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目的 观察复方七芍降压片对TNF-α 诱导的与平滑肌细胞共培养的血管内皮细胞中炎症因子与AP-1、MCP-1蛋白表达情况,探讨复方七芍降压片抑制血管重塑的作用机制.方法 利用炎症因子TNF-α 联合血管内皮细胞和血管平滑肌细胞共培养体系构建高血压炎症环境.将共培养好的细胞随机分为7组,即正常对照组(A)、模型组(B)、空白血清对照组(C)、MRS2578组(D)、厄贝沙坦片含药血清组(E)、复方七芍降压片含药血清组(F)、MRS2578+复方七芍降压片含药血清组(G).除正常对照组外,其余各组加入炎症因子TNF-α,浓度10 ng/mL;厄贝沙坦片含药血清组、复方七芍降压片含药血清组和MRS2578+复方七芍降压片含药血清组加入10％的含药血清;MRS2578组与MRS2578+复方七芍降压片含药血清组加入10μm的P2Y6受体阻断剂MRS2578;造模与给药干预24 h后,采用CCK8法检测内皮细胞及平滑肌细胞的存活率;采用ELISA法检测培养基上清液中炎症因子IL-8的水平;采用免疫荧光、Western Blot、实时荧光定量法(qPCR)技术检测内皮细胞中AP-1、MCP-1的表达.结果 与正常对照组比较,模型组和空白血清对照组内皮细胞及平滑肌细胞存活率明显降低(P<0.01),IL-8水平明显升高(P<0.01),内皮细胞中AP-1、MCP-1的荧光强度值、灰度值比值、mRNA水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,复方七芍降压片含药血清组内皮细胞及平滑肌细胞存活率明显升高(P<0.01),IL-8水平明显降低(P<0.05),内皮细胞中AP-1、MCP-1荧光强度值、灰度值比值、mRNA水平均明显降低(P<0.01).结论 复方七芍降压片能够改善因炎症因子TNF-α诱导的内皮细胞及平滑肌细胞的存活率,降低AP-1和MCP-1的活性,抑制内皮细胞炎症反应,改善内皮损伤,保护平滑肌细胞正常功能. |
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