重组酶聚合酶扩增结合电化学DNA传感器检测日本血吸虫方法的建立

目的 联合重组酶聚合酶扩增及电化学DNA传感器检测技术,建立一种敏感、特异且简单的日本血吸虫(Schistosoma japonicum)核酸检测方法. 方法 提取日本血吸虫基因组DNA,以SjR2基因片段为靶序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)引物与探针,与电化学DNA传感器(EC)检测技术联合,将探针固定于多通道电极芯片进行界面RPA扩增及电化学检测,建立日本血吸虫核酸等温检测方法.优化RPA反应条件,通过检测10-4、10-5、10-6、10-7、10-s ng日本血吸虫基因组DNA,评价RPA-EC方法的敏感性;通过检测10 ng日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫的基因组DNA,评价RPA-EC方法的特异性.取10只6～8周龄C57成年小鼠,每鼠经腹部贴片感染40条日本血吸虫尾蚴,分别于感染前(0 d)和感染后7、21、35 d收集尾静脉血清,验证RPA-EC方法检测感染动物动态血清DNA中SjR2基因片段的可行性. 结果 RPA-EC联合检测方法可在37℃、30 min内完成SjR2基因片段的界面快速扩增及检测,成虫基因组DNA的最低检出限可达10-8 ng,与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、卫氏并殖吸虫、大片吸虫及华支睾吸虫基因组DNA无交叉反应,具有较好的特异性.日本血吸虫感染小鼠实验结果显示,RPA-EC联合检测方法可高敏感检出感染后7、21、35 d等不同感染期小鼠血清中的SjR2基因片段. 结论 本研究所建立的RPA-EC联合检测方法敏感性高、特异性好、操作简便,具有一定的应用前景.

2020

2021/07/20

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神经类固醇在阿普唑仑抗大鼠焦虑样行为效应中的作用研究

目的 在本研究中,我们通过行为学实验检测阿普唑仑抗大鼠的焦虑行为与部分脑区(如海马体和前额皮层)中神经类固醇(如四氢孕酮,孕酮和孕烯醇酮)水平的联系.方法 在本研究中,我们采用动物为SD大鼠,应用阿普唑仑对大鼠进行腹腔给药(剂量为0.5、1、2 mg/kg).给药7 d以后,每只大鼠分别通过一系列行为学实验进行研究,如在第8日进行大鼠Vogel饮水冲突实验,在第10日进行高架十字迷宫实验,在第12日进行开场实验.研究过程中,相关实验的检测指标如下:在大鼠Vogel饮水冲突实验中检测大鼠在3 min中的舔水次数;在高架十字迷宫实验中,分别检测5 min内大鼠总入臂次数,时间和开臂进入次数和停留时间;在开场实验中,分别检测5 min内大鼠的粪便颗粒数,跨格数,站立次数.在所有行为学实验完成以后,我们在组织学层面进一步探讨阿普唑仑抗焦虑行为的作用机制.我们提取与焦虑发病相关的脑区(如海马体和前额皮层).然后,实验采用酶联免疫吸附剂测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)分别评价以上脑区中神经类固醇水平(如四氢孕酮,孕酮和孕烯醇酮)的改变.结果 在大鼠Vogel饮水冲突实验中,大鼠舔水次数在阿普唑仑(1、2 mg/kg)处理后明显增加;在高架十字迷宫实验中,阿普唑仑(1、2 mg/kg)处理后,大鼠在十字迷宫的开臂进入次数和开臂停留时间明显提高.然而,总入臂次数和总入臂时间却没有明显的改变;在开场实验中,大鼠的粪便颗粒数,跨格数和站立次数均不受阿普唑仑处理影响.在机制研究方面,大鼠海马体和前额皮层中的孕酮和四氢孕酮水平在阿普唑仑(1和2 mg/kg)的剂量范围下显著提高,而孕烯醇酮的水平则无显著性改变.结论 剂量下阿普唑仑在大鼠中抗焦虑行为与提高海马体和前额皮层中四氢孕酮和孕酮的水平相关.

2020

2021/07/20

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复方山楂煎剂对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响

目的 研究复方山楂煎剂对非酒精性脂肪肝的治疗作用及其作用机制.方法 将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、复方山楂煎剂(低剂量14.85 g生药/kg、中剂量29.7 g生药/kg、高剂量59.4 g生药/kg)组,脂必妥对照组,除空白对照组外其余各组采用高脂饲料喂养大鼠8周,造模后空白对照组、模型对照组灌胃给予蒸馏水,其余各组灌胃给予相应药物,治疗6周.实验结束后,检测各组大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及肝组织中的甘油三酯(TG)和肝体比,并采用HE染色观察肝组织脂肪变性程度,采用免疫组化法检测肝组织中肝细胞生长因子(HGF)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达.结果 复方山楂煎剂可显著降低脂肪肝模型大鼠肝体比、血清MDA、ALT以及肝脏TG含量(P＜0.05或P＜0.01)和结缔组织生长因子(CTGF)在脂肪肝模型大鼠肝组织中的表达(P＜0.05).复方山楂煎剂中剂量组、高剂量组可显著降低脂肪肝模型大鼠血清AST含量(P＜0.05或P＜0.01)、显著提高脂肪肝模型大鼠血清SOD的活性(P＜0.05或P＜0.01)和显著降低肝细胞生长因子(HGF)在脂肪肝模型大鼠肝组织中的表达(P＜0.05).复方山楂煎剂可显著降低高脂饮食诱发的肝细胞脂肪变性程度.结论 复方山楂煎剂可有效地用于非酒精性脂肪肝的治疗.

2020

2021/07/20

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乙型脑炎病毒NS3蛋白对病毒增殖及毒力的影响

目的 探讨乙型脑炎病毒NS3蛋白对病毒增殖及毒力的影响. 方法 利用感染性克隆技术构建以乙脑病毒疫苗株为骨架,用野毒株NS3替换疫苗株相应区域的病毒感染性克隆,体外转录获得RNA,再通过电转染BHK-21细胞拯救病毒,通过噬斑试验、免疫荧光试验和测序鉴定病毒,通过生长曲线、CCK-8检测和动物试验观察和评价嵌合病毒的增殖能力和神经毒力. 结果 酶切和测序表明JEV(V)/NS3(W)嵌合病毒感染性克隆构建成功,并经病毒测序和免疫荧光试验证实成功拯救病毒;蚀斑实验显示:嵌合病毒蚀斑直径(2.92±0.08)mm大于JEV SA14-14-2疫苗株蚀斑直径(1.90±0.10)mm(P＜0.01),与野毒株SA14噬斑直径(2.96±0.13)相似(P＞0.05);生长曲线显示,用M.O.I=0.01接种BHK21细胞后,嵌合病毒48 h达到滴度高峰(8.9 log10PFU/mL);接种BHK21细胞72 h后,CCK 8显示:嵌合病毒组细胞的增殖活性(24.9±1.3)％低于疫苗组(41.4±1.8)％ (P ＜0.01),高于野毒株组(17.7±0.5)％(P＜0.01),但动物试验显示嵌合病毒神经毒力(LD50=124.5 PFU/0.02 ml))弱于疫苗株(LD50-7.7 PFU/0.02 ml).结论 乙脑病毒NS3蛋白对病毒的增殖和毒力均有一定影响,但体内和体外实验结果存在差异.

2020

2021/07/20

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MDM2抑制剂MI-219对前列腺癌的抑制作用研究

目的 探讨MDM2抑制剂MI-219对前列腺癌细胞株的抑制作用及其机制.方法 通过辐照和MI-219作用后检测细胞克隆形成率,利用流式细胞术检测空白组、辐照组、MI-219组以及辐照+MI-219组细胞周期.分别对动物体内肿瘤进行辐照和MI-219处理,检测细胞系以及肿瘤组织中P21、BAX的表达.结果 22RV1、LNCaP、PC3和DU145克隆形成率明显低于对照组,流式细胞分析显示细胞系经MI-219+辐照作用后增殖阻滞.动物实验中,MI-219+辐照可以显著抑制肿瘤的生长.PCR检测表明细胞系和肿瘤组织中P21、BAX的mRNA表达明显升高,并且辐照+MI-219组mRNA表达明显高于辐照组、MI-219组.结论 MDM2抑制剂MI-219对前列腺癌细胞产生增敏作用,导致细胞更容易凋亡,这为前列腺癌的治疗提供新思路,有望提高前列腺癌患者的生存率.

2020

2021/07/20

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潜在抗冠状病毒药物瑞德西韦研究进展

冠状病毒(CoV)是一种正向单链RNA病毒,可以广泛感染人类及其他脊椎动物,部分人畜共患的病毒变异体对人类社会造成了较大影响.瑞德西韦是一种核苷类似物,在细胞及动物实验中表现出了一定的广谱抗病毒作用,具有作为广谱抗CoV药物的潜力.

2020

2021/07/20

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蓓萨罗丁-聚乙烯吡咯烷酮共无定型物制备及在SD大鼠体内评价

蓓萨罗丁是一种新型维甲酸类似物,大量研究表明其具有神经保护作用.其晶Ⅰ型的溶解度和生物利用度较低,严重限制了蓓萨罗丁的临床应用.本文首次制备蓓萨罗丁-聚乙烯吡咯烷酮共无定型物样品,基于X射线衍射及红外光谱分析表征了共无定型物结构.同时,利用LC-MS建立SD大鼠血浆及组织中蓓萨罗丁检测方法.体外溶出结果表明共无定型物使蓓萨罗丁在纯水中溶出度提高了4.17倍.SD大鼠分别给予30 mg·kg-1蓓萨罗丁和共无定型物后,共无定型给药组的蓓萨罗丁血浆AUC从7 034.89 μg·L-1·h提高至10 174.03 μg·L-1·h,达峰时间从7.33 h显著提前至0.9h,同时Cmax由627.76 μg·L-1显著提升至3 011.88 μtg·L-1.各个组织中的蓓萨罗丁含量都有提升,其中以脑、肝和肾组织中提升最为显著.动物福利和实验过程均遵循中国医学科学院药物研究所动物伦理委员会的规定.结果 表明蓓萨罗丁-聚乙烯吡咯烷酮共无定型物改变了原药药物代谢动力学特征,为蓓萨罗丁共无定型物治疗脑部疾病提供临床前数据支持.

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2021/07/20

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长链非编码RNA BCYRN1在非小细胞肺癌中的研究进展

肺癌是世界上发病率及死亡率最高的恶性肿瘤,近年来虽然肺癌诊断和治疗均取得长足进步,但是预后仍不理想.长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是非编码RNA的重要成员,在基因组中极为丰富,研究证实其在肺癌发生发展中发挥重要的调控作用.脑细胞质RNA1 (brain cytoplasmic RNA 1,BCYRN1)是一个长度约为200个核苷酸碱基序列的lncRNA,以往研究认为BCYRN1是一个灵长类动物神经系统特异性的lncRNA,在其他组织低表达甚至不表达.随着研究的深入,发现BCYRN1在非小细胞肺癌患者血清、组织及细胞中高表达,与患者预后也密切相关,且可通过调控相应的靶基因而参与非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、上皮间质转化等生物学行为,有望成为非小细胞肺癌的治疗靶点.本文就BCYRN1在非小细胞肺癌中的研究进展进行综述.

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2021/07/20

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益气活血化痰中药治疗动脉粥样硬化的研究进展

总结了益气活血化痰中药治疗动脉粥样硬化(AS)的临床用药情况与基础研究进展,从AS发病的不同部位归纳了益气活血化痰中药治疗AS的临床研究进展,总结了治疗AS的常用益气活血化痰中药,益气药物多选用黄芪、党参、西洋参、茯苓、白术、红景天等,活血药物多选用川芎、丹参、三七、赤芍、白芍、当归、桃仁、红花、牛膝、茶树根等,化痰药物多选用瓜蒌、半夏、石菖蒲、陈皮、胆南星、天竺黄、枳实、竹沥等.发现益气活血化痰中药治疗颈动脉粥样硬化(CAS)多搭配虫类药物与藤类中药,治疗冠心病多配合行气、止痛、散瘀、化痰中药,治疗下肢硬化时多配合舒筋活络、化痰利窍与健脾利湿药物的使用,并对用药时间、合并用药情况、改善指标方面进行了归纳;基础研究方面,从减轻炎症反应、改善脂质代谢异常及改善内膜损伤方面归纳了该类药物治疗AS的实验进展,发现目前开展基础研究较多的药物主要为丹参酮、西洋参茎叶总皂苷、瓜蒌提取物,芪参益气滴丸、护心康片、丹蒌片、补阳还五汤合瓜蒌薤白汤、化浊通脉散等,并从造模动物、造模特点与作用机制方面进行了总结.该文对益气活血化痰方药治疗AS的应用规律、药物作用机制与特点及未来研究方向开展了总结与述评,以期为合理应用该类中药治疗AS提供参考.

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2021/07/20

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TRIB3通过抑制CTSZ介导的BCR-ABL降解促进急性淋巴细胞白血病疾病进程

费城染色体Ph阳性急性B淋巴细胞白血病(Ph+ B-ALL)是最常见的与染色体异常相关的急性淋巴细胞白血病,该疾病常发于儿童和青壮年,其治疗预后效果较差.研究表明,假性激酶TRIB3 (tribbles homologue 3)在肿瘤细胞中高表达,高表达TRIB3能够促进多种肿瘤的发生发展,但是TRIB3在Ph+ ALL疾病中的作用及分子机制并不清楚.本研究发现TRIB3在Ph+ ALL患者样本中表达上调,高表达TRIB3与断裂点簇基区-Abelson酪氨酸激酶(BCR-ABL)蛋白水平呈现正相关.实验结果进一步表明,敲除TRIB3能够降低BCR-ABL的表达并抑制Ph+ ALL的疾病进程.机制研究表明,TRIB3通过与溶酶体半胱氨酸组织蛋白酶Z(CTSZ)相互作用,进而抑制CTSZ介导的BCR-ABL降解,维持Ph+ ALL细胞的增殖和抵抗凋亡能力.综上,本研究表明抑制TRIB3的表达来调控BCR-ABL蛋白水平可能作为Ph+ ALL潜在的治疗策略.本实验所有动物实验均通过中国医学科学院药物研究所伦理审查委员会审查.白血病患者血液样本实验通过中国医学科学院伦理委员会批准(伦理号:KT2019055-EC-1).

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2021/07/20

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