LncRNA SNHG20通过抑制c-Fos转录调控认知功能

目的 研究lncRNA SNHG20在神经元活化过程中的作用.方法 通过对KCl激活的神经元数据库进行分析,筛选出变化明显的lncRNA;使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对在体外培养的KCl活化的神经元以及学习记忆模式刺激的实验动物的海马脑区进行结果验证;RT-qPCR以及Western blot检测过表达SNHG20的神经元中相关基因的表达;使用4-Thiouridine(4sU)标记新生成的RNA并通过RT-qPCR检测新生成的c-Fos mRNA水平;海马脑区AAV病毒脑注射后,对小鼠进行相关的行为学检测.结果 SNHG20的表达水平在神经元活化后快速并且明显下降.SNHG20过表达后,抑制了早期响应基因c-Fos的RNA以及蛋白质水平,且新生成的c-Fos的mRNA水平较对照组明显下降.SNHG20也抑制了c-Fos通路下游靶基因,特别是Annexin A2(ANXA2)的水平.在体的海马脑区SNHG20过表达的小鼠表现出明显的学习记忆功能障碍.结论 SNHG20能够通过抑制c-Fos的表达参与调控学习记忆过程.

2020

2021/07/20

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lncRNA GAS5通过抑制MAPK/ERK信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程

目的:探讨lncRNA GAS5对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及相关机制.方法:采用qPCR检测lncRNA GAS5在乳腺癌组织中和细胞系中的表达差异;Transwell实验和划痕实验分别检测lncRNA GAS5对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响;Western blot检测lncRNA GAS5对EMT的影响以及潜在作用机制;裸鼠成瘤实验验证lncRNA GAS5对动物体内成瘤的影响.结果:与癌旁正常组织相比,lncRNA GAS5在乳腺癌组织中呈低表达,而且在MDA-MB-231细胞中的表达最低;lncRNA GAS5的上调显著减低了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;lncRNA GAS5的过表达使MDA-MB-231细胞中的E-cadherin蛋白显著升高,而N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达显著降低,而使用MAPK/ERK信号通路的抑制剂U0126能抵消lncRNA GAS5对MDA-MB-231细胞EMT的影响;结论:lncRNA GAS5能通过抑制MAPK/ERK信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程.

2020

2021/07/20

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补肾壮督方含药血清对髓核细胞线粒体凋亡通路的影响

背景:线粒体凋亡通路是细胞凋亡中的重要通路,前期动物实验发现补肾壮督方可通过抑制线粒体凋亡通路改善椎间盘退变,但其作用机制还有待研究.目的:观察补肾壮督方含药血清对人髓核细胞线粒体凋亡通路关键蛋白的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制.方法:①37只SD雄性大鼠,随机分为正常组、低剂量中药组[0.506 g/(kg·d)]、中剂量中药组[1.012 g/(kg·d)]及高剂量中药组[2.024 g/(kg·d)],连续灌胃2周,灌胃结束后制备含药血清;②人髓核细胞随机分为正常组、模型组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组,模型组用200 μmol/L H2O2处理6h,正常组不进行任何处理,低、中、高剂量含药血清组造模后用体积分数为2％含药血清干预48 h.透射电镜观察髓核细胞的超微结构,流式细胞术检测髓核细胞凋亡率和线粒体膜电位,qPCR和Western blot检测Apaf1、Bcl-2、Bax及Cytc的表达.结果 与结论:①与正常组相比,模型组出现明显的细胞凋亡形态特征,髓核细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均显著增加(P＜0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P＜0.05);②补肾壮督方含药血清干预后,髓核细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均明显下降(P＜0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著增加(P＜0.05);③补肾壮督方含药血清可有效抑制髓核细胞凋亡,并呈剂量依赖性,可能通过减少Apaf1、Cytc、Bax蛋白及mRNA表达,增加Bcl-2蛋白及mRNA表达,抑制线粒体凋亡通路,从而改善椎间盘退变.

2020

2021/07/20

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聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架植入大鼠膀胱后的组织相容性

背景:随着组织工程学、材料学、生物力学等学科的发展,研制新型可生物降解输尿管支架管成为目前研究的重点.前期研究制备了聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架.目的:探索聚(L-丙交酯-ε-己内酯)输尿管支架植入SD大鼠膀胱内的组织相容性.方法:取雄性SD大鼠(四川省中医药科学院实验动物中心提供)60只,随机分为4组,每组15只:假手术组在膀胱外侧开一小口后直接缝合,未植入任何材料;其余3组在膀胱外侧开一小口后分别植入聚氨酯输尿管支架(对照组)、聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/8％交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架(实验1组)、聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/5％交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架(实验2组),随后缝合切口.术后4,8,16周,大体观察膀胱局部解剖情况,苏木精-伊红染色观察各组埋植材料的组织相容性.实验经四川大学华西公共卫生学院分析测试中心实验动物伦理学委员会批准.结果与结论:①大体观察:术后4,8,16周时,对照组、实验1组均出现不同程度的慢性炎症刺激反应,实验2组仅术后4周时出现慢性炎症刺激反应,对照组、实验1组术后4,16周的材料结石生成率高于假手术组(P<0.05),3组术后8周的材料结石生成率比较差异无显著性意义(P>0.05);实验2组仅术后4周的材料结石生成率高于假手术组,其余时间点比较差异无显著性意义(P>0.05);②病理观察:术后各时间点,对照组、实验1组、实验2组均出现不同程度外膜异物、炎症反应及黏膜弥漫增生,3组间术后不同时间点的黏膜弥漫增生率比较差异无显著性意义(P>0.05),但均高于假手术组(P<0.05);③结果表明:聚(L-丙交酯-ε-己内酯)/交联聚乙烯吡咯烷酮输尿管支架的结石生成情况和膀胱组织学反应与商品聚氨酯输尿管支架管相当,尤以加入5％交联聚乙烯吡咯烷酮配比的组织相容性较优.

2020

2021/07/20

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脱细胞异种生物外科补片的免疫原性

背景:脱细胞异种生物外科补片的免疫原性直接关系到其植入人体后的成功与否,因而评价材料的免疫原性至关重要.目的:评价脱细胞异种生物外科补片的免疫原性.方法:将20只Balb/c小鼠随机分4组,每组5只:实验组与对照组背部皮下分别植入脱细胞异种生物外科补片与心包膜原材料;阴性对照组行假手术操作;阳性对照组背部皮下注射弗氏佐剂和牛血清白蛋白等体积混合液.植入4周后,记录小鼠体质量,计算各组脾脏和胸腺的脏脑系数,检测血清总IgG和IgM水平、体外淋巴细胞增殖活性及脾脏淋巴细胞亚型分布,并进行植入部位皮肤组织及脾脏、胸腺组织病理学观察.实验方案经四川省食品药品检验检测院安全评价中心实验动物管理和使用委员会批准(IACUC-2018-KYYL-008).结果 与结论:①实验组与阴性对照组体质量比较差异无显著性意义(P＞0.05),对照组大于阴性对照组(P＜0.05);②实验组与阴性对照组脾脏脏脑系数、胸腺脏脑系数比较差异均无显著性意义(P＞0.05),对照组脾脏脏脑系数大于阴性对照组(P＜0.05);③实验组与阴性对照组淋巴细胞增殖活性比较差异无显著性意义(P＞0.05),对照组高于阴性对照组(P＜0.05);④与阴性对照组相比,实验组CD3+CD8+细胞百分比降低(P＜0.05);与阴性对照组相比,对照组CD3+细胞、CD3+CD4+细胞、CD3+CD8+细胞、CD45+SSClow细胞百分比下降(P＜0.05),CD3-CD19+细胞百分比升高(P＜0.05);⑤实验组、对照组血清IgM和IgG抗体水平与阴性对照组相比差异均无显著性意义(P＜0.05);⑥组织学显示,实验组与对照组脾脏和胸腺无明显病理改变,实验组植入部位无明显炎性反应,对照组植入部位出现严重肉芽肿性炎及纤维组织增生包裹、植入物坏死崩解等;⑦结果表明与原材料相比,经脱细胞处理的异种生物外科补片可有效降低免疫原性反应.

2020

2021/07/20

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清热凉血方对急性放射性肠炎大鼠一般状况及MDA、SOD表达的影响

探讨清热凉血方对急性放射性肠炎大鼠血清SOD、MDA表达及一般情况的影响.方法:60只SD健康大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、对照组、中药灌胃组、中药灌肠组、中药灌胃和灌肠组,X线直线加速器给予实验大鼠全腹照射(DT12.0 Gy),建立急性放射性肠炎大鼠模型.造模成功后,所有大鼠均给予相应治疗4周,隔日1次,与此同时观察比较所有大鼠的精神状态、饮食摄入量、排便和体质量变化,4周后处死动物检测大鼠血液中SOD和MDA的表达.结果:药物治疗组的精神状态、饮食和排便情况均优于模型对照组.与模型对照组比较,治疗组体质量明显增加,清热凉血方三组优于地塞米松组;与模型对照组比较,清热凉血方组血清SOD活性升高,MDA含量降低,清热凉血方三组优于地塞米松组.结论:清热凉血方通过提高急性放射性肠炎大鼠血清中SOD活性,降低MDA含量,清除氧自由基,抑制脂质过氧化,减少结肠黏膜损伤.

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2021/07/20

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三七对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经血管单元的整体保护作用研究

目的 对急性脑缺血/再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠神经血管单元(neurovascular u-nit,NVU)的变化及三七的干预作用进行研究.方法 建立脑缺血2 h、再灌注7 d大鼠模型;分别对各组大鼠进行神经行为学评分、脑梗死体积比测定和NVU主要细胞结构观察.体外分离培养神经元、星形胶质细胞、微血管内皮细胞,并对其进行细胞形态观察及免疫荧光鉴定;建立氧糖剥夺2 h、再灌注24 h细胞共培养模型,分别对其进行屏障通透性和细胞凋亡率的测定.结果 在体实验三七组在大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比方面与动物模型组相比有明显的降低(P<0.01),并能减轻脑缺血引起的细胞超微结构损伤;离体实验三七含药血清组4 h渗漏液面与细胞模型组相比有明显差异(P<0.01),且神经元和脑微血管内皮细胞凋亡率明显低于细胞模型组(P<0.01).结论 三七对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠神经血管单元具有整体保护作用,可能与抑制多细胞凋亡有关.

2020

2021/07/20

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基于NF-κB/JNK信号通路研究他克莫司对脊髓损伤模型大鼠的调节作用

目的 探究他克莫司对大鼠脊髓损伤的治疗作用及其对NF-κB/JNK信号通路的调节作用.方法 实验大鼠随机分为三组(n=15):假手术组、模型组、他克莫司治疗组;采用Allen's法建立脊髓损伤动物模型.造模后给予实验大鼠他克莫司(0.3 mg/kg),连续给予21 d.分别在第0、1、7、14、21天进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)脊髓损伤的行为学评分测试.采用HE染色观察实验大鼠脊髓损伤状态并测定脊髓组织中抗氧化酶活性;采用RT-PCR测定脊髓组织中的IL-4 mRNA和TGF-βmRNA表达量;采用Western blot实验测定脊髓组织中NF-κB/JNK信号通路相关蛋白表达.结果 他克莫司能够显著性改善脊髓损伤大鼠的BBB评分(P<0.05),升高SOD、CAT、GPX酶活性并降低MDA含量(P<0.05);并减少脊髓神经元的异常凋亡,降低脊髓组织中IL-4 mRNA、TGF-βmRNA表达和NF-κB p-p65/NF-κB p-p65和p-JNK/JNK蛋白表达量的比值(P<0.05).结论 他克莫司能够显著性改善脊髓损伤,其可能是通过抗氧化、抗炎反应、抗脊髓神经元凋亡,以及抑制NF-κB/JNK信号通路活化而发挥作用的.

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2021/07/20

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青蒿琥酯改善软骨下骨破骨细胞介导的骨关节炎疼痛

背景:研究表明,破骨细胞通过分泌netrin-1诱导软骨下骨的感觉神经异常长入,导致骨关节炎动物模型痛阈减低,由此推测抑制破骨细胞的骨吸收作用可缓解感觉神经介导的疼痛症状.目的:探讨青蒿琥酯能否通过抑制软骨下骨破骨细胞活性进而减少感觉神经支配,为研究青蒿琥酯对骨关节炎镇痛提供实验依据.方法:将C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、安慰剂组和青蒿琥酯组,每组10只;假手术组仅切开小鼠右膝关节囊不损伤其他结构,术后无其他干预;其他2组通过右膝前十字韧带横断术构建骨关节炎模型,青蒿琥酯组术后给予腹腔内注射青蒿琥酯(每日100 mg/kg),安慰剂组术后给予腹腔内注射相等体积的5％NaHCO3.术后14d进行足印迹分析,ELISA检测各组小鼠外周血血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平,取各组小鼠膝关节标本进行番红固绿染色及组织学评分、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、netrin-1及CGRP免疫组化染色.结果 与结论:①右后爪同侧接触面积百分比:假手术组和青蒿琥酯组高于安慰剂组(P＜0.05);假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P＞0.05);②小鼠血清TRAcP5b、cathepsin K和CTX-Ⅰ水平组间差异均无显著性意义(P＞0.05);③基于番红固绿染色的软骨组织学评分:假手术组和青蒿琥酯组低于安慰剂组(P＜0.05),假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P＞0.05);④抗酒石酸酸性磷酸酶染色:假手术组、青蒿琥酯组抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性破骨细胞量低于安慰剂组(P＜0.05),假手术组与青蒿琥酯组之间差异无显著性意义(P＞0.05);⑤与安慰剂组相比,假手术组、青蒿琥酯组软骨下骨中netrin-1及CGRP阳性感觉神经减少(P＜0.05),而这2项指标在青蒿琥酯组与假手术组之间差异无显著性意义(P＞0.05);⑥结果表明,青蒿琥酯通过抑制软骨下骨破骨细胞分泌netrin-1改善了感觉神经介导的疼痛,具有可缓解骨关节炎疼痛的治疗潜力.

2020

2021/07/20

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利拉鲁肽对糖尿病小鼠肝糖异生关键酶P EP CK及G6 pase的表达影响及机制探讨

目的 观察利拉鲁肽对糖尿病小鼠肝糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸(G-6-Pase)及磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)的表达影响及机制探讨.方法 动物实验设计分3组:正常对照组(雄性C57小鼠,n=5),腹腔注射生理盐水;模型对照组(雄性KK-Ay糖尿病小鼠,n=5),腹腔注射生理盐水;利拉鲁肽干预组(雄性KK-Ay糖尿病+药物干预小鼠,n=5),腹腔注射利拉鲁肽.3组小鼠均在在相同的饲养环境下饲养.干预8周,检测小鼠的血糖,采用Western blot方法检测FOXO1,隐花色素1(cryptochrome 1,CRY1),E3泛素蛋白酶DDB1,糖异生关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)及磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)的表达情况.结果 与模型对照组相比,利拉鲁肽干预组血糖显著下降;利拉鲁肽干预后糖尿病小鼠肝DDB1,FOXO1,G6Pase与PEPCK的表达减少,而隐花色素1(cryptochrome 1,CRY1)的表达增加.结论 利拉鲁肽可以下调糖尿病小鼠肝糖异生关键酶G6Pase及PEPCK的表达,其作用可能与下调E3泛素蛋白酶DDB1有关.

2020

2021/07/20

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