| 制作方法Making method |
1. 诱导剂准备
氧嗪酸钾，Sigma 公司产品，纯度≥97%。溶于羧甲基纤维素钠，制备成100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg / kg 和 600mg / kg 剂量。
2. 实验动物
SPF级 ICＲ小鼠160 只，雌雄各半，18~22g,饲养于屏障环境。
3. 给药
对照组腹腔注射 1%CMC-Na，实验组给药方案分别如下: 600mg / kg 剂量氧嗪酸钾组、47.2mg/kg 剂量别嘌醇组、600mg/kg 氧嗪酸钾 + 47.2mg/kg别嘌醇组600mg/kg 氧嗪酸钾 + 6.3mg/kg 别嘌醇组。
4. 模型分析指标
（1） 尿酸水平检测
给药后 1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血 0.4ml于 1.5ml EP 管中，置于4℃ 冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min 离心15min，取血清，磷钨酸法测定尿酸值。
（2） 小鼠肝脏黄嘌呤氧化酶 / 脱氢酶 ( XDH / XO) mＲNA 表达水平检测
8小时后处死小鼠，取肝脏，提取RNA，逆转录为cDNA,设计引物F:5 ＇-TGATGCAAGCTGGTGGTG-3 ＇;R:5 ＇-GCCACTGAGGTCAGTTCAAGGA -3＇实时荧光定量法检测: 首先将小鼠肝脏 c DNA 以 10 为稀释因子，做 5 个梯度稀释，然后分别做 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因的标准曲线，再根据标准曲线的扩增效率对基因的表达效率进行检测。具体操作方法如下: 分别加 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因上、下游引物各 1μL( 10p) ，再分别加 SYBＲ Premix Ex Taq II ( Tli ＲNase H Plus) 12．5μL 及灭菌去离子水 9． 5μL、c DNA 1μL，总体积 25μL，实时荧光定量 PCＲ 设无模板对照反应条件为: 94℃ 预变性 30s，94℃变性 5s、59℃ 退火 30s、40 个循环，其中 59℃ 到 94℃ 每 5s 采集一次荧光。反应完成后根据荧光信号的数据，使用 CFXManager软件计算出 XDH/XO mＲNA 表达的差异。
|
当前位置：
