汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响

目的:探讨汉黄芩苷对柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠炎症反应的影响及其可能的调控机制.方法:用CVB3感染BALB/c小鼠构建病毒性心肌炎动物模型.取40只BALB/c小鼠将其随机分为4组:正常对照组、CVB3感染的病毒性心肌炎组、CVB3感染后给予汉黄芩苷处理的治疗组以及CVB3感染后同时给予汉黄芩苷和AKT激动剂处理的激动剂组,每组10只.于药物治疗7 d后处死各组小鼠.用HE染色检测前3组小鼠心肌组织内炎症细胞浸润情况.用ELISA检测前3组小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6含量.用Western blot实验检测前3组小鼠心脏组织中炎症因子蛋白表达水平以及AKT/NF-κB通路的活化情况.最后,通过Western blot实验检测全部4组小鼠心肺组织中AKT/NF-κB通路的活化情况.结果:与正常组相比,病毒性心肌炎小鼠心脏组织内存在大量炎症细胞浸润,而汉黄芩苷治疗显著降低CVB3病毒诱导的心脏组织炎症细胞浸润(P<0.05).CVB3病毒感染后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较正常组显著升高(P<0.05),而给予汉黄芩苷治疗后小鼠血清中IL-1β和IL-6含量较病毒性心肌炎组显著降低(P<0.05).Western blot检测结果表明,与病毒性心肌炎组相比,汉黄芩苷治疗显著降低心肌组织内炎症因子(IL-1β和IL-6)蛋白表达水平以及AKT和NF-κB蛋白的磷酸化水平(P<0.05);而给予AKT激动剂处理后,汉黄芩苷对NF-κB蛋白磷酸化水平的抑制作用显著减弱(P<0.05),且汉黄芩苷对炎症因子的下调作用也显著受到抑制(P<0.05).结论:汉黄芩苷可通过调控AKT/NF-κB通路减轻病毒性心肌炎小鼠的炎症反应.

2020

2021/07/20

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益生菌对高尿酸血症肾功能损伤的疗效分析研究

背景 别嘌醇被认为是临床治疗高尿酸血症的有效药物,但是别嘌醇对于高尿酸血症肾功能损伤时期治疗仍存在争议,多数学者认为别嘌醇可以有效保护肾脏,但是由于可能会出现肾功能损伤而被限制使用.目前,益生菌已被证明可以有效降解尿酸(UA).目的 从传统泡菜中筛选出益生菌,分析其对高尿酸血症肾功能损伤的疗效.方法 于2017年12月—2018年8月采集中国不同省份地区的18种传统泡菜,从不同种类的泡菜中分离出乳酸菌,首先通过双氧水(H2O2)、HE染色后镜检进行初步确定,随后筛选出具有降核苷,对酸性、胆盐、胰蛋白酶、胃蛋白酶耐受性、黏附性良好的功能性乳酸菌,用16SrDNA序列分析对菌种进行鉴定,并最终应用于高尿酸血症肾功能损伤模型.采用随机数字表法将40只大鼠分为正常组、模型组、S12菌株干预组、别嘌醇干预组,各10只.在第0、10、20天测定UA、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平.结果 18种泡菜中分离出14株乳酸菌,其中S1、S5、S12、S14作为候选菌株.因S12菌株提纯度最高,因此以此进行动物阶段实验.第10天时,四组Scr水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);第10天时,四组UA、BUN水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中模型组、S12菌株干预组、别嘌醇干预组UA、BUN水平均高于正常组(P<0.05).第20天时,四组UA、Scr、BUN水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中模型组、S12菌株干预组、别嘌醇干预组UA、Scr、BUN水平均高于正常组,S12菌株干预组UA、Scr、BUN水平均低于模型组,别嘌醇干预组UA水平低于模型组和S12菌株干预组,BUN水平低于模型组、高于S12菌株干预组(P<0.05).结论 益生菌对高尿酸血症肾功能损伤时期具有一定程度的保护治疗作用.

2020

2021/07/20

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不同交联透明质酸复合凝胶在体内的宿主反应及基质金属蛋白酶9表达

背景:利用羟丙基甲基纤维素分子内的羟基与透明质酸中的羟基、羧基发生相互作用,可降低透明质酸的酶解,提高其作为皮肤填充材料的可使用性.目的:观察不同交联方式透明质酸复合凝胶体内植入后的宿主反应及基质金属蛋白酶9表达变化.方法:取新西兰大耳白兔(购自北京隆安实验动物养殖中心)12只,在其脊柱两侧皮下共注射10个点,左侧4点注射化学交联透明质酸钠-羟丙基甲基纤维素凝胶(化学交联组),右侧4点注射物理混合透明质酸钠-羟丙基甲基纤维素凝胶(物理交联组),左右侧各一点注射已上市注射用修饰透明质酸钠凝胶(对照组).注射后1,4,12周分别切取包括植入材料在内的皮下组织,苏木精-伊红染色观察炎症反应和纤维化程度,Masson染色观察胶原纤维形成状况,免疫组织化学染色观察基质金属蛋白酶9表达变化.实验经天津市医药科学研究所动物伦理委员会批准(批准号:IMPS-EAEP-H-2017030).结果与结论:①苏木精-伊红染色:化学交联组注射后1,4周时的炎症反应较对照组明显,囊壁及微囊壁较对照组增厚,注射后12周时炎症反应及纤维化程度与对照组类似;物理交联组注射后1周时可见少量炎细胞浸润,纤维包裹及微囊壁形成较对照组稍明显,注射后4周时纤维包裹及微囊壁较对照组增厚,注射后12周时炎症反应及纤维化程度与对照组类似;②Masson染色:化学交联组与物理交联组注射后1,4周时的胶原纤维较对照组增多,12周时胶原纤维进一步增加,与对照组无差异;③免疫组织化学染色:化学交联组注射后1周的基质金属蛋白酶9阳性表达低于对照组,其余时间点与对照组无差异;物理交联组注射后1周的基质金属蛋白酶9阳性表达低于对照组,注射后4周的阳性表达高于对照组,注射后12周与对照组无差异;④结果表明:两种交联透明质酸钠复合凝胶皮下植入后12周内的生物相容性良好,胶原纤维生成和基质金属蛋白酶9表达逐步增加,有利于组织重塑的进行,并且物理交联的样品植入早期组织反应更小,中期基质金属蛋白酶9表达明显增多,更利于组织修复和重塑.

2020

2021/07/20

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首发抑郁症患者肠道菌群与认知情绪调节关系研究

背景 近年来抑郁症和肠道菌群的相关研究大多集中于动物实验,而人体肠道菌群的相关研究相对较少,结合心理特征的研究则更少.目的 了解首发抑郁症患者与健康人群在肠道菌群、认知情绪调节方面的差异,进一步探讨抑郁症、肠道菌群及认知情绪调节之间的关系.方法 选取2017年1—12月就诊于宁夏医科大学总医院心理卫生中心门诊的首发抑郁症患者30例(抑郁症组),同期选取宁夏"十三五"科技重大项目流调体检健康志愿者31例(对照组).完成一般情况调查问卷、汉密尔顿抑郁量表、认知情绪调节量表(CERQ)的评定与粪便的收集;采用高通量测序及生物信息学方法分析微生物群落多样性和丰度变化;探讨情绪调节策略、抑郁严重程度与肠道菌群的相关性.结果 抑郁症组和对照组一般情况(年龄、性别、BMI、吸烟、文化程度)比较,差异无统计学意义(P>0.05).本研究以97％ 的相似性将所有样本的有效序列聚类为Operational Taxonomic Units(OTUs),所得稀释曲线趋向平坦,说明测序数据量合理.抑郁症组与对照组肠道菌群多样性指数比较,差异无统计学意义(P>0.05).与对照组相比,在门水平,抑郁症组厚壁菌门、放线菌门、柔壁菌门丰度降低,拟杆菌门丰度增高(P<0.05);在属水平,抑郁症组Ruminococcus、Subdoligranulum、Enterobacter、Coprococcus、Bifidobacterium、Lactobacillus菌属减少,而Klebsiella、Flavonifractor、Bacteroides菌属增多(P<0.05).LEfSe分析显示,抑郁症组肠道菌群中主要以拟杆菌、产碱菌科(Alcaligenaceae),伯克菌目(Burkholderiales),Β-变形菌纲、Erysipelotrichaceae、幽门螺杆菌等致病菌为主;对照组以厚壁菌门、双歧杆菌、Subdoligranulum、乳酸杆菌等有益菌为优势菌.抑郁症组自我责难、沉思、灾难化、责难他人分量表得分高于对照组,积极重新评价、理性分析分量表得分低于对照组(P<0.05).CERQ分量表中自我责难得分与Enterobacter菌属呈正相关,与Odoribacter、Alistipes菌属呈负相关(P<0.05);沉思分量表得分与Subdoligranulum、Alistipes、Faecalibacterium、Odoribacter菌属呈负相关(P<0.05);重新关注计划、积极重新评价分量表得分与Weissella菌属呈正相关(P<0.05);灾难化分量表得分与Dialister菌属呈负相关(P<0.05).抑郁严重程度与拟杆菌门及Flavonifractor菌属呈正相关(P<0.05),与Ruminococcus、Subdoligranulum、Coprococcus、Dialister、Odoribacter、Faecalibacterium、Butyricimonas菌属呈负相关(P<0.05).结论 抑郁症患者与健康对照者在肠道菌群、认知情绪调节策略方面均有较大差异,情绪调节策略自我责难、沉思、灾难化,肠道菌群条件致病菌的增多及丁酸盐产生菌、益生菌的减少与抑郁症密切相关.

2020

2021/07/20

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富血小板血浆联合髓芯减压调控激素性股骨头坏死模型兔氧化应激反应

背景:氧化应激在股骨头坏死损伤中发挥重要作用,富血小板血浆富含生长因子,可以加快骨折愈合,配合髓芯减压术能促进非创伤性股骨头坏死的恢复.目的:探讨富血小板血浆联合髓芯减压术能否通过Keap1/Nrf2/HO-1信号通路抑制兔激素性股骨头坏死模型氧化应激反应.方法:将40只实验新西兰兔随机分为正常组、模型组、对照组和富血小板血浆组,每组10只.除正常组外其他3组兔在无菌环境下建立激素性股骨头坏死模型,术后4周向富血小板血浆组动物股骨头内髓芯减压后注射植入0.4 mL 3％的富血小板血浆,对照组兔只进行髓芯减压术治疗,对照组与模型组兔正常饲养.14周后苏木精-伊红染色观察各组兔股骨头骨髓腔内病理学变化和骨陷窝空缺率,检测各组兔血清中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型谷胱甘肽及丙二醛等氧化应激指标活性,TUNEL检测股骨头组织内骨细胞凋亡情况,免疫荧光检测股骨头组织内Keap1、Nrf2分布,Western Blot检测股骨头组织内Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达.实验方案经青海大学附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号为qhdx-201908374).结果与结论:①与正常组相比,模型组骨组织内骨小梁变细,结构紊乱;对照组较模型组有所改善,骨小梁结构得到恢复,空骨陷窝减少(P<0.05),富血小板血浆组经富血小板血浆联合髓芯减压治疗较对照组得到进一步改善,骨小梁结构更加完善,空骨陷窝进一步减少(P<0.05),与正常组无显著差异(P>0.05);②模型组血清中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和还原型谷胱甘肽的含量均显著低于正常组(P<0.05),而丙二醛浓度显著高于正常组(P<0.05);对照组以上指标稍有改善,但与模型组比较差异不显著(P>0.05);富血小板血浆以上氧化应激指标较模型组和对照组明显改善(P<0.05);③模型组股骨头组织内Keap1蛋白表达显著低于正常组(P<0.05),Nrf2、HO-1蛋白表达显著高于正常组(P<0.05);富血小板血浆组股骨头组织内Keap1的表达较模型组和对照组低(P<0.05),Nrf2、HO-1的表达显著高于模型组和对照组(P<0.05);④结果提示,富血小板血浆能有效抑制兔激素性股骨头坏死过程中氧化应激反应,该作用可能是通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路活性而发生的.

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2021/07/20

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CaSR表达在大鼠糖尿病性肝硬化损伤和纤维化发生中的作用

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在糖尿病性肝损伤发生中的作用.方法:本实验分别制备糖尿病大鼠和高糖处理HSC系大鼠肝星形细胞模型.40只Wistar大鼠随机分为正常对照组(Control,n=10),糖尿病组(T1D,STZ 60 mg/kg一次性腹腔注射,n=30),造模成功后分别在2、4、8周检测大鼠的体重、血糖、血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性,观察形态学和超微结构改变,以及Western blot检测CaSR和肝纤维化相关指标表达的变化.HSC系大鼠肝星形细胞随机分为正常对照组(Control,10％FBS-DMEM+5.6 mmol/L葡萄糖),高糖组(HG,10％FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖下培养48 h)和CaSR抑制剂组(HG+Calhex231,10％FBS-DMEM+40 mmol/L葡萄糖+2.5μmol/L CaSR抑制剂(Calhex231)下培养48 h,每组n=5).结果:动物模型中,与正常组相比,糖尿病大鼠体重减轻,血糖、AST和ALT显著升高,CaSR和胶原Ⅰ(COⅠ)、胶原Ⅲ(COⅢ)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达上调;细胞模型结果与大体基本一致,与正常组相比,高糖组细胞分化标志性蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达增加,表明HSC分化成肌成纤维细胞,细胞外间质(ECM)主要成分COⅠ和COⅢ表达增加,降解ECM的关键酶MMP9同样增加,Calhex231可减轻上述变化.结论:CaSR表达上调参与大鼠糖尿病性肝损伤和纤维化的发生.

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2021/07/20

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人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠的治疗作用

背景:肝纤维化具有较高的发病率和死亡率,肝星状细胞的活化和增殖是肝纤维化进程中的关键环节.目前还没有针对单一环节或靶点的有效抗纤维化药物.目的:分析人脂肪干细胞来源外泌体对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的影响.方法:①通过酶溶解法获取健康人群来源脂肪中干细胞,体外培养获取一定数量细胞后通过多重超滤法获取外泌体.体外培养的肝星状细胞经转化生长因子 β1活化后利用不同浓度外泌体进行处理,通过定量PCR检测细胞内α-平滑肌动蛋白的表达明确其活化程度,以及分别使用CCK-8及流式细胞术检测各组外泌体处理后活化肝星状细胞的生长率及凋亡率.②通过腹腔注射四氯化碳构建肝纤维化大鼠动物模型,尾静脉注射外泌体进行治疗.检测各组动物的肝功能及血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原,肝组织Ishak评分及肝纤维化半定量,以及通过免疫荧光法检测肝组织内基质金属蛋白酶组织抑制剂1、基质金属蛋白酶9及α-平滑肌动蛋白的表达.实验方案于2017年1月经同济大学动物实验伦理委员会以及医学伦理学委员会批准.结果与结论:人脂肪干细胞来源外泌体可抑制活化的肝星状细胞增殖,其可能的机制为抑制活化巨噬细胞的增殖,减少胶原纤维、α-平滑肌动蛋白及基质金属蛋白酶组织抑制剂1的表达,并促进基质金属蛋白酶9的表达.提示外泌体可治疗四氯化碳诱导肝纤维化.

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2021/07/20

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血红蛋白氧载体的研究目标及新进展

背景:血红蛋白氧载体作为红细胞替代物之一,己研究40余年,至今共有3代不同的血红蛋白氧载体.第1代和第2代主要是对血红蛋白进行化学修饰,而第3代主要是将血红蛋白封装在合成膜中.目的:综述国内外血红蛋白氧载体研究的新进展.方法:以“hemoglobin-based oxygen carriers, red blood cell substitutes, artificial oxygen carriers, artificial blood”“血红蛋白氧载体,红细胞替代物,人工氧载体,人工血液”为检索词,检索2000至2019年PubMed、CNKI中国期刊全文数据库、万方数据库中收录的血红蛋白氧载体制备方法的相关文献,进行总结分析.结果 与结论:①胎儿、无脊椎动物、爬行动物的血红蛋白以及β-亚基突变的血红蛋白在制备血红蛋白氧载体上有一定优点;②关于血红蛋白的修饰和封装策略有了新的进展;③联合使用其他药物能够降低血红蛋白氧载体的血管毒性;④血红蛋白氧载体在应用上有了新方向,但是新型血红蛋白氧载体作为红细胞替代物领域的研究,在未来还需要更多的动物实验和临床试验.

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2021/07/20

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结核分枝杆菌基因敲除技术的研究进展

结核分枝杆菌是十分重要的人兽共患病原菌,基因缺失株的构建在该菌致病与免疫机制、基因功能解析和防控技术中意义重大,而该菌特有的复杂结构和生理生化特性也给缺失株的构建带来难度,为此有关结核分枝杆菌基因敲除技术的研究一直是重要课题.本文重点介绍了结核分枝杆菌基于特异性转导噬菌体、线性DNA片段、反选择标记、CRISPR技术以及ORBIT系统的基因敲除方法,同时对分枝杆菌的分子遗传操作发展进行了展望.

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2021/07/20

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苗医“石弱骨虚”大鼠模型复制及几种淫羊藿的干预作用

目的:复制苗医学说指导下的“石弱骨虚”模型大鼠并探讨几种淫羊藿对模型的作用.方法:在苗医药学说指导下采用手术去除大鼠双侧卵巢+肌肉注射地塞米松磷酸钠+给予2.5％氯化锶水溶液的方法复制“石弱骨虚”模型,采用苗族常用的淫羊藿对模型动物进行干预,以方测证.检测大鼠胫骨和股骨重量;取大鼠血清用酶联免疫试剂盒(ELISA)测定雌二醇(E2)、钙离子(Ca2+)、无机磷(P)、25羟基维生素D3 (25 (OH) D3)、1,25二羟基维生素D3(1,25 (OH)2D3)、骨钙素(osteocalcin,BGP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量.结果:与空白组比较,模型组大鼠胫骨和股骨重量;血清中E2、Ca2、P、25 (OH) D3、1,25 (OH)2D3、BGP和ALP含量均降低;与模型组比较,不同种类淫羊藿组大鼠胫骨和股骨重量;血清中E2、Ca2+、P、25 (OH) D3、1,25 (OH)2D3、BGP和ALP含量出现不同程度的升高.结论:实验所复制的复合模型在一定程度上与苗医理论中“石弱骨虚”的含义相对应,表明“石弱骨虚”模型大鼠复制成功;淫羊藿可通过提高成骨细胞的活性、促进骨形成、增加骨矿化、增加骨量、稳定骨矿化速率、促进血钙、磷平衡、改善骨组织健康状态等方式增加大鼠胫骨和股骨的重量,升高血清中E2、Ca2+、P、25 (OH) D31,25 (OH)2D3、BGP和ALP的含量,改善大鼠“石弱骨虚”的状态,也一定程度上阐明了其应用于“石弱骨虚”的药理学基础.

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2021/07/20

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