影响H1N1亚型猪流感病毒致病性与传播性的分子机制研究进展

猪流感(swine influenza,SI)是规模化猪场普遍存在的疾病之一,全球广泛传播的猪流感病毒(swine influenza viruses,SIVs)亚型包括H1N1、H1N2和H3N2,我国以H1N1亚型的流行最为常见.进化上,H1N1亚型SIVs通常分为经典H1N1和欧亚类禽H1N1两大HA分支,分别于1930,1979年被首次分离,且都有直接感染人的病例报道;此后,两者参与重配生成的2009年大流行流感病毒(pdmH1N1/2009)又入侵猪群和人群,严重危害养猪业发展和公共卫生安全.现对致使H1N1 SIVs致病性发生改变或获得跨宿主传播能力的关键氨基酸位点变异及相关机制进行了总结,以期为SI的传播研究和防控提供一定参考.

2020

2021/07/20

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吡非尼酮和尼达尼布抑制慢性肺纤维化小鼠肺泡上皮细胞再生

本研究探究了吡非尼酮(pirfenidone,Pirf)和尼达尼布(nintedanib,Nint)两种药物在单次及多次博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型中,抗纤维化作用差异与肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial type 2 cell,AEC Ⅱ)介导的肺泡再生之间的关系.本实验所有动物实验均通过中国医学科学院药物研究所伦理审查委员会审查.结果 表明:在单次模型中,Pirf及Nint给药组小鼠的肺重指数显著降低,血氧饱和度显著回升,肺功能得到了明显改善,炎症评分显著降低,羟脯氨酸的含量显著下降,表明两种药物具有显著的抗纤维化作用;而在多次模型中两者均没有明显的抗纤维化作用.进一步研究表明Pirf和Nint能够降低β-catenin、Axin2、c-Myc和Cyclin D1蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化,进而抑制AEC Ⅱ的干性功能.以上结果提示,在多次模型中,Pirf和Nint两种药物没有明显的抗纤维化作用是由于药物抑制Wnt/β-catenin信号通路导致AEC Ⅱ细胞的干性功能受阻,即AECⅡ细胞介导的肺泡再生受到了抑制.

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2021/07/20

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鲜天麻对睡眠干扰诱导小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的 研究鲜天麻对睡眠干扰(sleep interruption,SI)诱导的小鼠学习记忆障碍的改善作用.方法 HPLC法测定鲜天麻中天麻素、对羟基苯甲醇的含量,苯酚硫酸法测定多糖的含量.60只ICR雄鼠随机分为对照组、睡眠干扰模型组、阳性药(莫达非尼)组和鲜天麻低(3 g/kg)、高(9g/kg)剂量组.睡眠干扰造模14d后,依次进行自主活动、新物体识别、水迷宫和避暗等动物行为学检测实验,并测定小鼠血清和海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平及海马组织乙酰胆碱(Ach)、谷氨酸(Glu)和去甲肾上腺素(NE)水平.结果 自主活动实验中,各组小鼠运动功能无显著性差异.与对照组比较,模型组小鼠在新物体识别实验中的相对辨别指数(DI)显著性下降,水迷宫寻台潜伏期明显延长,避暗实验错误次数增加、入暗潜伏期缩短;血清和海马组织MDA水平升高,海马组织的SOD水平降低;海马组织Ach、Glu和NE水平均显著降低.与模型组比较,莫达非尼和鲜天麻各剂量能不同程度增加小鼠新物体识别DI,提高新物体辨别能力;增强空间学习获得和保持能力,缩短水迷宫潜伏期;减少避暗错误次数、延长避暗潜伏期;提高血清和海马组织中SOD、Ach、Glu和NE水平,降低MDA水平.结论 鲜天麻能改善睡眠干扰引起的学习记忆障碍,改善氧化应激和神经递质水平,是一种有潜力的改善学习记忆中药.

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2021/07/20

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注射用重组艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白E2HSA对小鼠胰岛β细胞功能的保护作用

注射用艾塞那肽-人血清白蛋白融合蛋白(injectable recombinant protein of exendin-4 and human serum albumin,E2HSA)是我国自主研发的一种长效胰高血糖素样肽-1 (glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂,目前处于临床研究阶段.本研究在细胞和整体动物水平研究E2HSA对胰岛β细胞的保护作用.在细胞水平,采用小鼠胰岛素瘤细胞株NIT-1考察E2HSA对细胞活力和增殖的影响;采用水溶性胆固醇诱导NIT-1细胞损伤,考察E2HSA对细胞活力和凋亡的影响,并研究其相关作用机制.在整体动物水平,采用四氧嘧啶高血糖小鼠考察长期注射E2HSA对血糖、血胰岛素和胰岛内胰岛素含量的影响.动物实验操作和福利均遵循中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所实验动物伦理与动物福利委员会的规定.结果 显示,E2HSA可明显增加NIT-1细胞的活力和掺入的溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU);同时显著增加水溶性胆固醇诱导NIT-1细胞损伤后的细胞活力,减少其凋亡发生率,并增加胞内胰腺-十二指肠同源框1 (pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)蛋白的表达.E2HSA长期注射可明显降低四氧嘧啶小鼠的空腹血糖和非禁食血糖,增加其血清和胰岛内的胰岛素含量.综上,E2HSA可以促进NIT-1细胞增殖,抑制水溶性胆固醇诱导的细胞损伤和凋亡,同时增加四氧嘧啶高血糖小鼠血清和胰岛内的胰岛素水平,提示E2HSA可改善小鼠胰岛β细胞功能.

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2021/07/20

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羊种布鲁氏菌BP26蛋白的生物信息学分析

目的 采用生物信息学方法预测羊种布鲁氏菌BP26蛋白的抗原表位.方法 从NCBI数据库中获取羊布鲁氏菌的BP26蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy蛋白分析在线软件ProtParam、SOPMA、SWISS MODEL,ProtScale、Signal 5.O、TMHMM2.0、PSOTR,分析BP26蛋白的理化性质,二、三级结构,亲、疏水性,信号肽,跨膜区及亚细胞定位;使用IEDB分析BP26蛋白的B细胞表位;使用PROSITE SCAN分别BP26蛋白的结构域分析.结果 BP26蛋白由250个氨基酸组成,分子式为C1152H1898 N328O364S12,相对分子质量为26.5×103,理论等电点为6.39,不稳定系数为27.93,为稳定蛋白.二级结构以α-螺旋为主,占41.2％;无规卷曲占36.8％,延伸链占17.2％;β-转角占4.8％.预测其三级结构与同源模板S19株BP26蛋白相似性99.55％,16个BP26分子形成一个新颖的通道状结构.BP26蛋白存在1个跨膜区,该跨膜区域位于7-29位氨基酸,可能为信号肽,与信号肽分析结果一致.Signal 5.0分析BP26蛋白在7-29位氨基酸有一个分泌型蛋白信号肽.BP26蛋白包含有14个线性表位,其中以27-42、108-125,224-240位氨基酸区段为BP26蛋白的优势抗原表位区段.BP26蛋白包含2个N-糖基化位点,2个蛋白激酶C磷酸化作用位点,2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点,5个N-豆蔻酰基化位点;亚细胞定位分析BP26蛋白为膜周质蛋白.结论 生物信息学分析羊种布鲁氏菌BP26蛋白存在多个B细胞抗原表位,可以作为布鲁氏菌诊断和疫苗研究的候选抗原.

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2021/07/20

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香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织PI3K信号通路相关因子表达的影响

目的 观察香砂六君子汤对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠胃组织血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的影响,探讨该复方防治CAG的作用机制.方法 将120只Wistar大鼠分为空白组和模型组,采用综合法制作CAG动物模型,将成模大鼠分为模型组、维酶素组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,空白组和模型组大鼠给予10 mL/(kg?d)蒸馏水灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予24、12、6 g/(kg?d)香砂六君子汤灌胃,维酶素组给予0.30 g/(kg?d)维酶素灌胃,连续120 d.ELISA检测大鼠胃组织VEGF含量,RT-PCR和Western blot分别检测大鼠胃组织PTEN、PI3K、AKT基因和蛋白的表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,胃黏膜变薄,上皮细胞及腺体排列紊乱、稀疏,腺体数目明显减少,黏膜肌层增厚向固有层延伸,可见大量炎性细胞浸润,胃组织PTEN基因及蛋白表达显著降低(P<0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,香砂六君子汤高剂量组大鼠胃组织PTEN基因表达显著升高(P<0.01),VEGF含量和AKT、PI3K基因及蛋白表达显著降低(P<0.01).结论 香砂六君子汤通过改善模型大鼠生存状况及胃黏膜病理状态,上调胃组织PTEN表达,下调VEGF、AKT、PI3K表达,发挥治疗CAG的作用.

2020

2021/07/20

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特异性靶向肿瘤组织的IDO1抑制剂前药的研究

本文基于在羟基脒类IDO1抑制剂化合物B与epacadostat分子的主要代谢位点羟基上键合一个能够在肿瘤缺氧的微环境中降解的硝基芳环载体分子,设计合成特异性靶向肿瘤组织的IDO1抑制剂前药,检测其对肿瘤生长的影响.共合成了11个前药化合物,其结构通过1H NMR和HR-MS确证.通过MTT实验、体外硝基还原酶还原实验、稳定性实验和体内肿瘤组织缺氧降解实验筛选出稳定性、释药速度等结果较好的化合物F-1、F-6用于体内药效评价.实验结果初步表明,前药F-1对小鼠肝癌的生长抑制率为67.41％,明显高于原药组的42.31％,提示特异性抑制肿瘤组织的IDO1与全面抑制机体内IDO1的抗肿瘤效果明显不同.动物实验遵循中国医学科学院药物研究所动物实验中心标准操作规程.

2020

2021/07/20

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11例肾移植术后合并隐球菌病患者的新生隐球菌菌株遗传多样性研究

目的 分析11例肾移植术后并发隐球菌病患者的新生隐球菌株的基因型分布等遗传多样性特征,为提高肾移植术后患者并发隐球菌病的诊治水平提供科学基础.方法 采用国际人与动物真菌病学会(International Society for Human and Animal Mycology,ISHAM)推荐的多位点序列分型(multi locus sequence typing,MLST)方法对分离自我院9例及外院2例肾移植术后患者的11株新生隐球菌进行分子分型及系统发育分析,并与22株分离自免疫功能正常的隐球菌病患者的菌株进行群体多样性特征比较.结果 本研究纳入的11株新生隐球菌均为VNⅠ基因型菌株(交配型均为MATα型),其中包含5种ST分子型,且以ST5型菌株为主(46％,5/11).系统发育分析结果与主成分分析(principal component analysis,PCA)结果均显示来自肾移植患者的ST5型菌株与来自免疫功能正常患者的ST5型菌株汇聚在一个类群.分离自肾移植术后隐球菌病患者的菌株群体(π=0.00150)的核酸多样性(π)高于分离自免疫功能正常患者的菌株群体(π=0.00088),且分离自肾移植术后患者的ST5型菌株占比较分离自免疫功能正常的隐球菌病患者的ST5型菌株低(P=0.033).结论 该11例肾移植术后并发隐球菌病患者的致病菌株遗传多样性显著高于分离自免疫功能正常的菌株,可能与不同ST型新生隐球菌菌株的毒力不同及肾移植术后患者的免疫功能处于抑制状态有关,本研究为后续的肾移植术后患者并发隐球菌病的精准治疗提供了科学基础.

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2021/07/20

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真实巷道环境下瓦斯爆炸对大鼠脑神经行为的短期影响

目的 研究真实巷道环境下瓦斯爆炸对大鼠脑神经行为的影响.方法 利用中国煤炭科工集团重庆研究院有限公司的大型煤矿瓦斯爆炸试验巷道和爆炸测试系统模拟真实瓦斯爆炸巷道环境,进行笼具固定和爆炸参数设置:即采用当量为含9.0％瓦斯的混合空气;在巷道内距离瓦斯起爆点40、160和240 m处安装特制的鼠笼,将经水合氯醛麻醉后的SPF级健康成年SD雄性大鼠置于其中,将大鼠按照能使头部受力的姿势摆放,同时充分保护大鼠的枕骨大孔以下的躯干部分以及双眼内眦连线以上的口面部,实施瓦斯爆炸实验.将40只(250±20)g大鼠按体重大小随机分为正常对照组、烧冲复合伤组(40 m)、近距离组(160 m)和远距离组(240 m),每组10只.除正常对照组外,其余组动物麻醉状态下置于不同距离点笼具内.于爆炸后2h和7d对大鼠进行一般生理行为学观察,并用旷场行为学实验监测各组大鼠神经行为指标.7d后进行脑组织大体观察和病理学检测.结果 爆炸后2h各暴露组大鼠精神较差,7d后略有好转;体表烧伤程度以烧冲复合伤组最严重;排尿次数呈现减少趋势,而粪便次数呈增加趋势(P＞0.05).实验结束后发现大鼠脑组织脑水肿和充血现象明显;与正常对照组比较,各暴露组大鼠脑重量增加,差异有统计学意义(P＜0.05).病理学观察发现各暴露组大鼠大脑组织呈现神经细胞排列不规则、紊乱,间质水肿疏松核染色质致密深染,形成致密质块等凋亡细胞特征,以及胶质增多,炎性细胞聚集等现象.在爆炸后2d和7h,与正常对照组相比,各暴露组大鼠神经行为指标静止时间延长,站立次数、运动时间和运动距离均明显减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 真实巷道环境下瓦斯爆炸能够对大鼠脑组织造成损伤,并对其神经行为产生明显影响.

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2021/07/20

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杜拉鲁肽类似药(27C7)的蛋白表达及理化性质分析

目的 真核表达杜拉鲁肽类似药胰高糖素样肽1 (GLP-1)-Fc融合蛋白(27C7),并与杜拉鲁肽进行理化性质比较.方法 构建真核表达载体pCHO1.0-GLP-1-Fc,并用脂质体转染CHO细胞,经甲氨蝶呤和嘌呤霉素加压筛选,再单克隆筛选,得到1株高表达的细胞模型.采用ProteinA亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测蛋白大小,质谱仪进行高分辨分子量检测,高效液相色谱法检测蛋白纯度,毛细管等点聚焦电泳(CIEF)检测蛋白等电点,细胞活性功能评价杜拉鲁肽与27C7生物活性的一致性.结果 通过SDS-PAGE、样品高分辨分子量检测,27C7与杜拉鲁肽分子量一致;分子排阻色谱检测27C7与杜拉鲁肽单体纯度接近,CIEF显示27C7与杜拉鲁肽的等电点一致;体外活性检测结果表明,27C7与杜拉鲁肽的生物学活性一致.结论 类似药27C7与杜拉鲁肽具有一定的一致性,可进行下一步的类似药研发工作.

2020

2021/07/20

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