| 中文名称Chinese name
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手足口病柯萨奇病毒A6型腹腔注射感染小鼠模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
Coxsackievirus A6 intraperitoneally infected mice model_ |
| 物种Species name |
小鼠
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| 品系Strain name |
ICR
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| 人类疾病Human diseases |
手足口病 |
| 传染性Infectivity |
CA6病毒对人类具有传染性，属于三类病原体，主要通过粪-口途径传播 |
| 微生物Microorganism |
柯萨奇病毒
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| 类别Category |
传染性疾病动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
CA6病毒腹腔注射感染7日龄ICR小鼠 |
| 制作方法Making method |
1. 病毒准备：CA6病毒(购自ATCC，Gdula毒株，GenBank:AY421764.1)，病毒在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、扩增，并采用反复冻融法释放病毒，离心富集病毒。（1）细胞病毒培养操作：RD细胞经常规传代培养接种到T75细胞培养瓶，培养至融合度约80%；感染前弃去原培养基，细胞用含2%双抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入无血清DMEM培养基。接种适量的CA6病毒后，置于37℃ 5% CO2培养箱孵育1~2h；之后弃去无血清培养基，加入完全培养基继续培养。接种病毒后2~3d细胞病变CPE达到+++～++++，将T75细胞瓶置封口袋中，-80℃超低温冰箱冻化3次。然后将培养液转移至50mL离心管中，4℃ 2000rpm离心20min，沉淀细胞碎片。吸取病毒上清，分装后冻存，并测定病毒滴度TICD50。（2）组织病毒培养操作：将CA6病毒以肌肉点注方式感染10日龄ICR乳鼠，三天后取肌肉组织置于适量PBS中研磨均匀，3000rpm离心30min，上清即为病毒液，分装后置于-80℃冰箱保存。2. 实验动物：采用SPF级7日龄ICR小鼠乳鼠，母鼠自然哺乳，在ABSL-2实验室独立饲养。CA6动物模型建立实验通过IACUC审核，符合动物实验要求。3. 病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即2X105 TCID50 CA6病毒，将病毒经腹腔注射（i.p.）途径感染小鼠，感染剂量为100μl。对照组注射同等量的PBS。3. 病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即107 TCID50 CA10病毒，将病毒经灌胃途径感染小鼠，感染剂量为100μl。对照组灌胃同等量的PBS。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
ICR小鼠毛色白化，是国际通用的封闭群小鼠。7日龄ICR乳鼠对手足口病原较为敏感，由于CA6病毒具有嗜肌性，乳鼠感染后常表现出竖毛、单肢瘫痪、双肢瘫痪、甚至死亡的临床表现，属于手足口病部分疾病模型动物。 |
| 医学用途Medical use |
用于CA6病毒自然感染、发病机制研究，以及病毒疫苗研制和抗病毒药物的药效学研究 |
| 临床表现Clinical manifestation |
在临床表现及临床评分方面，7日龄小鼠在感染病毒后3 dpi开始出现嗜睡、精神萎靡、消瘦后肢瘫痪等症状，最终全部死亡。感染CA6病毒的乳鼠均未出现皮肤出疹，在6 dpi时平均临床评分为4.7分。在体重变化方面，7日龄小鼠通过i.p.感染CA6病毒后约在3 dpi开始出现体重下降。经感染后的小鼠在6 dpi体重相对于对照组下降了3.3 mg（41.5%），在6 dpi感染组体重均显著低于阴性对照组（P < 0.05）。7日龄ICR小鼠经i.p.感染CA6后，肌肉组织中病毒载量呈现出随感染时间的增加而增多的趋势。而在其他组织中，病毒载量呈现出先增多后降低的趋势；无论是在3 dpi还是5 dpi，肌肉中病毒载量均远高于其他组织。在3 dpi时，盲肠中病毒载量最低，其均值约为8.9×104copies/mg，在5dpi时，小肠中病毒载量最低，其均值约为2.1×104copies/mg。 |
| 病理表现Pathology |
通过H&E染色对经腹腔注射感染CA6的7日龄小鼠的骨骼肌、胸腺、心脏、肺、肝、脾、肾、小肠、脑组织进行病理学检查，发现感染5天后小鼠全身多脏器发生损伤和炎症反应。7日龄ICR小鼠感染5天后肢肌肉出现了严重的病理改变，表现为炎细胞浸润、骨骼肌细胞变性坏死、间质水肿等。胸腺中出现胸腺皮质萎缩、淋巴细胞减少等病理改变。在小鼠的心脏组织中，出现了心肌水肿、空泡样变的病理损伤。小鼠脾脏出现髓外造血、白髓萎缩的病理改变。脑组织的病理结果显示，小鼠在感染5天后出现局部神经元周围和网状神经毡可见空泡、尼氏体边集的病理损伤。其他组织并未见到明显病变。 |
| 发病天数Days of onset |
ICR 7日龄小鼠感染CA6病毒后第3天出现轻度症状，到感染后第4天出现实验小鼠死亡，此后病症持续加重、临床评分持续升高，感染后第7天所有动物均死亡。 |
| 发病过程Pathogenesis process |
动物经腹腔注射感染CA6病毒后，通过肠系膜侵入局部淋巴组织中继续增殖并释放入血导致第一次病毒血症。病毒随血液传播接触到正常靶细胞。病毒表面的VP1蛋白与靶细胞表面特异性受体结合，完成吸附过程，其基因组RNA进入胞质。之后，病毒以其正链RNA作为模板，合成互补的负链RNA，又以负链RNA为模板合成病毒正链RNA，从而得到大量病毒RNA，进入子代病毒颗粒组装阶段。通过转录、翻译，复制出二代病毒，再次释放入血形成第二次病毒血症并引起临床症状。 |
| 临床诊断Clinical diagnosis |
根据感染后动物血液和组织中病原学CA6核酸检测阳性结果，以及表现出的体重下降、瘫痪和死亡等手足口病原动物感染临床症状，结合后肢肌肉组织病理学改变情况，确定7日龄ICR乳鼠腹腔注射CA6病毒后得到了手足口病CA6感染模型，属于手足口病的部分疾病模型。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
小鼠腹腔感染CA6病毒后表现出典型的症状，即出现后肢单肢或双肢瘫痪，直至死亡；在感染动物血液和肌肉组织中可检测到高病毒载量的CA6病毒，表明病毒在血液和组织中大量扩增。病理检测可见后肢肌肉组织明显病变，说明病毒对肌肉组织产生损伤，与临床症状相一致。 |
| 保藏单位Preservation unit |
中国医学科学院医学实验动物研究所 |
| 参考文献Reference |
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| 录入/更新时间Date |
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| 备注Remarks |
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当前位置：
