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| 品系名称 | Isca1神经元特异敲除大鼠 |
|---|---|
| 编号Number | |
| 英文名称English name | SD.Isca1(tm-NeuN-cre)-GC/ILAS |
| 常用名称Common name | |
| 基因信息Genetic information | Isca1 |
| 疾病名称Disease name | 多发性线粒体功能障碍综合征 |
| 制作类型Production type | 基因敲除 |
| 制作方法Making method |
在本实验中，我们利用Isca1flox/flox大鼠和NeuN-Cre大鼠进行杂交，繁育得到Isca1flox/flox-NeuN-Cre大鼠。NeuN-Cre大鼠是将Cre酶的编码序列插入到NeuN基因的下游，使Cre酶与NeuN蛋白共用同一套启动子并有同样的表达模式，而NeuN为神经元特异表达的蛋白，因此只有神经元能转录翻译Cre酶。Cre酶能识别基因组中34bp的flox序列，特异性剪切两个flox序列之间的DNA序列。Isca1flox/flox大鼠是在Isca1基因第三外显子的两端插入flox序列，因此当与NeuN-Cre大鼠杂交后，神经元中的Cre酶会特异性剪切Isca1基因的第三外显子，导致Isca1基因的特异性敲除。 Isca1 flox/+由本实验室在前期构建。NeuN-Cre大鼠来源于国家人类疾病动物模型资源库，编号为CSTR:16397.09.0L02000541。  |
| 背景品系Background lines | SD大鼠 |
| 表型特征Phenotypic characteristics |
1.ISCA1蛋白表达和敲除大鼠的鉴定 为了验证特异性敲除模型构建成功，我们选取6周龄敲除大鼠和WT大鼠，分别提取全脑蛋白和制作石蜡切片，利用Western Blot和免疫组化验证在全脑中ISCA1的缺失和缺失的具体定位。在Western Blot实验中，验证ISCA1敲除效率为72.05%±6.94%，实现了ISCA1在神经系统中的特异性敲除，并通过免疫组化验证神经元胞体中的ISCA1明显减少，说明特异性敲除大鼠模型建立成功。 敲除大鼠从五周龄开始出现死亡，在出生第九周后全部死亡，大多数大鼠在八周龄时死亡，对照的WT大鼠在十周内全部存活。说明神经系统中缺少ISCA1蛋白的大鼠会导致致死性的神经系统疾病。  返回顶部 |
