| 中文名称Chinese name
|
辐射诱导Fox3a缺陷小鼠造血系统损伤模型 |
| 编号Model number |
|
| 英文名称English name |
Irradiatoin-induced hematopoietic injury model of Fox3a deficient mouse |
| 物种Species name |
|
| 品系Strain name |
|
| 人类疾病Human diseases |
|
| 传染性Infectivity |
否 |
| 微生物Microorganism |
|
| 类别Category |
诱发性动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
X射线 |
| 制作方法Making method |
1. 实验动物 FOXO3A基因敲除FVB/N小鼠（FOXO3A+/-）由中国医学科学院医学实验动物研究所张连峰教授课题组保存（store number：016132-UCD）; FOXO3A基因敲除C57BL/6J小鼠（FOXO3A+/-）由中国医学科学院医学实验动物研究所张连峰教授课题组通过CRISPR/Cas9基因编辑技术制备。实验方案通过中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物管理和使用委员会（IACUC）审批，IACUC号为：MAM17002。2. 小鼠分组和照射 小鼠均分为四组：野生型小鼠对照组（WT组），FOXO3A-/-小鼠对照组（FOXO3A-/-组），野生型小鼠照射组（WT+IR）, FOXO3A-/-小鼠照射组（ FOXO3A-/-+IR），分别接受假照射和4Gy X-线全身照射（TBI），照射剂量率为0.9Gy/min，照射设备为X-RAD 225高能量生物学X射线辐照仪（美国）。接受TBI小鼠于SPF级动物房中饲养，每天观察记录体重变化。3. 小鼠外周血常规检测 小鼠TBI 后14d小鼠眼眶静脉丛取血，抗凝管收集外周血，DX120全自动血液分析仪（ABX PENTRA）测定外周血中白细胞数（WBC）、红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）和血小板（PLT）等指标。4. 小鼠胸腺、脾脏指数测定 小鼠TBI 后14d称重安乐死，取胸腺、脾脏并称重，计算脏器指数，脏器指数=脏器(mg)/体重(g)。5. 骨髓细胞有核细胞计数 小鼠TBI后14d，无菌分离小鼠胫骨和股骨，剔除肌肉，注射器冲洗骨髓细胞，过滤后采用KOVA一次性计数板，显微镜下人工骨髓计数。最终细胞计数结果以每只小鼠×107个细胞表示。6. 小鼠骨髓细胞表型分析 小鼠TBI后14d，收集骨髓细胞至流式管，加入Biotin标记的混合一抗抗体（CD4、CD8、B220、Ter119、Gr1、cd11b），孵育后洗涤并重悬细胞，加入混合二抗抗体streptavidin（percp标记）、scal-1（PE标记）、ckit（APC标记），孵育后洗涤并重悬细胞。FACS Aria TMⅡ流式细胞仪（BD Bioscience）检测HPCs（Lin− c-kit+ Sca1−or LSK- cells），HSCs（Lin− c-kit+ Sca1+or LSK+ cells）[19]在骨髓中所占的比例。7. 粒细胞巨噬细胞集落形成单位（Clony forming unit-granulocyte and macrophage，CFU-GM）测定 小鼠TBI 后14d安乐死，分离骨髓细胞并分组混合，每组接种40000个细胞到分装好的2ml的3534培养基中。按操作说明进行后续接种。接种细胞培养5~7d后于倒置显微镜下读取CFU-GM数，细胞数≥50为阳性集落。结果换算为每105个BMNCs中CFU-GM的个数。8. 统计学方法 对数据进行分析方差分析（ANOVA）。组间方差分析比较时，使用用于多重比较的the Student–Newman–Keuls test。两组计量资料比较时使用非配对Student's t 检验，差异P<0.05时认为具有统计学意义。所有这些分析使用GraphPad Prism软件(San Diego，CA，USA)。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
外周血白细胞计数降低；骨髓细胞增殖能力改变。
|
| 医学用途Medical use |
用于造血免疫细胞损伤机制研究、防护剂及治疗药物筛选。 |
| 临床表现Clinical manifestation |
与人类辐射损伤后骨髓抑制反应性一致。 |
| 病理表现Pathology |
造血免疫细胞损伤性改变。 |
| 发病天数Days of onset |
|
| 发病过程Pathogenesis process |
|
| 临床诊断Clinical diagnosis |
1. 外周血白细胞降低或全血降低；2. 骨髓细胞减少，增殖功能改变。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
|
| 保藏单位Preservation unit |
|
| 参考文献Reference |
|
| 录入/更新时间Date |
12-03-20 |
| 备注Remarks |
|
当前位置：
