唑来膦酸联合胰岛素促进2型糖尿病并发雌激素缺乏大鼠骨折早期愈合

目的 探讨唑来膦酸联合胰岛素对于2型糖尿病并发雌激素缺乏大鼠早期骨折愈合的影响.方法 32只雌性SD大鼠随机分为CF、DOF、DOFI和DOFIZ 4组.除CF组外,其余3组建立2型糖尿病并发雌激素缺乏动物模型,其中DOFI组和DOFIZ组分别给予单独胰岛素或联合唑来膦酸治疗,骨折后3周取材.通过对骨痂X线片、Micro-CT、番红O-固绿染色、TRAP阳性破骨细胞密度、OCN和Caspase-3的表达进行分析,评价单独应用胰岛素或联合唑来膦酸对其早期骨折愈合的影响.结果 DOF组骨痂的骨折愈合X线评分、Tb.N、BV/TV、骨性骨痂面积比和OCN表达均显著低于CF组(P<0.05),Th.Sp、TRAP阳性破骨细胞密度和Caspase-3表达均显著高于CF组(P<0.05).胰岛素干预后,DOFI组以上各受损指标中除了Th.Sp外均得到显著改善(P<0.05).联合唑来膦酸干预后,DOFIZ组骨痂面积、Tb.N、BV/TV和骨性骨痂面积比显著高于DOFI组(P<0.05),Th.Sp和TRAP阳性破骨细胞密度显著低于DOFI组(P<0.05).结论 胰岛素联合早期单剂量唑来膦酸干预可促进2型糖尿病并发雌激素缺乏大鼠骨折早期愈合.

2020

2021/07/20

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骨髓间充质干细胞移植在小鼠脑梗死中的作用机制及对大脑HMGB1水平的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞移植在脑梗死小鼠中的作用机制及对大脑高迁移率族蛋白(HMG) B1水平的影响.方法 (1)细胞分离、鉴定.选择人组C57小鼠5只,获得骨髓单个核细胞,传代后培养、备用;采用流式细胞仪完成骨髓间充质干细胞鉴定;(2)动物实验.选择入组C57小鼠40只,随机取小鼠10只,设为空白对照组;剩余30只小鼠采用线栓法完成脑梗死动物模型建立,建模成功后分为模型对照组、溶剂组与干细胞组各10只.假体手术组与空白对照组进行常规喂养,溶剂组注射5％ 200μl鼠血清的RPMI1640培养基,干细胞组注射骨髓间充质干细胞5×106个,干预后30 d比较各组神经功能缺损、炎症因子及HMGB1水平.结果 (1)倒置显微镜下原代骨髓间充质干细胞形态不一,形状多为梭形;传代培养后第3代细胞增长迅速、排列具备一定的方向性,多呈旋涡状生长,但是细胞界限不清;流式细胞仪测定结果表明:分离获得的骨髓间充质干细胞CD3占1.4％,CD73为98.6％,CD90为99.1％,说明分离获得的细胞为骨髓间充质干细胞;(2)干细胞组干预后1d、10d、20d、30 d神经功能缺损评分均显著低于溶剂组、模型对照组(P＜0.05);溶剂组干预后1d、10 d、20 d、30 d神经功能缺损评分均显著低于模型对照组(P＜0.05);(3)干细胞组干预后30 d白细胞介素(IL)-6水平显著高于溶剂组与模型对照组(P＜0.05);干细胞组干预后30 d IL-10、转化生长因子(TGF)-β水平均显著低于溶剂组与模型对照组(P＜0.05);溶剂组干预后30 d IL-6水平显著高于模型对照组(P＜0.05);溶剂组干预后30 d IL-10、TGF-β水平均显著低于模型对照组(P＜0.05);(4)干细胞组HMGB1水平显著高于溶剂组与模型对照组(P＜0.05);溶剂组HMGB1水平显著高于模型对照组(P＜0.05).结论 将骨髓间充质干细胞移植用于小鼠脑梗死有助于减少神经缺损,降低炎症因子水平,能促进脑组织中HMGB1释放.

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2021/07/20

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高强度间歇运动训练上调APP/PS1转基因阿尔兹海默病小鼠海马线粒体自噬的研究

目的:观察高强度间歇运动训练干预是否能改善APP/PS1转基因AD小鼠病理表现,并探讨线粒体自噬在其间的生物学效应.方法:8月龄雄性APP/PS1转基因小鼠分为转基因模型安静组(SED-Tg)和转基因模型+高强度间歇运动训练组(HIIT-Tg),C57BL/6野生型小鼠纳入野生型安静组(SED-Wt).HIIT-Tg组动物进行12周高强度间歇运动训练.避暗被动回避实验检测学习记忆能力,JC-1荧光探针检测海马线粒体膜电位,二氯荧光素探针检测海马线粒体ROS,Western Blot法检测脑海马Aβ-42、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin、Bnip3蛋白表达.结果:①SED-Tg组与SED-Wt组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1、Parkin和Bnip3蛋白表达显著降低(P＜0.05-0.01),线粒体ROS产生速率和Aβ-42蛋白表达显著升高(P＜0.01).②HIIT-Tg组与SED-Tg组比较,逃避潜伏期、线粒体膜电位、BDNF、AMPK、PINK1和Parkin蛋白表达显著升高(P＜0.01),线粒体ROS产生速率和Aβ-42蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论:高强度间歇运动训练可通过上调AMPK-PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,改善线粒体功能,减少APP/PS1转基因AD小鼠脑海马Aβ积聚,提高记忆和学习能力.

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二氢杨梅素对高脂饮食诱导的小鼠肥胖的影响及其机制

目的:观察二氢杨梅素(DHM)对高脂饮食诱导小鼠肥胖的影响,并探讨其作用机制是否与促进WAT棕色化有关.方法:60只c57bl/6j小鼠随机分为6组(n=10):①正常对照组(ND组):普通饲料喂养、②正常对照+低剂量DHM组(ND+L-DHM组):普通饲料喂养同时用低剂量DHM(125 mg/(kg·d))处理、③正常对照+高剂量DHM组(ND+H-DHM组):普通饲料喂养同时用高剂量DHM(250 mg/(kg·d))处理、④高脂饮食组(HFD):高脂饲料喂养、⑤高脂饮食+低剂量DHM组(HFD+L-DHM组):高脂饲料喂养同时用低剂量DHM处理、⑥高脂饮食+高剂量DHM组(HFD+H-DHM组):高脂饲料喂养同时用高剂量DHM处理.16周后小鼠空腹过夜,取血测空腹血糖和血脂,随后处死动物,测体长,算出Lee's指数;取肩胛下、腹股沟和附睾处脂肪组织称重后,甲醛固定、HE染色观察脂肪细胞大小,免疫组化检测解偶联蛋白1(UCP1)的表达;实验期间每4周测一次小鼠体重.结果:与ND组相比较,HFD组小鼠体重显著升高,提示肥胖小鼠模型复制成功.此外,HFD组小鼠体脂重量、脂肪细胞直径、Lee's指数和血糖显著增加、脂肪细胞UCP1的表达升高;使用L-DHM和H-DHM处理HFD小鼠后,体脂重量、脂肪细胞直径、Lee's指数和血糖等指标显著逆转,而脂肪细胞UCP1的表达升高更为显著;但L-DHM和H-DHM对正常小鼠上述指标无显著影响.结论:二氢杨梅素抑制高脂饮食诱导的小鼠肥胖,其机制可能与促进WAT棕色化有关.

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神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究现状及存在的问题

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是由于外伤、肿瘤、炎症和缺血缺氧等原因引起的脊髓损害,导致SCI患者损伤平面以下功能永久性障碍,严重影响患者的生活质量,并给患者家庭和社会带来沉重经济负担,目前尚无有效治疗方法,已成为全球性的研究重点和难题.神经干细胞(neural stem cells,NSCs)具有无限增殖的能力和多向分化的潜能,还可以分泌神经营养因子和调节免疫平衡,在动物实验中已经证实其具有治疗SCI的作用,通过移植NSCs或者其分化的产物治疗SCI成为有前景的治疗策略.然而,尽管临床试验在国内外陆续开展,但是国外公开报道的临床试验案例非常少[1、2],取得的结果也未能达到在动物实验中出现的预期结果,移植技术存在许多亟待解决的问题.笔者就NSCs移植治疗SCI的临床试验进展和存在的问题进行综述,以期为将来NSCs治疗SCI的临床应用研究提供参考.

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艾滋病模型中关键指标SIV DNA绝对定量微滴式数字PCR技术的创新应用

目的 建立微滴式数字PCR技术(droplet digital PCR,ddPCR)作为关键指标,实现精准检测艾滋病动物模型中细胞及组织中SIV DNA载量,用于储存库隐匿病毒实时动态评估.方法 根据成熟的qPCR方法 ,对微滴式dPCR的反应条件进行了优化,确定最适退火温度;通过对10倍系列稀释pGEM-SIVgag477质粒标准品的检测,确定ddPCR检测范围.并通过对若干DNA样品的多次检测,判断该检测方法 的稳定性.结果 ddPCR的退火温度为60℃;检测范围是0.3～3.96×104 copies/μL;微滴式dPCR与qPCR有良好的相关性,相关系数r=0.9981.结论 本研究建立了基于微滴式dPCR的SIV病毒DNA的绝对定量方法 ,可有效的对细胞和组织中病毒储存库样本中病毒DNA载量进行动态绝对定量,极大提高了模型应用评价的准确度.

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2021/07/20

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透钙磷石骨水泥复合明胶及重组人骨形态发生蛋白2/7修复骨缺损

背景:课题组前期研究发现10％锶-透钙磷石的成骨能力高于透钙磷石和5％锶-透钙磷石,但也发现掺锶透钙磷石的孔结构不够理想,前期成骨效果不佳.目的:在10％锶-透钙磷石中加入明胶和重组人骨形态发生蛋白2/7(recombinant Human bone morphogenetic proteins 2/7,rhBMP2/7),观察其修复家兔下颌骨缺损的成骨效果.方法:分别制备明胶-10％锶-透钙磷石与含0.04,1 g/L rhBMP2/7的明胶-10％锶-透钙磷石材料.在45只家兔双侧下颌骨制作骨缺损模型,分5组干预:空白对照组不植入任何材料,其余4组分别植入10％锶-透钙磷石(对照组)、明胶-10％锶-透钙磷石(明胶组)、0.04 g/L rhBMP2/7-明胶-10％锶-透钙磷石(0.04 g/LrhBMP2/7组)、1 g/L rhBMP2/7-明胶-10％锶-透钙磷石(1 g/L rhBMP2/7组).术后4,8,12周取骨缺损标本,分别进行锥形束CT与免疫组化观察.实验经华北理工大学实验动物伦理委员会审议批准.结果 与结论:①锥形束CT:术后8周时,1 g/L rhBMP2/7组骨修复基本完成,新生骨组织与周围组织几乎融合;0.04 g/L rhBMP2/7组和胶原组缺损区大部分修复,新骨修复边缘不平整;对照组部分修复.术后12周时,明胶组、0.04,1 g/L rhBMP2/7组完成缺损区骨修复;②免疫组化观察:术后4,8周时,1 g/L rhBMP2/7组Ⅰ型胶原表达高于其他4组(P＜0.05),0,04 g/L rhBMP2/7组、胶原组高于对照组(P＜0.05);术后12周时,植入材料4组间Ⅰ型胶原表达比较差异无显著性意义(P＞0.05):③结果表明:在10％锶-透钙磷石中加入明胶和1 g/L的重组人骨形态发生蛋白2/7可促进骨缺损的修复.

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2021/07/20

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梅花鹿蜡片茸与血片茸脂质组分比较研究

梅花鹿鹿茸是一种传统名贵中药材,在我国已沿用两千多年.本研究通过LC-MS-MS技术对梅花鹿鹿茸的脂质组分进行比较分析.结果 表明,共获得752种梅花鹿鹿茸脂质成分,共分为15个类别,其中磷脂酰乙醇胺相对含量最高,其次为磷脂酰胆碱和甘油三酯;利用OPLS-DA多元统计方法与单因素方差检验筛选到133种显著差异表达脂质分子(VIP＞1,P＜0.05,差异倍数＞2),包含58种甘油三脂,22种磷脂酰胆碱,7种磷脂酰丝氨酸,35种磷脂酰乙醇胺,2种溶血磷脂酰胆碱,5种溶血磷脂酰乙醇胺和4种神经酰胺;相对定量结果显示,甘油三脂与磷脂类化合物在蜡片茸中高表达,而能够维持皮肤水分、调节细胞凋亡的神经酰胺类化合物在血片茸中高表达;另外,筛选到5种甘油三脂在三权蜡片茸相对含量显著高于二杠蜡片茸.本研究详细分析了蜡片茸与血片茸的脂质组分,为鹿茸有效活性成分的挖掘与鹿茸生长机制的探究奠定了理论基础.

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风流草总醇提物对衰老大鼠骨质的影响研究

目的:研究水族传统药风流草总醇提物对D-半乳糖致衰老大鼠骨质的影响.方法:将36只6周龄SD大鼠(雌雄各半)随机分成3组(即幼龄对照组、模型组、风流草总醇提物组[即药物组]),每组12只.另设16月龄SD大鼠12只(雌雄各半)作为老龄对照组.模型组、药物组动物施以皮下5个月连续注射(每日1次,每次20mg/kg)D-半乳糖,期间药物组每日同步灌胃风流草总醇提物20 mg/kg.灌胃5个月后所有动物组进行骨结构力学与生物力学指标、血清钙磷含量、骨羟脯氨酸含量、骨密度、骨组织构成、骨碱性磷酸酶ALP(alkaline phosphatase)测定.结果:与幼龄对照组比较,模型组骨结构力学与生物力学指标、骨密度、骨羟脯氨酸含量以及ALP均有所降低,血清钙磷含量升高.与模型组比较,药物组骨结构力学与生物力学指标、骨密度、骨羟脯氨酸含量以及ALP均有所升高,血清钙磷含量降低.结论:风流草总醇提物可以改善大鼠因D-半乳糖致衰老所诱发的骨质变化.

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Protectin DX对老年大鼠肺损伤相关炎性因子和氧化损伤的保护作用

目的 初步探讨Protectin DX(保护素DX,PDX)对老年大鼠肺叶切除术后肺损伤相关炎性介质及氧化因子的调控及保护作用.方法 将30只SPF级健康的老年雄性SD大鼠(10月龄)随机分为假手术组(n=10)、手术组(n=10)、PDX处理组(n=10).假手术组和手术组在造模1 h后腹腔注射300μL生理盐水,PDX处理组于造模1 h后腹腔注射300μL PDX(500 ng).将所有大鼠于造模24 h后采用过度麻醉的方法处死,收集标本.采用HE染色观察各组肺标本病理形态变化,评价各组大鼠肺标本的干湿质量比(W/D);检测肺泡灌洗液中蛋白浓度及相关炎症因子的含量;检测肺组织中MDA、ROS、SOD的含量以及HO-1、核因子NF-κB的蛋白表达量.结果 假手术组肺组织结构清晰,未见炎症细胞浸润;手术组老年大鼠肺组织结构紊乱,伴有大量炎症细胞浸润;PDX处理组大鼠肺组织结构不清晰,存在少量的炎症细胞浸润.与假手术组相比较,手术组老年大鼠肺损伤评分及肺组织W/D显著增高(P<0.01),肺泡灌洗液中蛋白浓度及IL-1β、IL-6和TNF-α含量明显增加(P<0.01),肺组织中MDA、ROS含量及NF-κB蛋白表达显著升高,SOD活性及HO-1蛋白表达明显降低(P<0.05).与手术组相比较,PDX处理组老年大鼠肺损伤评分及肺组织W/D显著降低(P<0.01),肺泡灌洗液中蛋白浓度及IL-1β、IL-6和TNF-α 含量明显下降(P<0.01),肺组织中MDA、ROS含量及NF-κB蛋白表达显著降低,SOD活性及HO-1蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 PDX能够明显减低老年大鼠肺叶切除术后的肺损伤程度,这种作用可能与其调节肺组织中HO-1、NF-κB蛋白的表达从而抑制肺部的氧化应激反应和炎症反应相关.

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