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背景:研究表明,Sonic Hedgehog(Shh)在小鼠脊索细胞内有表达,India Hedgehog(Ihh)主要在小鼠胚胎椎体的软骨样细胞以及后期形成的终板中表达.但关于Shh以及Ihh在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达情况并不清楚.目的:探究Shh和Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达.方法:将雄性的Shh-CreERT2;R26-mTmG/+小鼠与雌性R26-mTmG/+小鼠进行交配,获取不同时期(E8.5,E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,注射10 g/L的他莫昔芬10μL/g.当小鼠胚胎处于P0时,取小鼠胚胎椎间盘组织进行基因型鉴定;同时将雄性的C57BL/6小鼠与雌性的C57BL/6小鼠进行交配,获取不同时期(E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,取小鼠胚胎椎间盘组织进行分析.通过免疫荧光法检测Shh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达;免疫组织化学法检测Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达.所有涉及动物的相关实验均获得苏州大学动物伦理委员会的批准.结果与结论:①经PCR扩增筛选出基因型为Shh-CreERT2;R26-mTmG/+小鼠胚胎;②免疫荧光染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Shh表达水平逐渐降低;③免疫组织化学染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Ihh表达水平逐渐升高;④结果表明Shh和Ihh在椎间盘形成过程中均发挥调控作用,在一定程度上为研究椎间盘退变的分子机制奠定基础. |
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