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| 品系名称 | Lgr5-EGFP-IRES-creERT2基因敲入工具鼠 |
|---|---|
| 编号Number | |
| 英文名称English name | B6.129P2-Lgr5tm1(cre/ERT2)Cle/J |
| 常用名称Common name | Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 |
| 基因信息Genetic information | |
| 疾病名称Disease name | |
| 制作类型Production type | 基因敲入 |
| 制作方法Making method |
EGFP-IRES-creERT2 载体设计时，将增强绿色荧光蛋白序列 (EGFP)、内部核糖体进入位点 (IRES)、CreERT2 融合基因（Cre-ERT2；融合至人雌激素受体配体结合域三重突变 G400V/M543A/L544A 的 Cre 重组酶）、polyA 信号和 loxP 侧翼的 neo 盒插入靶基因的第一个 ATG 密码子。通过电穿孔将此载体插入源自雄性 129P2/OlaHsd 的 IB10/E14IB10 胚胎干 (ES) 细胞中的靶基因内。将正确靶向的 ES 细胞注射到受体囊胚中，并将嵌合雄鼠与 C57BL/6 雌鼠杂交。然后将突变小鼠与 EIIa-cre 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003724 https://www.jax.org/strain/003724 ）杂交，以去除 neo 选择盒。捐赠者报告，将获得的 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠（去除 floxed-neo）回交至 C57BL/6J（见下文的 SNP 说明）至少 4 代。接下来，将 Lgr5-EGFP-IRES-creERT2 小鼠与 Rosa26-lacZ 小鼠（C57BL/6 遗传背景，见品系货号 003474 https://www.jax.org/strain/003474 ）杂交。将具有两种突变的小鼠进一步回交超过 6 代。在到达杰克森实验室后，将小鼠与 C57BL/6J 近交小鼠（品系货号 000664 https://www.jax.org/strain/000664 ）杂交至少一代以建立种群。将小鼠选择性杂交以去除 Rosa26-lacZ 等位基因。 |
| 背景品系Background lines | C57BL/6 |
| 表型特征Phenotypic characteristics |
虽然纯合小鼠不能存活，但是 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2 杂合小鼠可存活且可繁育；携带 Lgr5-EGFP-IRES-CreERT2“基因敲入”等位基因，破坏了内源 Lgr5 (Gpr49) 基因功能，并表达了来自 Lgr5 启动子/增强子驱动的 EGFP 和 CreERT2 融合蛋白。在小肠隐窝基底柱状细胞（也称为小肠干细胞）和结肠中观察到 EGFP 荧光。Cre-ERT2 融合基因活性可诱导；仅在给予他莫昔芬后的相同细胞中观察到。也可在其他表达 Lgr5 的细胞类型（包括癌前小鼠腺瘤、结肠癌细胞、胃腺上皮干细胞、乳腺基底上皮层干细胞和毛囊干细胞）中观察到 EGFP 或可诱导的 CreERT2 表达。 |
| 引物序列Primer sequence | |
| 应用领域Application area | CreERT; 他莫昔芬（tamoxifen）; loxP ;小肠（small intestine） |
| 繁殖方式Mode of reproduction | |
| 保存状态Save state | |
| 提供单位Provide unit | 杰克森实验室 |
| 提供者Provider | Hubrecht Institute |
| 参考文献Reference | Barker N; van Es JH; Kuipers J; Kujala P; van den Born M; Cozijnsen M; Haegebarth A; Korving J; Begthel H; Peters PJ; Clevers H. 2007. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5. Nature 449(7165):1003-7 PubMed: 17934449 MGI: J:12712 |
| 录入/更新时间Date | 2022.5.19 |
| 备注Remarks |
