| 中文名称Chinese name
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肠道病毒EV71腹腔注射感染STAT1基因敲除小鼠模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
Enterovirus EV71 intraperitoneally infected STAT1 knockout mouse model |
| 物种Species name |
小鼠
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| 品系Strain name |
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| 人类疾病Human diseases |
手足口病 |
| 传染性Infectivity |
EV71病毒对人类具有传染性，属于三类病原体，主要通过粪-口途径传播 |
| 微生物Microorganism |
肠道病毒71型（EV71）
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| 类别Category |
传染性疾病动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
EV71病毒腹腔注射感染10日龄STAT1基因敲除小鼠 |
| 制作方法Making method |
1. 病毒准备：EV71病毒为FY0805毒株经小鼠传代所获得的适应株MP10（GenBank accession number:HQ712020）。组织病毒培养操作：将EV71病毒以肌肉点注方式感染10日龄ICR乳鼠，三天后取肌肉组织置于适量PBS中研磨均匀，3000rpm离心30min，上清即为病毒液，分装后置于-80℃冰箱保存。2. 实验动物：采用SPF级10日龄野生型C57BL/6小鼠、纯合子STAT-/- C57BL/6小鼠和杂合子STAT+/- C57BL/6小鼠，母鼠自然哺乳，在ABSL-2实验室独立饲养。EV71动物模型建立实验通过IACUC审核，符合动物实验要求。3. 病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即病毒滴度为1. 0×108 TCID50/mL的EV71病毒，将病毒腹腔注射感染小鼠，感染剂量为100μl。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
STAT1基因敲除小鼠（STAT1-/-）的背景品系为C57BL/6，毛色黑色，具有C57BL/6品系小鼠的生物学特征。10日龄STAT1基因敲除小鼠对EV71感染敏感，由于EV71对小鼠肌组织具有嗜性，乳鼠感染后表现出竖毛、单肢瘫痪、双肢瘫痪、甚至死亡的临床表现，属于手足口病部分疾病模型动物。 |
| 医学用途Medical use |
利用STAT1敲除的C57BL/6小鼠模型，在整体动物水平探讨STAT1基因对EV71病毒复制的影响，为减少病毒复制及控制感染症状等治疗提供可靠的数据基础。 |
| 临床表现Clinical manifestation |
EV71感染后，WT小鼠在感染后6天出现死亡，而STAT1-/-小鼠在感染4天后出现死亡情况，死亡时间提前。感染6日后STAT1-/-小鼠全部死亡，生存率为零，与其他组小鼠相比有明显差异。对感染EV71后小鼠出现的症状表现进行评分并统计发现，STAT1-/-小鼠在感染3天后症状急剧恶化，与其他组相比症状表现更为严重。伴随症状加重，STAT1-/-小鼠在感染3日后的体重明显减轻，其他两组小鼠体重仍逐渐增加。感染3天后，对不同小鼠的后肢肌肉进行病毒载量检测，结果显示：3组动物肌肉的病毒载量都达到了108copies/mg；而STAT1 -/-小鼠的肌肉病毒载量明显高于WT组与STAT1+/-组，在统计学意义上具有显著性差异（P＜0.01）。说明EV71病毒在肌肉组织中大量复制扩增。 |
| 病理表现Pathology |
对EV71抗原荧光染色结果显示，EV71抗原在小鼠后肢肌肉中有聚集现象，与WT组相比，这种现象在STAT1-/-小鼠中更加明显（图3B），据此推测EV71在STAT-/-小鼠后肢肌肉中复制水平增高。与WT组及STAT1+/-组相比，STAT1-/-小鼠表现出大片炎性细胞浸润与组织纤维化（图3A），组织损伤情况更为严重。 |
| 发病天数Days of onset |
EV71感染后，所有小鼠都在感染后第4天出现临床症状，而WT小鼠在感染后6天出现死亡，STAT1-/-小鼠在感染4天后出现死亡情况，死亡时间提前，且于感染6日后全部死亡，生存率为零，与其他组小鼠相比有明显差异。与之相对的，最终观察期结束时WT的存活率为40%，而杂合子STAT1+/-存活率为30%。 |
| 发病过程Pathogenesis process |
动物经腹腔注射感染EV71病毒后，通过肠系膜侵入局部淋巴组织中继续增殖并释放入血导致第一次病毒血症。病毒随血液传播接触到正常靶细胞。病毒表面的VP1蛋白与靶细胞表面特异性受体结合，完成吸附过程，其基因组RNA进入胞质。之后，病毒以其正链RNA作为模板，合成互补的负链RNA，又以负链RNA为模板合成病毒正链RNA，从而得到大量病毒RNA，进入子代病毒颗粒组装阶段。通过转录、翻译，复制出二代病毒，再次释放入血形成第二次病毒血症并引起临床症状。 |
| 临床诊断Clinical diagnosis |
根据感染后动物血液和组织中病原学EV71核酸检测阳性结果，以及表现出的体重减轻、瘫痪、死亡等手足口病原动物感染临床症状，结合后肢肌肉组织病理学改变情况，确定10日龄STAT1基因敲除乳鼠腹腔注射EV71病毒后得到了手足口病EV71感染模型，属于手足口病的部分疾病模型。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
小鼠腹腔感染EV71病毒后表现出典型的症状，即出现后肢单肢或双肢瘫痪，直至死亡；在感染动物血液和肌肉组织中可检测到高病毒载量的EV71病毒，表明病毒在肌肉组织中大量扩增。病理检测可见后肢肌肉组织明显病变，说明病毒对肌肉组织产生损伤，与临床症状相一致。而纯合子STAT1-/-的炎症严重程度最强，杂合子STAT1+/-次之。进一步的组织免疫荧光分析同样发现纯合子STAT1-/-中EV71 VP1的分布最多，结果与病毒载量、病理分析一致。由于STAT1介导的JAK/STAT 信号通路在EV71病毒感染过程中可以发挥抗病毒的作用，因此STAT1敲除小鼠表现出了对EV71感染的高敏感性。 |
| 保藏单位Preservation unit |
中国医学科学院医学实验动物研究所 |
| 参考文献Reference |
李光超，张倩，武婧，赵彬彬，陈鑫，秦川，刘江宁。STAT1 基因敲除提高小鼠对 EV71 病毒的敏感性研究。中国医药导报，2017，14（15）：14-17. |
| 录入/更新时间Date |
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| 备注Remarks |
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