| 中文名称Chinese name
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直肠途径SIVmac239恒河猴感染模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
Rectal route, SIVmac239, Ganges RIver monkey, infection model |
| 物种Species name |
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| 品系Strain name |
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| 人类疾病Human diseases |
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| 传染性Infectivity |
是 |
| 微生物Microorganism |
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| 类别Category |
感染性动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
感染毒株为SIVmac239中国恒河猴细胞适应株，使用中国恒河猴PBMCs扩增制备，CEMx174细胞滴定TCID50为3×105/mL。 |
| 制作方法Making method |
1、实验用病毒：感染毒株为SIVmac239中国恒河猴细胞适应株，使用中国恒河猴PBMCs扩增制备，CEMx174细胞滴定TCID50为3×105/mL。
2、感染动物：选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。
3、感染方法：将麻醉好的实验猴放在操作台上，动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露，缓慢将SIVmac239中国恒河猴细胞适应株的稀释液注入肛窦处，实验猴保持此姿势30min。
4、SIVmac239直肠感染猴样品采集和指标测定：用DMEM培养基稀释成100TCID50/3mL和1000TCID50/3mL两种浓度，采用小剂量多次直肠暴露的方式感染，3mL/只。共接种10次，2次/周。在每次感染前及10次感染结束后定期采EDTA抗凝血3ml，分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+和CD8+细胞绝对数。
5、SIVmac239直肠感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。
6、SIVmac239直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+和CD8+细胞绝对数。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
1. 血清学检查阳性。 |
| 医学用途Medical use |
艾滋病研究、艾滋病疫苗药物评价。 |
| 临床表现Clinical manifestation |
1、SIVmac239直肠感染恒河猴血浆病毒载量结果
SIVmac239感染10次之后，恒河猴G0101R-G0108R均已被感染，血浆病毒RNA载量和载量峰值的时间点各不相同。其中，G0103R，G0107R和G0108R这三只猴在感染后病毒载量直接到达高峰，并出现典型的疾病进程，其中G0103R第14天时达到高峰，峰值约106copies/mL，G0107R和G0108R在感染后第28天达到峰值，这三只猴的病毒载量出现相对较早；G0102R，G0104R和G0105R在感染后2-3周病毒载量呈现低拷贝复制状态，波动在102-103 copies/mL之间，而到40天时，病毒载量才达到高峰，上升到106copies/mL；而G0101R和G0106R的病毒载量一直处于临界值，时有时无，从未达到病毒载量的高峰。根据病毒载量的情况及变化规律（图1）。8只恒河猴可分成三组类型：G0101R和G0106R划分为第一组（典型疾病进展型），将G0102R，G0104R和G0105R划分为第二组（延迟进展型），将G0103R，G0107R和G0108R划分为第三组（隐匿型）。
图1 SIVmac239小剂量多次直肠途径感染中国恒河猴血浆病毒载量结果
Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectally with repeated low dose of SIVmac239
2、SIVmac239直肠感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值结果
外周血中CD4+/CD8+的比例变化除G0103R在第88天时出现明显倒置外，其余恒河猴外周血中CD4+/CD8+的比例在整个感染过程中均未出现倒置现象。G0101R和G0106R猴CD4+/CD8+的比例变化在感染后46天时呈现逐渐增加的趋势，但到感染后第88天时，其比例又恢复到接近感染前的水平，波动在1.4-2.4之间。G0102R，G0104R和G0105R猴CD4+/CD8+的比例在感染后第7天时有所增加，随后一直平稳维持在1.5-2.5之间，到第88天时，其比例有所下降，并出现CD4+/CD8+比例倒置现象，其比例约为0.9左右。G0103R，G0107R和G0108R猴以G0103R变化最明显，其比例呈现逐渐下降的趋势，到第88天时，CD4+/CD8+比例下降到0.39，其余两只猴未出现CD4+/CD8+比例倒置现象，波动在1.1-1.3之间（图2）。
图2 SIVmac239小剂量多次直肠途径感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+比值
Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectally with repeated low dose of SIVmac239
3、SIVmac239直肠感染恒河猴CD4+和CD8+细胞绝对数结果
感染猴外周血中CD4+T淋巴细胞绝对数在SIVmac239感染前后变化幅度不大，只是变化趋势有所不同，G0101R和G0106R猴CD4+T淋巴细胞绝对数在感染第88天时略高于感染前的水平，其中以G0101R增加最显著，由感染前的1.5×103个/uL增加到感染后第88天时的2.1×103个/uL。G0103R，G0107R和G0108R猴感染前的CD4+T淋巴细胞绝对数低于其他5只，波动在600-800个/uL之间，到感染后第14天时，有所下降，随后有所恢复，到第88天时，CD4+T淋巴细胞绝对数略低于感染前的水平。G0102R，G0104R和G0105R猴的CD4+T淋巴细胞绝对数也同样在感染后第14天出现下降，21天时又有所增高，但与感染前相比，到感染后第88天时，这三只猴的CD4+T淋巴细胞绝对数均略低于感染前的水平（图3A）。
SIVmac239感染后，G0101R和G0106R猴CD8+T淋巴细胞绝对数的波动较为平稳，未出现显著的降低或者升高的现象。G0103R，G0107R和G0108R猴CD8+T淋巴细胞绝对数的变化也相对稳定，在感染前其绝对数的水平也相对较低，但是G0103R的绝对数在第14天下降之后明显增高，可达474个/uL，随后一直维持在此水平上波动。G0102R，G0104R和G0105R猴的CD8+T淋巴细胞绝对数在感染后第14天时下降最为显著，最低可达340个/uL，随后有所恢复，到第88天时，其绝对数变化接近感染前的水平（图3B）。
图3 SIVmac239小剂量多次直肠途径感染恒河猴外周血CD4+和CD8+细胞绝对数变化
Fig.3 The CD4+ cell counts and CD8+ cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infecte intrarectally with repeated low dose of SIVmac239 |
| 病理表现Pathology |
SIVmac239感染10次之后，恒河猴G0101R-G0108R均已被感染，血浆病毒RNA载量和载量峰值的时间点各不相同。 |
| 发病天数Days of onset |
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| 发病过程Pathogenesis process |
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| 临床诊断Clinical diagnosis |
血清学检测阳性。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
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| 保藏单位Preservation unit |
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| 参考文献Reference |
1.刘浩，刘强，丛喆，王卫，乔红伟，陈志伟，魏强. 模拟HIV性传播特点的SIVmac239恒河猴直肠粘膜感染[J]. 中国实验动物学报. 2010，18（2）：100-104.
2.Chen S, Lai C, Wu X, Lu Y, Han D, Guo W, Fu L, Andrieu JM, Lu W. Variability of bio-clinical parameters in Chinese-origin Rhesus macaques infected with simian immunodeficiency virus: a nonhuman primate AIDS model. PLoS One. 2011;6(8):e23177.
3.高锡强，傅春燕，薛婧，王卫，陈霆，魏强. SIVmac239 病毒经不同途径感染恒河猴急性期CD4 + T细胞数量与其细胞表面CD95表达量的变化关系[J]. 中国比较医学杂志. 2012. 22(10): 14-18.
4.王卫，刘克剑，吴芳新，丛喆，陈霆，魏强。猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)多次直肠暴露对机体细胞免疫的影响。中国比较医学杂志，2014,24(8):1-6. Effect of repeated rectal exposure of low-dose simian immunodeficiency virus on the systemic cellular immunity in monkeys. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE. 2014,24(8): 1-6. |
| 录入/更新时间Date |
12-03-20 |
| 备注Remarks |
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