| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA). 方法 以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法.分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及105、104、103、102、10个拷贝/μl的pMD19-T (Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性.采用优化后的mRAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证mRAA方法的可靠性和实用性. 结果 建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp.mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl.mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性.mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致. 结论 建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好. |
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