| 中文摘要Abstract in Chinese |
为研究绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(Envelope,env)对NIH3T3细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)增殖的影响,构建pCMV-dR8.91-JSRV-env慢病毒过表达载体并感染NIH3T3细胞.将J SR V-env基因连接红色荧光慢病毒报告载体pCMV-dR8.91,基因测序正确后将载体命名为pCMV-dR8.91-JSRV-env.将pCMV-dR8.91-JSRV-env重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞包装产生JSRV-env重组慢病毒.将重组慢病毒悬液利用超速离心沉淀法浓缩,real-time PCR测定病毒滴度.浓缩病毒转导NIH3T3细胞72 h后,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况.结果 显示:env同源重组入pCMV-dR8.91载体,测序结果与预期序列一致;pCMV-dR8.91-JSRV-env与包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞72 h,real-time PCR验证JSRV-env过表达极显著(P＜0.01),JSRV-env重组慢病毒平均滴度为2.99×108 IU/mL;MTT分析显示10 μg JSR-env慢病毒感染NIH3T3细胞72 h显著促进NIH3T3细胞增殖(P＜0.05).综上,成功构建了JSR V-env慢病毒过表达载体,证实J SR V-env能够促进NIH3T3细胞增殖. |
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