左乙拉西坦通过抑制NLRP3炎症小体的活化和氧化应激改善APP/PS1小鼠的认知障碍

目的 以氧化应激和神经炎症为切入点,考察左乙拉西坦治疗阿尔茨海默病的药效和潜在机制.方法 淀粉样蛋白前体蛋白/I型早老素双转基因(amyloid precursor protein-swe/presenilin-1-1dE9,APP/PS1)模型小鼠按照体质量每2d通过尾静脉注射不同剂量左乙拉西坦(5,10,20 mg·kg-1),连续给药30 d.自主活动试验考察实验动物自主活动能力;Morris水迷宫试验考察实验动物认知能力;免疫组化试验考察实验动物海马脑区小胶质细胞活化程度;半胱天冬酶-l(caspase-l)活力检测试剂盒考察实验动物海马脑区caspase-1活力;蛋白免疫印迹试验考察实验动物海马脑区白介素-1β(interleukin-1β,IL-iβ)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin 结构域蛋白3(NOD-,LRR-and pyrin domain-containing protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、caspase-1 蛋白表达水平;比色法试剂盒检测实验动物海马脑区超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平、过氧化氢(H202)含量和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平.结果 与空白组小鼠相比,APP/PS1模型组小鼠的逃避潜伏期显著延长,且海马脑区小胶质细胞活化程度明显加剧,IL-1β水平明显增加,NLRP3和caspase-1蛋白水平明显增加,SOD活力显著下降,GSH水平显著减少,MDA水平显著增加.与模型组相比,左乙拉西坦10 mg·kg-1和20 mg·kg-1可以显著缩短APP/PS1小鼠逃避潜伏期,显著减轻海马脑区小胶质细胞活化程度,显著降低IL-lβ水平,显著减少NLRP3和caspase-1蛋白水平,显著增加SOD活力和GSH水平、显著减少MDA水平.结论 左乙拉西坦可以显著改善APP/PS1小鼠的认知功能,其作用机制可能与抑制炎症小体的活化和氧化应激密切相关.

2020

2021/07/20

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杨梅苷毒性早期评价研究

目的 通过毒性早期筛选方法,初步明确化合物杨梅苷是否存在毒性,寻找其毒性靶器官和安全应用范围.方法 采用急性毒性试验、为期1个月的重复给药毒性试验、遗传毒性(Ames试验和骨髓微核试验)等方法,考察杨梅苷的毒性.结果 急性毒性试验结果表明,受杨梅苷溶解性的限制,未能测出半数致死量(LD50)值,杨梅苷1d内最大给药量为7.2 g/kg·bw.为期1个月的反复给药毒性结果可见杨梅苷对动物行为状态、饮食饮水量及动物的生长均没有明显的影响;血液学结果可见雄性动物各剂量给药组HGB含量明显降低,高剂量给药组RBC亦降低;血液生化学结果显示,杨梅苷给药后引起动物的血糖波动,结合脏器指数的变化、病理组织学结果分析,虽个别指标差异有统计学意义,但未见明显的生物学意义.遗传毒性结果表明杨梅苷没有明显的致突变作用.结论 本实验条件下,杨梅苷在0.225～1.2 g/kg·bw的剂量范围内,对机体未见明显的连续给药毒性反应或遗传毒性.

2020

2021/07/20

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双黄连抗结肠癌活性组分中药的发现和验证

目的:应用网络药理学方法,从双黄连方剂中预测具有抗肿瘤活性的组分中药,并通过离体细胞实验与动物实验对其抗CT26结肠癌活性进行初步验证.方法:基于中药系统药理学数据库(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database,TCMSP),《中药活性成分分析手册》,药品生物信息学和化学信息学数据库(DrugBank),信号通路数据库(Reactome)及人类蛋白质参考数据库(Human protein reference database,HPRD),构建蛋白-蛋白相互作用网络(proteinprotein interactions network,PPI)和化合物靶标网络,挖掘化合物的药理作用,发现与PPI网络节点距离较短的化合物,确定组成中药的配伍.以CT26结肠癌细胞为实验材料,结合离体和在体实验初步验证组分中药的抗肿瘤作用.结果:从双黄连组分中预测并发现“黄芩苷、连翘酯苷A和绿原酸”3个化合物配伍具有潜在抗肿瘤活性.验证结果表明,细胞实验中,与空白组比较,双黄连组分中药能显著抑制CT26细胞的增殖和迁移(P＜0.01);动物实验中,与荷瘤模型组比较,双黄连组分中药治疗组小鼠皮下肿瘤体积增长缓慢、肿瘤重量显著降低(P＜0.01).结论:结合数据库挖掘和化合物靶点网络构建、分析等方法从双黄连方剂中发现具有抗肿瘤活性的组分中药“黄芩苷、连翘酯苷A和绿原酸”.经验证,该组分中药具有较好的抗CT26结肠癌活性.

2020

2021/07/20

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小鼠抗小鼠CD226单克隆抗体的制备及应用

目的 利用CD226基因敲除小鼠作为免疫动物,制备抗小鼠CD226单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 用真核表达的重组小鼠CD226蛋白免疫动物,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗小鼠CD226 mAb,进行流式细胞术、Western blot实验等应用的鉴定.建立夹心ELISA检测小鼠可溶性CD226的方法.应用已建立的夹心ELISA检测脂多糖诱导脓毒症小鼠血浆可溶性CD226浓度.结果 获得2株分泌小鼠抗小鼠CD226 mAb的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名为mA1.1和mA1.3,抗体亚类均为IgG1,轻链型均为K.鉴定发现所获得的mAb可以应用于流式细胞术,能够识别细胞表面外源性转染表达的CD226和小鼠血小板表面的CD226;可以应用于Western blot实验,结合相对分子量(Mr)为67 000的淋巴细胞膜蛋白,与CD226的Mr相符.用mA1.3 mAb包被酶标板,mA1.1 mAb标记辣根过氧化物酶或生物素,敏感度分别为3.0 ng/mL和0.25 ng/mL,检测脓毒症小鼠血浆中可溶性的CD226浓度较正常小鼠降低.结论 成功制备了识别小鼠CD226的小鼠mAb,可应用多种检测技术.

2020

2021/07/20

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三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的 为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察.方法 收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对“中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则”中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性.结果 三七片取样量100 mg,56℃水浴8h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230 bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求.结论 ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考.

2020

2021/07/20

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外泌体及其miRNA在神经系统常见疾病诊断和治疗中的研究进展

外泌体(exosome)主要来源于细胞内的多囊泡内体,通过多囊泡内体外膜与细胞膜融合分泌到胞外间隙,直径为30～100 nm,可作为潜在的生物标志物以及细胞间传递生物信息的载体.近年来的研究表明,外泌体有助于神经系统疾病的早期诊断.在细胞实验和动物模型中,外泌体能够促进神经再生、抑制神经细胞凋亡.本文对外泌体的分离、鉴定及其在缺血性脑卒中、阿尔茨海默病和帕金森病这3种神经系统常见疾病的诊断和治疗中的应用进行综述.

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2021/07/20

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“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁大鼠海马PI3K/Akt/mTOR通路及自噬相关蛋白的影响

目的:观察“通督调神”针刺对脑卒中后抑郁(PSD)模型大鼠抑郁症状的改善作用,并探讨其可能作用机制.方法:将48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、通督调神组和非经非穴组,每组12只.模型组、通督调神组和非经非穴组大鼠采用大脑中动脉线栓阻塞法制备脑卒中模型,采用慢性不可预知性温和性应激法后孤养法复合制备PSD模型.通督调神组针刺“大椎”“水沟”“百会”“神庭”,非经非穴组大鼠针刺双侧前肢足背侧第3、4跖骨间隙凹陷处,两组均留针40 min,每日针刺1次,每周6d,连续干预4周.各组大鼠分别于造模后与干预结束后进行行为学指标检测(Zea Longa神经行为学评分、敞箱实验、蔗糖水消耗实验).Western blot法检测大鼠海马CA1区磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、Beclin1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达水平,real-time PCR法检测大鼠海马CA1区Beclin1、LC3B-ⅡmRNA的表达.结果:造模后,模型组、通督调神组、非经非穴组大鼠Zea Longa神经行为学评分均高于假手术组(P＜0.05),敞箱实验水平与垂直运动积分、蔗糖水消耗量均低于假手术组(P＜ 0.05).干预后,模型组大鼠Zea Longa神经行为学评分,海马CA1区Beclin1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、LC3B-Ⅱ表达水平高于假手术组(P＜ 0.05);敞箱实验水平与垂直运动积分、蔗糖水消耗量,海马CA1区PI3K、p-Akt、p-mTOR表达水平低于假手术组(P＜ 0.05).干预后,通督调神组大鼠Zea Longa神经行为学评分,海马CA1区Beclin1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ、LC3B-Ⅱ表达水平低于模型组及非经非穴组(P＜ 0.05),敞箱实验水平与垂直运动积分、蔗糖水消耗量,海马CA1区PI3K、p-Akt、p-mTOR表达水平高于模型组及非经非穴组(P＜ 0.05).结论:“通督调神”针刺能明显改善PSD大鼠抑郁症状,其作用机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路,抑制海马神经元自噬有关.

2020

2021/07/20

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SCAR-PCR技术鉴定日本血吸虫尾蚴性别的应用

采用日本血吸虫单条毛蚴感染单个阴性钉螺的方法,培育获得可释放单一性别尾蚴的阳性钉螺.收集每只阳性钉螺释放的单一性别尾蚴,用序列特异扩增区域PCR(SCAR-PCR)鉴定尾蚴性别;用同一钉螺逸出的单一性别尾蚴感染小鼠后21 d,剖杀小鼠,收集成虫,判定成虫的性别以验证尾蚴性别(实验动物感染法)并评价SCAR-PCR鉴定单条尾蚴性别的正确性.结果显示,仅雌性尾蚴能扩增出153 bp的特异性条带,其鉴定结果与实验动物感染法的判定结果一致.SCAR-PCR检测DNA下限为16.5 ng,相当于1条尾蚴DNA量.采集经动物实验确认的雄性和雌性尾蚴各40条,应用SCAR-PCR检测出其中37条雌性尾蚴和40条雄性尾蚴.SCAR-PCR检测单条雌性尾蚴的正确性为92.5％(37/40),检测单条雄性尾蚴的正确性为100％(40/40).应用SCAR-PCR可以鉴别日本血吸虫尾蚴的性别.

2020

2021/07/20

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去甲乌药碱对心血管药理作用的研究进展

去甲乌药碱(higenamine,HG)是从附子中分离出的有效强心成分.国内外学者对HG的体内代谢和药理作用做了大量的研究,证实其对心血管系统具有多方面的作用.HG有正力性和正时性的强心作用,舒张血管的功能,用于治疗心力衰竭和心动过缓,近期已将其作为心脏负荷试验诊断药物.HG的抗氧化、抗凋亡作用可以用于保护心脏,减轻心脏缺血再灌损伤.另外,HG通过抑制转录因子NF-κB的活性,抑制iNOS mRNA的表达,抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的NO产物,对血小板聚集和血栓形成也有抑制作用.从而,对动物实验性感染性休克具有改善作用.本文综述了去甲乌药碱对心血管药理作用的研究进展,有助于该药物进一步研发及临床应用.

2020

2021/07/20

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两株云南省新分离版纳病毒的鉴定及序列分析

目的 对云南省中缅边境地区采集的蚊虫进行版纳病毒(BAV)的分离鉴定.方法 2013年6月在云南省德宏州芒市牛圈采集蚊虫样本,分别接种BHK-21、C6/36、Vero细胞分离病毒,用RT-PCR方法鉴定,并进行序列分析.结果 从采集的蚊虫中分离到2株分离物(C23、C36),接种C6/36细胞6d后产生细胞规律病变,而在BHK21和Vero细胞上不出现细胞病变;PAGE电泳显示2株新分离病毒为12个节段双链RNA病毒,其带型为6-4-2;BAV第12节段特异性引物扩增为阳性,测序获得2株新分离病毒第12节段序列,序列分析显示2株新分离病毒序列与BAV位于相同的进化簇中,核苷酸同源性在92.1％～96.3％之间;与云南省和越南分离的7株BAV遗传进化关系较近,核苷酸同源性在94.5％～96.3％之间,而与我国辽宁、甘肃和山西分离的BAV遗传进化关系较远,核苷酸同源性均低于93.6％.结论 从芒市蚊虫中分离的C23和C36病毒为BAV,遗传进化关系与云南省以前分离的毒株较近.

2020

2021/07/20

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