一株牛源致病性蜡样芽孢杆菌的分离鉴定与部分生物学特性分析

目的 分离鉴定牛源致病性蜡样芽孢杆菌,并分析其部分生物学特性.方法 利用PCR方法检测猝死西门塔尔病牛各组织脏器中常见病毒感染情况,同时做涂片镜检,分离感染的细菌,通过形态学观察、生化检测、药敏试验、16SrRNA基因序列分析、毒力基因扩增、动物致病性实验等对分离菌进行鉴定及部分生物学特性分析.结果 从猝死牛肝脏中分离到1株革兰阳性蜡样芽孢杆菌,将其命名为TL-19,该菌株含有entFM、nheB、hblD、nblA、nheC、nheA、hblC和cytk等毒力基因,且对小鼠具有较强的致病性,感染鼠24 h后全部死亡.结论 成功分离到1株牛源蜡样芽孢杆菌TL-19.该菌含有多种毒力基因,通辽市西门塔尔牛猝死与该TL-19感染有关.

2020

2021/07/20

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从AMPK/mTOR通路探讨人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制

目的:从AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的活化及心脏病理形态学变化、相关衰老蛋白的改变,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心脏老化的保护作用机制.方法:C57BL/6雄性小鼠,SPF级,随机分为正常组和高糖组.高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)联合喂食高脂饲料,造模成功后再次随机分为模型组,GNC低剂量组(0.819 g·kg-1),GNC高剂量组(1.638 g·kg-1)及二甲双胍组(150 mg·kg-1).每天1次,灌胃给药,连续9周,监测血糖变化.4周龄雄性C57BL/6小鼠正常喂养1周,为青年组.观察小鼠一般情况,苏木素-伊红(HE)染色结合透射电镜(TEM)观察小鼠心脏病理形态学变化,冯库萨(Yon Kossa)染色判断小鼠心脏微血管钙盐沉积程度,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心脏组织中AMPK/mTOR信号通路活化状态,以及衰老相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2),抑癌基因p53(p53),磷酸化抑癌基因p53(p-p53)表达.结果:与正常组比较,模型组血糖显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组血糖明显下降(P＜0.05,P＜0.01).HE,TEM,Von Kossa 3个病理形态学实验结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱、灶性溶解坏死,线粒体肿胀、变性、嵴断裂、空泡变,心脏微血管结构紊乱、染色不均匀、中内膜有大量钙盐沉积;与模型组比较,各给药组小鼠病理形态学变化均有不同程度的改善.与正常组比较,模型组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),p-肝激酶B1(LKB1)/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),p-mTOR/mTOR,p-核糖体蛋白S6激酶p70S6K/p70S6k蛋白显著升高(P＜0.01);与模型组比较,各给药组MMP-2,p53和p-p53蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01),p-LKB1/LKB1,p-AMPK/AMPK蛋白明显升高(P＜0.05,P＜0.01),p-mTOR/mTOR,p-p70S6k/p70S6k蛋白明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:STZ联合高脂饲料能够诱导小鼠心脏老化,GNC能够改善糖尿病小鼠心脏老化,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路相关蛋白表达有关.

2020

2021/07/20

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多柔比星对兔眼准分子激光角膜切削术后角膜上皮下混浊(Haze)的影响

目的 通过动物实验初步观察应用多柔比星对准分子激光角膜切削术(photorefrac-tive keratectomy,PRK)术后角膜上皮下混浊(Haze)的影响,评估其抑制PRK术后Haze的有效性和安全性,旨在探讨PRK术中多柔比星替代丝裂霉素C应用的可行性.方法 新西兰白兔10只(20眼),其中右眼为多柔比星治疗的实验组,左眼为丝裂霉素C治疗的对照组,两组兔眼均行PRK激光切削校正-8.00 D后,分别用0.2 g·L-1多柔比星或0.2 g·L-1丝裂霉素C的棉片处理,分别于术后1 d、1周、2周、3周、4周在裂隙灯下观察角膜上皮愈合及Haze情况.结果 术后1周,两组所有兔眼角膜上皮均已完全愈合.实验组3眼术后1 d即出现角膜基质片状炎性浸润灶,其中2眼治疗后角膜基质炎性浸润灶消退,另1眼形成浅层斑翳;实验组其余7眼及对照组10眼均未见Haze.结论 多柔比星虽然可能引起角膜基质非感染性炎症反应,但在抑制PRK术后细胞增殖方面或具有与丝裂霉素C类似效果.

2020

2021/07/20

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蒲翘散发酵条件的筛选及其产物对肉雏鸡生长性能的影响

为了研究蒲翘散最佳发酵条件及其发酵液对肉雏鸡生长性能的影响,采用单因素试验方法,选用枯草芽孢杆菌为发酵菌种,对蒲翘散发酵培养基pH值、温度、接菌量、转速以及发酵时间进行优化,再以该发酵液作为饲料添加剂,研究其对肉雏鸡生长性能的影响.结果 显示,蒲翘散最佳发酵条件为:发酵培养基初始pH值5.2～5.4,温度35℃,接菌量2％,转速210 r/min,发酵时间24 h,发酵后总黄酮含量提高5.17％;与空白组相比,各试验组肉雏鸡平均日增重增加,料重比降低,脾脏和法氏囊指数增加.表明蒲翘散发酵液能提高肉雏鸡生长性能,促进免疫器官发育.

2020

2021/07/20

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补骨脂素诱导兔骨内膜间充质干细胞增殖构建细胞支架复合体修复骨不连

背景:补骨脂素是属于植物类雌激素,有大量研究证实其具有促进细胞增殖分化的作用.目的:应用补骨脂素、兔骨内膜间充质干细胞和聚己内酯支架构建人工复合骨,探讨其治疗兔骨不连的效果.方法:①将第3代兔骨内膜间充质干细胞接种于细胞培养板中,分别加入10-8,10-7,10-6 mol/L补骨脂素、50 mg/L骨形态发生蛋白2进行干预,对照组加入同体积的无菌纯净水.干预第3,5,7天采用MTT法检测细胞增殖情况;②将聚己内酯三维支架加入到细胞培养板底部,兔骨内膜间充质干细胞按1×103/孔的量接种于支架上,然后加入10-6 mol/L补骨脂素,联合培养21 d后取出即为人工复合骨;③27只新西兰大白兔随机均分为3组,建立桡骨骨不连模型,实验组植入人工复合骨,支架组单纯植入支架,对照组不植入任何材料.术后2,4,8周行病理学苏木精-伊红染色,观察成骨情况.术后第4周拍摄X射线片,观察骨不连愈合情况.结果与结论:①3种浓度补骨脂素均有诱导兔骨内膜间充质干细胞增殖的作用,与对照组比较,10-6 mol/L补骨脂素对兔骨内膜间充质干细胞刺激作用最强(P<0.05),而且10-6 mol/L补骨脂素组与阳性对照骨形态发生蛋白2组相比差异无显著性意义(P>0.05);②新西兰大白兔桡骨中段骨不连组织苏木精-伊红染色结果显示,实验组成骨细胞数目明显多于支架组和对照组(P<0.05);③X射线片结果显示,实验组骨不连已经愈合,支架组骨折部分愈合,对照组骨不连未愈合;④结果表明,补骨脂素对兔骨内膜间充质干细胞增殖作用与浓度有一定的相关性.补骨脂素可结合兔骨内膜间充质干细胞及聚己内酯支架形成人工复合骨,通过动物实验证实其治疗骨不连效果较好.

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2021/07/20

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瑞德西韦(remdesivir)抗冠状病毒应用前景

瑞德西韦是腺苷类似的氨基磷酸酯前体药,RNA依赖性的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA-polymerases,RdRp)抑制剂,在细胞试验和动物试验中,它对RNA病毒(如MERS和SARS)具有广谱抗病毒活性,且毒性低.作为治疗2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)感染的潜在药物,目前已在中国开展III期临床试验.本文就该药物抗病毒机制、体外抗病毒活性、动物实验、毒理实验、药动学和已进行的临床研究情况等进行全面综述,供临床参考.

2020

2021/07/20

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富血小板血浆干预膝关节骨性关节炎模型兔关节软骨和滑膜的改变

背景:研究显示富血小板血浆具有很强的促进软骨细胞修复和增生作用.目的:探讨富血小板血浆在骨性关节炎中对软骨细胞修复及滑膜炎症抑制的疗效.方法:新西兰大白兔40只,于兔耳中央动脉取血后采用Hokugo等的方法制备富血小板血浆,同时检测外周血及富血小板血浆的血小板、血小板衍生生长因子、转化生长因子β和血管内皮生长因子水平.采用前交叉韧带切断法来制作动物模型后随机将兔分为实验组和对照组,实验组双侧膝关节每周注射1次0.3 mL富血小板血浆;对照组每周注射1次0.3 mL无菌生理盐水,共注射10周.注射后第2,4,6,8,10周对兔进行大体观察及膝关节组织学观察;检测关节软骨Ⅱ型胶原蛋白及基质金属蛋白酶13水平,并进行软骨组织Mankin评分.实验方案经重庆医科大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①富血小板血浆中血小板、血小板衍生生长因子、转化生长因子β和血管内皮生长因子水平分别是正常血中的5.5,4.8,7.7和6.2倍(均P＜0.05);②注射后第6周实验组Mankin评分小于对照组(P＜0.05);③实验组第4,6,8,10周时Ⅱ型胶原蛋白水平明显高于对照组(P＜0.05);实验组第2,4,6,8,10周时基质金属蛋白酶13水平明显小于对照组(P＜0.05);④结果表明,关节腔内注射富血小板血浆能通过缓解关节滑膜炎症及延缓甚至阻断软骨细胞的损伤来抑制骨性关节炎的进展.

2020

2021/07/20

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miR-155干预烧伤急性肺损伤模型大鼠:核转录因子κB通路的变化

背景:目前有研究关注核转录因子κB通路在烧伤大鼠急性肺损伤病理过程中的作用及机制,如miR-155靶向抑制κB激酶,进而减弱核转录因子κB活性,在烧伤大鼠急性肺损伤发挥作用,然而仍存在病理机制有待研究和确认.目的:观察miR-155通过核转录因子κB通路对烧伤大鼠急性肺损伤的影响.方法:采用温水水浴模拟烫伤法建立烧伤急性肺损伤大鼠模型,将烧伤大鼠随机分为烧伤急性肺损伤组、miR-155增强试剂组和miR-155抑制试剂组,液体复苏后,miR-155增强试剂组、miR-155抑制试剂组大鼠分别尾静脉注入5 μL的miR-155-mimics和miR-155-inhibitions.酶联免疫吸附剂测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的变化情况;苏木精-伊红染色法观察3组肺组织形态变化;Western blot法检测核转录因子κB及环氧化酶2蛋白表达;免疫组织化学染色检测肺组织核转录因子κB蛋白表达.结果 与结论:①苏木精-伊红染色结果表明,miR-155抑制试剂组、烧伤急性肺损伤组及miR-155增强试剂组肺组织损伤程度,逐渐加重(P＜0.05);②酶联免疫吸附实验结果表明,与烧伤急性肺损伤组相比,miR-155增强试剂组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达增加(P＜0.05),而miR-155抑制试剂组肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达降低(P＜0.05);③Western结果表明,与烧伤急性肺损伤组相比,miR-155增强试剂组核转录因子κB、环氧化酶2蛋白表达增加(P＜0.05),而miR-155抑制试剂组核转录因子κB、环氧化酶2蛋白表达降低(户＜0.05);④免疫组织化学染色结果显示,miR-155抑制试剂组核转录因子κB蛋白表达增强,呈深棕色,中性粒细胞、单核巨噬细胞、肺泡上皮细胞的胞质及胞核内核转录因子κB表达最明显;⑤上述数据证实,肺组织细胞中核转录因子κB活性降低,可以通过下调miR-155来实现,从而降低肺损伤组织间的炎症反应.实验于2018年6月经内江市第一人民医院动物伦理委员会批准(批准号:1801270).

2020

2021/07/20

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糖尿病模型小鼠拔牙后对颌牙牙合向伸长过程中根周骨密度及相关因子的变化

背景:牙列缺失是常见的口腔疾病,若得不到及时有效的治疗,就会出现邻牙倾斜、对颌牙伸长等不良影响,造成牙合紊乱以及(牙合)干扰,严重影响后期修复.尤其是糖尿病患者牙列缺失后,对颌牙在(牙合)向伸长过程中,糖尿病对其有何影响？骨连接蛋白在此过程如何变化？目前尚不清楚.目的:通过建立糖尿病小鼠对颌牙(牙合)向伸长运动实验模型,研究糖尿病对小鼠牙齿骀向伸长运动过程的影响.方法:向C57 BL/6J小鼠(购买于山西医科大学动物实验中心)腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,以腹腔注射柠檬酸钠缓冲液的小鼠为对照.取建模成功的糖尿病小鼠与对照组小鼠各30只,拔除右上颌3颗磨牙建立对颌牙(牙合)向伸长运动实验模型,术后0,3,6,9,12d,取右侧下颌骨,利用Micro CT测量骨密度,抗酒石酸酸性磷酸酶染色计数破骨细胞数量,RT-qPCR检测骨连接蛋白基因的表达.实验方案经山西医科大学伦理委员会批准.结果 与结论:①随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨密度逐渐增加,糖尿病组术后3,6,9,12 d的骨密度低于对照组(P＜0.05);②随着时间的延长,两组右侧下颌骨的破骨细胞数量逐渐增多,糖尿病组术后3,6,9,12d的破骨细胞数量少于对照组(P＜0.05);③随着时间的延长,两组右侧下颌骨的骨连接蛋白基因表达量逐渐升高,糖尿病组术后0,3,6,9,12d的骨连接蛋白基因表达量高于对照组(P＜0.05);④结果表明,糖尿病可降低牙齿(牙合)向伸长运动过程中的骨改建能力并提高骨连接蛋白基因表达.

2020

2021/07/20

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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤可提高小鼠同种异体坐骨神经移植效率

背景:近年最新研究表明,华勒氏变性的发生与许旺细胞的自噬活动密切相关,对许旺细胞自噬活动进行调控,可以显著影响华勒氏变性的发生发展,从而改变后续的轴突再生及髓鞘化过程.目的:在同种异体神经移植中对移植片段的细胞自噬过程进行抑制,观察是否影响移植后的修复效率.方法:获取8只雌性C57BL/6J小鼠(购自北京维通利华)坐骨神经片段16条,分2组,分别于含自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤的培养基及普通培养基中处理72 h.取16只雌性C57BL/6J小鼠,建立左侧坐骨神经缺损模型,实验组(n=8)植入含自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤培养基处理过的坐骨神经片段,对照组(n=8)植入普通培养基处理的坐骨神经片段,术后2,4,6,8周,记录坐骨神经指数;术后8周取再生坐骨神经段,分别进行苏木精-伊红染色、免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色、透射电镜观察等.动物实验通过北京协和医学院动物伦理委员会批准.结果与结论:①实验组术后8周的坐骨神经指数高于对照组(P<0.05),其余时间点两组间比较差异无显著性意义(P>0.05);②苏木精-伊红染色显示,实验组神经组织完整,对照组神经组织可见大面积空洞;③免疫荧光染色显示,实验组可见较完整的神经束结构,对照组未见完整的神经束结构;④甲苯胺蓝染色显示,实验组可见有髓神经纤维和部分再生无髓神经纤维,对照组仅见少量有髓神经纤维与新生无髓轴突;⑤透射电镜显示,实验组髓鞘厚度及有髓纤维直径均大于对照组(P<0.05);⑥结果表明应用3-甲基腺嘌呤处理移植前神经片段,可抑制许旺细胞自噬,有助于保留移植物髓鞘结构完整性,促进轴突再生及功能的恢复.

2020

2021/07/20

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