| 中文摘要Abstract in Chinese |
目的:探讨shRNA靶向血管生成素2(Ang2)基因沉默联合奥沙利铂对子宫内膜癌(endometrial canc-er,EC)生长的抑制作用.方法:设计Ang2特异性shRNA,构建携带Ang2-shRNA的pRNAT-CMV3.2-Neo质粒和阴性对照pRNAT-CMV3.2-Neo-neg质粒,并构建阳性和阴性质粒的稳转Ishikawa细胞系.使用未进行任何处理的Ishikawa细胞系、携带阳性和阴性质粒的稳转Ishikawa细胞系分5组进行细胞学实验,分别为生理盐水组、奥沙利铂组、空载质粒组、Ang2敲低组、Ang2敲低联合奥沙利铂组.采用qRT-PCR、蛋白质印迹法检测各组细胞中Ang2 mRNA和蛋白的表达,采用细胞凋亡、侵袭实验检测各组细胞生物学行为的变化.利用上述细胞系建立裸鼠移植瘤模型,分5组(同细胞分组)给予不同的试剂干预,观察肿瘤生长情况,测量移植瘤体积,计算肿瘤生长抑制率;使用免疫组织化学方法检测各组瘤体内vWF蛋白,测算微血管密度;采用qRT-PCR、蛋白质印迹法检测瘤体组织Ang2 mRNA和蛋白的表达.结果:(1)5组Ishikawa细胞Ang2表达检测:奥沙利铂组与生理盐水组比较Ang2 mRNA和蛋白表达分别降低了21.8％和22.9％(均P<0.05);而Ang2敲低组、Ang2敲低联合奥沙利铂组与空载质粒组相比,Ang2 mRNA含量分别降低了76.54％、80.24％(均P<0.001),Ang2蛋白表达分别降低60.79％、65.09％(均P<0.001),差异均具有统计学意义.(2)Ishikawa细胞行为学实验:奥沙利铂组、Ang2敲低组、Ang2敲低联合奥沙利铂组与生理盐水组和空载质粒组相比细胞凋亡数量都有明显增加(均P<0.001),侵袭细胞数量明显减少(均P<0.001).(3)动物实验:Ang2敲低联合奥沙利铂组与奥沙利铂组及Ang2敲低组相比肿瘤体积明显减小(均P<0.001),抑瘤率高达92.46％,微血管密度显著降低(P<0.05或P<0.001).结论:敲低Ang2联合奥沙利铂能更有效地抑制Ishikawa细胞中Ang2的表达,促进Ishikawa细胞凋亡、抑制其侵袭能力,抑制移植瘤的生长,减少肿瘤血管的生成. |
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