| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的 研究从大肠埃希菌宿主提取基因工程RNA同时去除内毒素的条件.方法 将串联的小鼠短散布核元件(short interspersed nuclear elements,SINE)B1插入pET-28a(pET)构建pET-B1×16反序质粒(pET-B1 as),转化大肠埃希菌BL21(DE3),获得pET-B1 as-DE3菌.用TRlzol法、SDS-热酚法、SDS-NaCl离心法和SDS-NaCl过滤法从pET-B1as-DE3菌制备基因工程RNA,Triton X-114相分离法进一步去除内毒素,检测制备的RNA中内毒素含量及RNA产量、纯度、完整性,并进行小鼠体内毒性试验和家兔热源试验.结果 TRlzol法制备的RNA产量低;SDS-热酚法制备的RNA中内毒素含量高;SDS-NaCl过滤法去除内毒素的效果优于SDS-NaCl离心法,同时具有较高的RNA产量及较好的RNA完整性.小鼠静脉注射用SDS-热酚法和SDS-NaCl过滤法制备的RNA,前者引起小鼠不良反应,后者未引起小鼠不良反应.用Triton X-114相分离能进一步去除由SDS-NaCl过滤法制备的RNA中的内毒素,家兔热源试验证明SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备的RNA,其热原符合动物体内试验要求.结论 建立了用SDS-NaCl过滤法联合Triton X-114相分离法制备基因工程RNA的方法,可有效去除RNA中污染的内毒素. |
当前位置：
