软骨缺损的最适浓度

背景:骨髓间充质干细胞现已广泛用于动物实验及临床研究中,各研究所用的细胞浓度、治疗次数及研究结果存在明显差异,缺乏最适细胞浓度的标准.目的:探讨骨髓间充质干细胞关节腔内注射治疗兔软骨缺损的最适细胞浓度.方法:取6月龄雄性新西兰大白兔30只,按骨髓间充质干细胞关节腔注射浓度随机分为对照组、1×108 L-1,1×109 L-1,1×1010 L-1,1×1011 L-1组.在大白兔双侧股骨滑车建立直径3.0 mm、深度2.0 mm的软骨缺损模型.建模成功1周后,对照组双侧膝关节腔内注射1 mL生理盐水,其他4组分别注射1 mL细胞浓度为1×108 L-1,1×109 L-1,1×1010 L-1,1×1011 L-1的骨髓间充质干细胞悬液.注射后6周及12周,大体观察股骨滑车标本,行苏木精-伊红染色、番红-O-固绿染色、Ⅰ型及Ⅱ型胶原免疫组化染色,评估软骨组织修复效果.结果与结论:对照组术后缺损区域明显,软骨组织无明显再生;1×108 L-1,1×109 L-1,1×1010 L-1组软骨缺损区域可见软骨组织再生,且修复效果随注射间充质干细胞浓度增加而增强.1×1011 L-1组软骨修复效果与1×1010 L-1组相似(P>0.05).结果表明,1×1010 L-1是骨髓间充质干细胞关节腔内注射治疗软骨缺损的最佳细胞浓度,浓度过高时并不能增强其修复效果.

2020

2021/07/20

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重复制动应激对雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响

目的:探索重复制动应激对雌性大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的影响.方法:40只SD雌鼠随机分为两组(n=20),对照组和实验组,一组正常饲养,一组采取递增负荷束缚应激,每天置于束缚器内制动应激一次(从上午9:00开始),第1日制动2 h,以后采用递增负荷,每日增加0.5 h,持续两周,通过检测体重、脏器系数、动情周期、性激素、病理和相关基因的表达探索其对下丘脑-垂体-卵巢轴的危害.结果:重复制动应激使雌性大鼠体重下降、动情周期延长,卵巢和子宫的脏器系数和形态发生改变,利用qPCR技术对其相关基因检测,发现下丘脑促性腺激素释放激素、垂体促性腺激素释放激素受体、促卵泡生成素和促黄体生成素mRNA的表达显著下降,卵巢促卵泡生成素和黄体生成素受体mRNA的表达显著上升,卵巢和子宫雌激素受体mRNA的表达显著下降.结论:重复制动应激可能通过干扰下丘脑-垂体-卵巢轴的内分泌调节作用,使动情周期紊乱,从而损伤雌性动物的性腺和生殖内分泌功能.

2020

2021/07/20

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自体块状皮质骨修复种植区颌骨缺损

背景:自体骨有骨传导、骨诱导及骨生成的特性,同时具有良好的生物相容性,移植后无排斥反应.但关于自体骨块移植后的骨块是完全被吸收替代?还是能保留细胞活性长期存留?仍存在争议.目的:观察皮质骨移植后改建再生过程中的组织学变化.方法:6只健康比格犬麻醉后拔除两侧上颌前磨牙,并去除颊侧宽约10 mm、长约15 mm、厚度约2 mm的骨板,建立上颌骨缺损模型,在双侧下颌骨体颊侧切取相应大小的块状皮质骨并修整边缘.在上颌骨缺损区移植皮质骨块,一侧为单纯块状皮质骨移植,另一侧在块状皮质骨移植同期植入种植体.分别于骨移植后3,6个月取材,进行大体观测和组织学观察,分析移植骨块的吸收率、移植骨中的细胞存活率.实验方案经大连医科大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①大体观察可见移植骨块体积逐渐缩小,边缘圆钝,与基骨结合稳固;②6个月时全部种植体脱落;硬组织磨片可见移植骨块与基骨间存在新生骨连接;6个月时移植骨骨陷窝孔隙率明显低于3个月,移植骨吸收率显著高于3个月(均P＜0.05);③结果说明,块状皮质骨移植后,能够与受植区基骨发生骨结合,其内部的骨细胞部分保持活力,随着愈合期延长,新生骨细胞的比例增加,移植骨块的体积逐渐变小.皮质骨移植同期种植后移植物吸收明显,种植体骨结合不良.

2020

2021/07/20

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华蟾素注射液心脏毒性评价

目的:华蟾素注射液作为一种传统中药注射剂,已在临床使用40多年,已有临床报道显示其可能诱导心血管不良反应.故而本实验的目的为评价华蟾素注射液心脏毒性.方法:本实验为通过SpragueDawley (SD)大鼠连续2周静脉注射给予华蟾素注射液,探索华蟾素注射液对心脏的毒性作用.本实验初次设3个组,包括溶剂对照组(0 g·kg-1,0.9％氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量分别为1和5 g·kg-1),给药容量为10 mL·kg-1.实验每组10只动物,雌雄各半.补充设计SD大鼠连续1周静脉注射给予华蟾素注射液.设2个组,包括溶剂对照组(0 g·kg-1,0.9％氯化钠注射液)和华蟾素注射液组(剂量为10g·kg-1),给药容量为20 mL·kg-1.实验每组10只动物,雌雄各半.实验期间评估以下指标:死亡或濒死、临床征状、心肌损伤指标[心肌钙蛋白I (cardiac troponin Ⅰ,cTn-Ⅰ)、肌酸磷化脢-同功脢MB(creatine kinase isoenzymes MB,CK-MB)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]、大体解剖、脏器重量以及组织病理学检查.结果:实验期间,各剂量组动物均未见死亡或濒死.1,5和10 g·kg-1组雌雄动物临床征状、脏器重量、心肌损伤指标(CK-MB,AST,LDH,CRP)大体解剖以及组织病理学检查均未见与受试物相关的改变异常.与溶剂对照组相比,仅5和10 g·kg-1组cTn-Ⅰ出现与受试物相关的异常改变,cTn-Ⅰ在给药后1.5和/或3h升高,且至24 h已经基本恢复.结论:本实验结果证实了华蟾素注射液具有心脏毒性,其次为临床上监测华蟾素注射液的心脏毒性提供了可参考的监测时间点和监测生物标志物.

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2021/07/20

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Nrf2激动剂EGCG对糖尿病伤口愈合障碍的治疗作用研究

目的:建立糖尿病及糖尿病伤口愈合障碍动物模型,研究EGCG对糖尿病伤口愈合障碍的治疗作用,探讨相关的免疫学机制和分子生物学机制.方法:腹腔注射STZ,检测空腹血糖,建立糖尿病小鼠模型.高糖高脂饮食长期饲养,使其处于稳定的糖尿病状态.人工制造皮肤创口,动态观察伤口愈合率,建立糖尿病伤口愈合障碍动物模型.期间,按照分组要求,应用EGCG进行药物治疗,根据伤口愈合率研究治疗效果.治疗期满,取创面皮肤进行相关指标检测.应用Western blot技术检测Nrf2、HO-1、NQO1、ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白质相对表达量;免疫组化技术检测3-NT;对各检测指标进行统计学分析,阐述EGCG治疗糖尿病伤口愈合障碍的作用机制.结果:糖尿病组伤口愈合率明显低于正常对照组(P<0.01),证明糖尿病伤口愈合障碍建模成功;糖尿病小鼠EGCG治疗组的伤口愈合率明显高于非治疗组(P<0.05).糖尿病组的Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量均低于正常对照组(P<0.05);ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白表达量均高于正常对照组(P<0.05).糖尿病小鼠中,EGCG治疗组Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达量均高于其非治疗组(P<0.05);ICAM-1、VCAM-1和Caspase12等蛋白表达量均低于其非治疗组(P<0.05).免疫组化实验检测3-NT结果显示,糖尿病组3-NT阳性率明显高于Control组,证明糖尿病机体皮肤伤口处于较高水平的氧化应激状态.糖尿病小鼠EGCG治疗组3-NT阳性率明显少于其非治疗组(P<0.05).结论:Nrf2是糖尿病并发症的关键保护性因子;上调机体Nrf2表达可有效减轻糖尿病并发症;EGCG作为Nrf2激动剂具有对抗糖尿病引起的氧化应激、炎症和细胞凋亡的作用,对DNHW有明显的治疗作用.

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2021/07/20

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基于OPG/RANKL信号通路探讨姜黄素对去势骨质疏松模型大鼠骨代谢平衡的影响

目的:探讨姜黄素对去势骨质疏松模型大鼠骨代谢平衡的影响,并探讨其可能机制.方法:将雌性Wistar大鼠随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、雌二醇组[C组(阳性对照),戊酸雌二醇50 μg/(kg· d)]和姜黄素低、中、高剂量组[D～F组,55、110、165 μg/(kg·d)],每组15只.除A组外,其余各组均采用去卵巢法建立去势骨质疏松模型.造模后,A、B组大鼠均灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应药物,体积均为30 mL/kg,每日1次,连续12周.采用酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠血清骨代谢标志物[骨特异性碱性磷酸酶、核心结合因子α1、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽、Ⅰ型前胶原氨基端前肽、骨钙素]含量,采用实验动物微型CT影像系统检测大鼠骨密度(BMD)和骨小梁结构参数[相对骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、连接密度(Conn.D)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、结构模型指数(SMI)],采用逆转录聚合酶链式反应法和Western blotting法分别检测下丘脑和股骨组织中骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA及蛋白的表达情况.结果:与A组比较,B组大鼠血清骨代谢标志物含量,BMD和BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D以及OPGmRNA及其蛋白的表达量均显著降低,Tb.Sp、SMI以及RANKL mRNA及其蛋白的表达量均显著升高(P＜0.05).与B组比较,各给药组大鼠血清骨代谢标志物含量,BMD和BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D以及OPGmRNA及其蛋白的表达量均显著升高,Tb.Sp、SMI以及RANKL mRNA及其蛋白的表达量均显著降低,且姜黄素各组效果均呈剂量依赖性(P＜0.05或P＜0.01).结论:姜黄素能够改善去势骨质疏松模型大鼠的骨代谢水平,增加其BMD、改善骨小梁微结构、抑制骨吸收;这种作用可能与调控OPG/RANKL信号通路有关.

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2021/07/20

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老年胆结石伴胆囊炎患者病因及健康教育在术后干预中的应用

目的 调查分析老年结石性胆囊炎患者的病因,探究健康教育在患者术后干预中的应用效果.方法 设计调查问卷,对患者和健康志愿者的一般资料、饮食结构和生活习惯进行调查.采用生存质量测定表(QOL-BREF)对患者术后的生活质量进行评分.根据分组对患者进行不同的术后干预,比较健康知识的掌握情况、对工作的满意度、术后生活质量评分、术后输液时间、术后首次下床活动时间、住院天数及再入院病例数.结果 患者组的人口以低学历、务农及居住在农村为主,健康对照组的人口以高学历、退休工人,居住在城镇为主.患者组的体重指数(BMI)、收缩压(SBP)及舒张压(DBP)均明显高于健康对照组(P<0.05).观察组在进食肥猪肉、油炸食物、动物肝脏的比率要明显高于健康对照组(P<0.05),但进食粗粮和牛奶的比率明显低于健康对照组(P<0.05).观察组进食油腻食物的比率要明显高于健康对照组(P<0.05).观察组的食物中肉类占多数,健康对照组的食物中肉类较少.观察组偶尔饮酒的比率要明显高于健康对照组(P<0.05).实验组患者对健康知识的掌握度明显高于实验对照组(P<0.05),且对工作的满意度也明显高于实验对照组(P<0.05).实验组患者的术后首次下床活动时间、输液时间及住院时间均明显低于实验对照组患者(P<0.05),且生活质量评分的得分显著高于实验对照组(P<0.05).结论 饮食相关知识、多肉低蛋白饮食、进食时间不规律、喝水少等因素可能与结石性胆囊炎的发病相关,加强术后对患者和家属的健康教育能有效提升患者的康复效果.

2020

2021/07/20

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颗粒软骨加α-氰基丙烯酸正丁酯胶结合3D打印技术辅助制作个性化耳支架

背景:传统耳再造手术中耳支架的制作容易导致再造耳失真,3D打印技术使个性化、高仿真的小耳再造成为可能.目的:探讨颗粒软骨加α-氰基丙烯酸正丁酯结合3D打印技术制作个性化耳支架的可行性.方法:根据耳畸形患者健侧耳制作患侧耳的3D耳支架阳模和阴模,将颗粒软骨用α-氰基丙烯酸正丁酯粘连放入阴模中,同时对比阳模微调,制成耳软骨支架后,将其植入新西兰大白兔背部,动态观察再造耳郭的形态,术后4,8,12周分批取出耳支架,组织学观察颗粒软骨间连接情况、软骨的存活状况等,免疫组化观察Ⅱ型胶原表达.动物实验获得湖南师范大学实验动物福利伦理审查委员会批准(批准号:201517).结果 与结论:①大体观察:与术前比较,术后4,8,12周的再造耳郭长度、宽度、高度无明显变化,质量明显增加(P＜0.05);②组织学观察:颗粒软骨周围可见炎性细胞浸润,随着标本植入时间延长,炎性细胞逐渐减少,附着支架的筋膜中有较多血管生成;随着植入时间的延长,软骨膜内新生软骨细胞逐渐增多,体积逐渐增大,成熟软骨细胞逐渐增多;软骨碎片之间的α-氰基丙烯酸正丁酯未见明显分解,绝大部分软骨片之间仍被α-氰基丙烯酸正丁酯间隔,少部分软骨片之间有纤维连接形成,随着植入时间延长,软骨片之间的连接有增多的趋势;③免疫组化学观察:随着标本植入时间延长,Ⅱ型胶原表达逐渐增强;④结果表明:颗粒软骨加α-氰基丙烯酸正丁酯结合3D打印模具可以制作个性化耳支架.

2020

2021/07/20

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