免疫介导再生障碍性贫血小鼠模型制备条件的实验比较研究

目的 对比研究影响小鼠再生障碍性贫血(aplastic a-nemia,AA)模型造模过程的主要因素,优化模型条件.方法 采用钴-60γ射线照射联合免疫细胞静脉注射,建立免疫介导的小鼠AA模型,以外周血全血细胞分类计数和网织红细胞比例为检测指标,对造模影响因素进行考察;并以AA临床治疗药物环孢素验证模型可靠性.结果 射线照射剂量、动物性别、注射免疫细胞类别、指标检测时间点均是影响造模程度与数据质量的重要因素,根据本研究,最优模型条件为♂小鼠5.80 Gy钴-60γ射线照射联合胸腺-脾细胞2:1静脉注射,造模后第二周进行指标检测.结论 本研究有利于实验人员在AA药理学研究中对实验过程进行更为有效的控制、保证数据质量,为AA治疗药物筛选评价与机制研究的高效进行提供保障.

2020

2021/07/20

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不同途径免疫不同动物制备的F基因型腮腺炎病毒抗血清的比较

目的 利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清.方法 将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、28和35 d免疫,每次7.5 lgCCID50/mL,于每次免疫后7d采用微量滴定法检测血清抗体效价.利用抗体效价较高血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒进行干扰试验.结果 不同免疫途径均可诱导动物产生抗体,皮下+肌肉注射的免疫方式产生的血清抗体效价高于单独皮下及肌肉注射的免疫方式,差异有统计学意义(P＜0.05);在同等免疫剂量下,家兔产生的抗血清效价明显高于豚鼠.家兔抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒的滴度均无干扰.结论 经皮下和肌肉注射结合的途径免疫家兔,可获得高效价血清抗体,对制备高效价F基因型腮腺炎病毒血清抗体提供了依据.

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新疆新源县和四川石渠县啮齿动物及家畜棘球绦虫线粒体cox1基因遗传多态性分析

目的 了解新疆新源县和四川石渠县棘球绦虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基1(cox1)基因的遗传多态性,探讨棘球绦虫在我国的传播动力和传播方向. 方法 2014-2018年,在新疆新源县、四川石渠县捕捉啮齿类动物并采集其肝组织样品,收集家畜病变脏器.提取肝组织和病变脏器组织的DNA,PCR扩增棘球绦虫cox1基因片段,经分子克隆、测序后,在NCBI数据库中比对以确定所感染的虫种.使用Clustal X2和MEGA 7剪辑序列,使用DnaSP v5和Arlequin 3.5计算核苷酸多态性和中性检验,分析新源县和石渠县棘球绦虫的遗传多样性.以石渠棘球绦虫为外群,用MrBayes 3.2.4建立基于cox1基因的贝叶斯系统进化树,总结分析虫种的基因型.采用Network 5.0绘制棘球绦虫cox1基因的单倍型网络图,分析单倍型结构. 结果 在新疆新源县捕获普通田鼠122只,收集绵羊病变脏器5个;在四川石渠县捕获青海田鼠144只、经营田鼠44只和高原鼠兔135只,收集牦牛病变脏器6个.其中从5只绵羊、4头牦牛的病变脏器样品DNA扩增获得细粒棘球绦虫cox1基因片段40条(新源县26条,石渠县14条),从8只普通田鼠、14只青海田鼠、5只经营田鼠和2只高原鼠兔获得多房棘球绦虫线粒体cox1基因59条(新源县20条,石渠县39条),扩增产物长度均为875 bp.细粒棘球绦虫在两地的遗传分化程度(Fst=0.088 63)高于多房棘球绦虫(Fst=0.000 88),新源县细粒棘球绦虫遗传多样性(0.002 58±0.00046)低于石渠县(0.005 88±0.000 58),而其多房棘球绦虫遗传多样性(0.002 28±0.000 46)高于石渠县(0.001 37±0.000 30).贝叶斯系统进化树显示,两地的细粒棘球绦虫基因型为G1型,多房棘球绦虫为亚洲型.序列比对发现25个细粒棘球绦虫cox1基因单倍型(新源县15个,石渠县9个,共同单倍型1个)和29个多房棘球绦虫cox1基因单倍型(新源县13个,石渠县15个,共同单倍型1个),两种棘球绦虫的单倍型网络图均为环绕主单倍型(共同单倍型)的辐射状结构,新源县的细粒棘球绦虫序列中有9条为主单倍型(34.6％,9/26),而石渠县仅有1条(1/14),显示出新源县在细粒棘球绦虫单倍型结构中的核心位置;石渠县的多房棘球绦虫基因序列中有23条为主单倍型(58.9％,23/39),而新源县为7条(35.0％,7/20),表明石渠县在多房棘球绦虫的单倍型结构中更具有主导地位. 结论 新源县和石渠县的棘球绦虫线粒体cox1基因型一致,但遗传多态性存在一定差异,同等空间跨度上细粒棘球绦虫的遗传分化程度要高于多房棘球绦虫,这些差异为探讨棘球绦虫传播方向和动力提供了重要参考依据.

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左旋聚乳酸-聚三亚甲基碳酸酯共混物的降解特点和生物相容性的实验研究

目的 制备出左旋聚乳酸-聚三亚甲基碳酸酯(PLLA-PTMC)共混物的成型栓棒,研究其降解性能和生物相容性,探讨该栓棒作为生物可降解骨折内固定材料的可能性.方法 选用分子量为16×104的左旋聚乳酸(PLLA)与不同的相对分子质量的聚三亚甲基碳酸酯(PTMC),采用热熔加压成型的方式制备二者的共混物栓棒.将PLLA-PTMC共混物栓棒分别置于磷酸盐缓冲液(PBS)、脂肪酶溶液、成年新西兰大白兔股骨髁内,定期观察栓棒的表面形貌并测量各个时期的失重率变化,探寻其体内外降解规律.结果 ①在同一种降解环境下,PTMC的相对分子质量越高,该共混物降解越快.②三种不同的降解环境中,脂肪酶中共混物降解最快,动物体内次之,降解速率都较为理想,但PBS中共混物降解缓慢,PBS中共混物在16周内质量损失率最大不超过3％.相对分子质量为330×103的PTMC与PLLA共混物栓棒在脂肪酶中降解16周后质量损失率达到了79.48％,在动物体内降解16周后质量损失率达到了61.35％.③试件在植入8周后,植入物周围组织已经基本恢复正常.结论 ①PLLA-PTMC共混物具有良好的降解性能,其降解速率受PTMC的相对分子质量及降解环境等多种因素的影响.②PLLA-PTMC共混物具有良好的生物相容性.

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流式细胞仪在GLP体系下性能验证方法的建立

目的 建立流式细胞仪在GLP体系下的性能验证方法.方法 以《YY/T 0588-2017流式细胞仪》行业标准为依据,在BD FACSVerseTM流式细胞仪上建立流式细胞仪性能评价的验证方法,包括药物安全性评价中免疫学评价常用的流式检测项目,前向角散射光和侧向角散射光分辨率、重复性、携带污染率、仪器稳定性等.结果 BD FACSVerseTM流式细胞仪在本实验检测条件下各项性能指标均符合行业标准的技术要求.结论 上述性能指标验证方法准确可靠,能够满足药物安全性评价的需要,可以为流式细胞仪在GLP体系下的性能验证提供一定的参考.

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补肾健脾活血方对大鼠悬尾试验性骨质疏松和肌萎缩影响的实验研究

目的:探讨补肾活血健脾方对悬尾大鼠骨密度和肌萎缩的影响.方法:采用SPF级健康SD大鼠48只,随机平均分为健脾活血方高剂量组,低剂量组,造模组和空白对照组,每组12只.除空白对照组外,其余各组均选用大鼠悬尾实验作为废用性骨质疏松和肌萎缩模型的建立动物模型造模共计28 d,造模期间,补肾健脾活血方高剂量组给予补肾健脾活血方提取物2.50 g/(kg·d)灌胃,补肾健脾活血方低剂量组给予补肾健脾活血方提取物1.25 g/(kg·d)灌胃,造模组和空白对照组给予等剂量饮用水灌胃,每天1次.28 d后,全部大鼠腹腔采血后处死,取右侧股骨以及L1～4椎骨和完整分离左右侧比目鱼肌.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清成骨标记物血清骨形成蛋白2(BMP-2)、骨钙素(OCN)及破骨标记物抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)进行测定,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠股骨成骨相关基因OCN,Runx-2的表达,双能X线检测各组椎体和股骨骨密度的表达,并测量比目鱼肌湿重与横截面积测量.结果:与造模组相比,健脾活血方高剂量组大鼠右侧股骨和椎体BMD显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组血清TRAP呈显著性降低(P<0.01,P<0.05);健脾活血方高剂量和低剂量组大鼠股骨OCN和Runx-2 mRNA的表达显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组和低剂量组左侧和右侧比目鱼肌平均湿重显著性增高(P<0.05);健脾活血方高剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型和II型纤维横截面积显著性增高(P<0.05),健脾活血方低剂量组左侧和右侧比目鱼肌I型纤维横截面积相比造模组呈显著性增高(P<0.05).结论:补肾活血健脾方可以防止失重引起的骨密度降低和肌萎缩,为临床用于治疗废用性骨质疏松和肌萎缩奠定了理论基础.

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葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松性骨折骨痂血管形成的影响

目的 探讨葛根素对骨质疏松性骨折骨痂血管形成的影响及对骨折愈合的作用.方法 60只雌性SD大鼠分为3组:假手术组、去势组、葛根素组,20只/组,去卵巢大鼠骨质疏松性骨折动物.观察评估骨折愈合情况,检测血清BMP-2和VEGF浓度,观察骨痂形态结构变化,检测骨痂BMP-2和VEGF表达.结果 去势组较假手术组骨折愈合评分、血清BMP-2和VEGF浓度、骨痂BMP-2和VEGF表达、微血管数均显著降低(P＜0.05),葛根素组较去势组上述指标均显著增高(P＜0.05).去势组骨痂组织可见少量骨小梁,生长稀疏,排列紊乱,大量纤维软骨细胞等纤维组织,成骨细胞及新生小血管少见;葛根素组骨痂可见较多骨小梁,生长较旺盛,排列有序,可见较多成熟的骨细胞,新生微小血管较多.结论 葛根素通过介导去卵巢大鼠骨质疏松性骨折骨痂BMP-2和VEGF表达,促进骨痂血管形成,改善骨组织形态学,加快骨折愈合.

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参附强心颗粒中附片减毒增效工艺研究

目的 优选参附强心颗粒中附片提取工艺.方法 以经典原方的水提取工艺为基础,为附片的提取工艺初步设计4种不同的水提取方法,其中,样品1、样品2、样品4分别是水提物、醇沉物以及醇沉后高温处理产物,样品3经水提且高温处理.测定4个样品生物碱含量、小鼠及豚鼠急性毒试验实验研究.结果 4个样品6种生物碱总和分别为:0.213、0.163、0.123、0.141mg/g,以样品3的生物碱含量最低.小鼠毒性试验结果显示,4个附片提取物样品的LD50(95％可信限)分别为152.3(140.9～164.8)、155.0(139.0～172.8)、181.4(172.3～190.9)、150.7(139.4～162.9)g生药/kg,其中样品3的LD50值最大.豚鼠毒性试验结果显示:4种附片提取物样品灌胃豚鼠的半数致心律失常量(AD50)(95％可信限)分别为75.2(65.3～86.4)、73.8(62.8～83.5)、119.8(109.2～130.4)、91.9(82.2～110.4)g生药/kg,LD5(095％可信限)分别为72.6(67.8～77.9)、85.1(78.8～102.6)、109.7(101.6～119.4)、96.0(90.5～101.7)g生药/kg,其中样品3的AD50、LD50值均最大.结论 附片经水提且高温处理工艺得到的样品毒性最低,其安全性最高.

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脐带间充质干细胞移植治疗心肌梗死大鼠心功能变化的Meta分析

背景:研究显示,相对于其他来源的干细胞,脐带间充质干细胞这类多功能干细胞的免疫原性较低,将其应用到心肌梗死大鼠基础研究中具有显著疗效.目的:系统评价脐带间充质干细胞对心肌梗死大鼠心功能的影响.方法:计算机检索PubMed、Cochrane、Embase、CBM、中国知网、万方、维普、中国期刊数据库,检索时限从建库起至2019年6月,收集关于脐带间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死的系列研究.由2位研究者按照纳入标准独立完成文献筛选、资料提取及方法学质量评价,采用Stata14.0进行Meta分析.结果与结论:最终9篇文献纳入研究,共计216只大鼠.Meta分析结果显示:①脐带间充质干细胞可显著升高心肌梗死大鼠的左室射血分数[95％CI(3.16,3.76),P<0.001];②脐带间充质干细胞对心肌梗死大鼠左室短轴缩短率有显著增加作用[95％CI(0.18,0.54),P<0.001];③脐带间充质干细胞对心肌梗死大鼠的左室舒张末期内径[95％CI(-1.90,-0.99),P=0.042]和收缩末期内径[95％CI(-6.56,-4.65),P<0.001]有明显缩短作用;④脐带间充质干细胞可显著改善心肌梗死大鼠的左室舒张末期容积[95％CI(-2.01,-1.11),P<0.001]和收缩末期容积[95％CI(-3.44,-2.17),P<0.001];⑤结果表明,脐带间充质干细胞移植治疗对心肌梗死大鼠的心功能有明显改善作用,且安全性较高.受纳入文献质量的限制,以上结论需更高质量、更大样本的随机对照实验加以验证.

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基于BALB/c裸小鼠构建SIV感染动物模型

目的 构建可进行猴免疫缺陷病毒(SIV)复制的裸小鼠模型,为抗艾滋病病毒药物筛选的体内实验提供一种廉价、易于操作的艾滋病小动物模型.方法 向BALB/c裸小鼠腹腔内接种已感染猴免疫缺陷病毒(SIVmac251)的TZM-b1细胞,构建SIV体内复制的裸小鼠动物模型,通过采集小鼠血浆,进行反转录实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)检测血浆中SIVmac251病毒载量,并且通过HE染色法检测小鼠主要器官的组织学改变,通过高效联合抗反转录病毒疗法(HAART)对该模型进行药物干预,验证该模型的抗病毒药物评价效果.结果 1)BALB/c裸小鼠成功接种已感染SIVmac251的TZM-b1细胞.2)连续7周在BALB/c裸小鼠血浆里检测出SIVmac 251病毒载量.3)在小鼠主要器官出现了组织学改变.4)验证了HAART对小鼠体内SIVmac 251复制的抑制作用.结论 构建了支持SIV复制的小动物模型,该模型能够支持SIVmac251的复制,并表现出组织学病理变化,为研究抗艾滋病药物体内抑制病毒复制提供了廉价、易于操作的小动物模型.

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