野生瑶山亚种树鼩粪便潜在病原细菌的调查及耐药性分析

树鼩是一种新型的实验动物模型,有广泛的应用前景.但目前对广西野生瑶山亚种树鼩肠道细菌的种群分布,携带致病菌的情况仍不十分清楚.因此我们首次开展了广西野生瑶山亚种树鼩粪便可培养细菌的分离与鉴定,结果 从19只瑶山亚种树鼩粪便标本中分离得到35株细菌,经16S rRNA序列分析,共鉴定出7科13属20种细菌,广西野生瑶山亚种树鼩肠道中主要菌群包括大肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、奇异变形杆菌等.此外,为了了解瑶山亚种树鼩肠道细菌对药物的敏感与耐药情况,本研究对分离得到的部分肠道细菌进行药物敏感性实验,瑶山亚种树鼩肠道分离菌对头孢他啶、庆大霉素及左氧氟沙星较敏感,对头孢唑啉及复方新诺明存在较多耐药.这为掌握第一手广西野外捕获的野生瑶山亚种树鼩粪便菌群的多样性和潜在的致病性,为瑶山亚种树鼩的隔离检疫、实验室饲养及常见消化道疾病的防治提供科学依据.

2020

2021/07/20

查看

伊班膦酸钠对卵巢切除所致骨质疏松模型大鼠的影响及机制

背景:双膦酸盐类药物是一种新型骨吸收抑制剂,能有效抑制破骨细胞的活性和功能.目的:观察伊班膦酸钠对骨质疏松大鼠髁突软骨中牙本质基质蛋白1、Caspase3及Bcl-2、Bax表达的影响.方法:将36只雌性大鼠随机分组为假手术组、骨质疏松组及伊班膦酸钠组,每组各12只.假手术组术中不切除卵巢,骨质疏松组和伊班膦酸钠组切除双侧卵巢,术后7d给予伊班膦酸钠组大鼠10 μg/kg/次的伊班膦酸钠,每隔7d腹腔注射1次,90 d后取材.microCT测量各组大鼠骨密度变化;采用甲苯胺蓝染色、TUNEL染色观察髁突软骨变化;免疫组织化学检测牙本质基质蛋白1蛋白表达;Western blot检测Caspase3、Bcl-2、Bax蛋白表达.实验方案经南华医院动物实验伦理委员会批准(批准号为SLXD_201804010).结果 与结论:①与假手术组或伊班膦酸钠组比较,骨质疏松组骨密度值显著降低(P＜0.05);②甲苯胺蓝染色结果,伊班膦酸钠组髁突软骨肥大层明显厚于骨质疏松组;与假手术组或伊班膦酸钠组相比,骨质疏松组大鼠髁突软骨及软骨下骨凋亡细胞数均明显上升(P＜0.05);③与假手术组比较,骨质疏松组TRAP阳性细胞数增多,而经伊班膦酸钠治疗后TRAP阳性细胞数下降(P＜0.05);④骨质疏松组牙本质基质蛋白1蛋白表达较假手术组明显下降,而经伊班膦酸钠治疗后牙本质基质蛋白1蛋白表达上升(P＜0.05);⑤与假手术组相比,骨质疏松组Caspase3、Bax表达明显上调,Bcl-2表达下降,而经伊班膦酸钠治疗后Caspase3、Bax表达水平明显下降,Bcl-2表达水平上调;⑥结果说明,伊班膦酸钠能够抑制骨质疏松状态下髁突软骨细胞凋亡及破骨细胞数量,可能与调控Caspase3、Bcl-2、Bax及牙本质基质蛋白1表达有关.

2020

2021/07/20

查看

骨形态发生蛋白7复合国产多孔钽对骨髓间充质干细胞向软骨分化及功能的影响

背景:结合物理因素与支架材料建立共培养体系并采用细胞因子诱导,成为骨髓间充质干细胞成软骨分化的热点.目的:观察骨形态发生蛋白7复合国产多孔钽对骨髓间充质干细胞软骨向分化的影响.方法:分离培养SD大鼠(由北京华阜康生物提供)骨髓间充质干细胞,分组干预:①实验组加入多孔钽片,对照组不加多孔钽片,培养第5天,鬼笔环肽染色观察多孔钽片表面的细胞生长情况;培养1,3,5,7d,CCK-8法检测细胞增殖;②A组加入软骨细胞诱导液,B组加入软骨细胞诱导液与骨形态发生蛋白7,C组加入国产多孔钽材料与软骨细胞诱导液,D组加入国产多孔钽材料与软骨细胞诱导液和骨形态发生蛋白7,培养第7,14,21天,采用ELISA法检测细胞分泌Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白、基质金属蛋白酶13的水平,Western-blot法检测细胞中Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白、基质金属蛋白酶13的表达.动物实验获得华北理工大学动物实验伦理委员会批准.结果 与结论:①鬼笔环肽染色显示,骨髓间充质干细胞在多孔钽表面及周围生长及增殖良好;②实验组培养3,5d的增殖慢于对照组(P＜0.05),培养1,7d的增殖与对照组无差异(P＞0.05);③培养第7,14,21天时,A-D组Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白质量浓度逐渐升高(P＜0.05).培养第7天时,A-D组基质金属蛋白酶13质量浓度逐渐减少(P＜0.05);培养第14天时,A组高于其余3组(P＜0.05),B、C、D组间比较差异无显著性意义(P＞ 0.05);培养第21天时,4组间比较差异无显著性意义(P＞0.05);④Western-blot检测显示培养第7,14,21天时,A-D组Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白表达逐渐升高(P＜0.05).培养第7天时,A-D组基质金属蛋白酶13蛋白表达逐渐减少(P＜ 0.05);培养第14天时,A组高于C、D组(P＜0.05),B、C组高于D组(P＜ 0.05);培养第21天时,A组高于其余3组(P＜0.05),其余组间比较差异无显著性意义(P＞ 0.05);⑤结果表明,骨形态发生蛋白7复合国产多孔钽可诱导骨髓间充质干细胞软骨向分化,可促进Ⅱ型胶原、SRY型高迁移率族蛋白的表达,抑制基质金属蛋白酶13的表达.

2020

2021/07/20

查看

骨关节炎软骨下骨中视网膜母细胞瘤RB1-诱导卷曲蛋白1的表达及作用

背景:骨关节炎以关节软骨的退变和软骨下骨的重建为主要病理特征.骨关节炎的具体发病机制目前仍未清楚,大部分研究以软骨与软骨下骨为主要切入点,探索疾病过程中的分子机制和信号通路变化,为骨关节炎的诊断与治疗提供新的生物靶点和研究方向.目的:探讨在骨关节炎进程中软骨下骨RB1CC1的表达情况.方法:8周龄C57小鼠随机分为实验组和假手术组,实验组又随机分为4周和8周2个亚组.实验组小鼠行右侧膝关节内侧半月板胫骨韧带切除,游离内侧半月板,诱导骨关节炎;假手术组小鼠则仅切开关节囊而不行内侧韧带切除和半月板游离.实验方案于2017-12-13经南方医科大学第三附属医院动物实验伦理委员会批准,批准号为No.44007200038731.结果 与结论:与假手术组相比,实验组骨关节炎RSI评分均显著升高,关节软骨面Ⅱ型胶原表达降低,软骨下骨中的RB1CC1表达逐渐升高,RB1CC1与成骨相关指标BSP2的表达趋势有一致性;提示随着骨关节炎进程的发展,软骨下骨的RB1CC1表达逐渐增多,可能与促进软骨下骨增生及重塑有关.

2020

2021/07/20

查看

超声引导注射富血小板血浆修复坐骨神经挤压伤

背景:富血小板血浆富含影响肌腱、韧带、肌肉和骨愈合的生长因子,在此基础上,研究人员逐渐认识到富血小板血浆激活后释放的分子可调节周围神经早期炎症、激活许旺细胞、促进巨噬细胞极化及阻止胶原纤维的增生,成为神经功能恢复的关键驱动力.目的:探讨超声引导富血小板血浆注射修复坐骨神经挤压伤的价值.方法:将28只新西兰大白兔(北京隆安动物繁殖中心提供)随机分为4组,每组7只:正常组暴露右侧坐骨神经后直接缝合;对照组建立右侧坐骨神经挤压损伤模型;单频次注射组建立右侧坐骨神经挤压损伤模型,术后24 h于超声引导下在损伤神经周围注射自体富血小板血浆;多频次注射组建立右侧坐骨神经挤压损伤模型,术后24 h于超声引导下在损伤神经周围注射自体富血小板血浆,此后第3,5周各注射1次.术后12周,进行再生神经的组织学、形态学评价及失神经支配肌肉的湿质量恢复与组织学检测.实验经解放军总医院实验动物管理委员会批准(2015-x10-02).结果 与结论:①与对照组比较,单频次与多频次注射组再生轴突NF-200、S100染色累积吸光度值明显升高(P均＜0.05);多频次注射组二者累积吸光度值高于单频次注射组(P均＜0.05),但仍低于正常组(P均＜0.05);②与对照组比较,单频次与多频次注射组有髓神经纤维密度、有髓神经纤维直径及髓鞘厚度明显增加(P均＜0.05);多频次注射组3指标多于单频次注射组(P均＜0.05),但仍低于正常组(P均＜0.05);③与对照组比较,单频次与多频次注射组肌肉湿质量、肌纤维横截面积增加(P均＜0.05);多频次注射组两指标多于单频次注射组(P均＜0.05),但仍少于正常组(P均＜0.05);④结果表明,超声引导自体富血小板血浆多频次注射治疗坐骨神经挤压伤具有良好的效果.

2020

2021/07/20

查看

甲状旁腺激素干预兔下颌骨髁突高位骨折游离复位后的软骨愈合

背景:下颌骨髁突高位骨折常伴有软骨的损伤,同时由于附着于髁突的肌肉发生撕脱而成为游离骨块,如何在加快骨愈合同时加快软骨的愈合一直是临床上面临的困难和挑战.目的:探讨甲状旁腺激素在兔髁突高位骨折游离复位后对髁突软骨愈合的影响.方法:将48只新西兰大耳兔建立髁突高位骨折游离复位固定实验模型,随机分为实验组及对照组,每组24只.术后实验组隔日皮下注射甲状旁腺激素20μg/kg,对照组注射生理盐水1 mL;分别在术后1,2,3,4周时处死,取下颌骨髁突标本行组织形态学研究,免疫组织化学和PCR检测髁突软骨中Sox9和基质金属蛋白酶13的表达.实验方案经贵州医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为1700456).结果与结论:①番红O-固绿染色及苏木精-伊红染色显示实验组中软骨骨折区的软骨细胞数量及软骨基质沉积都较对照组多;②免疫组织化学显示各时期的实验组Sox9因子的表达强度均强于对照组(术后1-3周P<0.05);实验组基质金属蛋白酶13表达在术后1,2,3周显著低于对照组(P<0.05);③各时期实验组Sox9 mRNA的表达量均高于对照组(术后1-3周P<0.05);实验组中基质金属蛋白酶13 mRNA的表达量低于对照组(术后1-3周P<0.05);④结果说明,间歇性皮下注射甲状旁腺激素,可上调Sox9、抑制早期基质金属蛋白酶13的表达,促进间充质干细胞向软骨转化,加快修复软骨损伤.

2020

2021/07/20

查看

右美托咪定对抑郁症大鼠行为及海马BDNF和mTOR蛋白表达的影响

目的:观察右美托咪定(DEX)对抑郁症大鼠行为及海马脑源性神经营养因子(BDNF)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响并探讨其机制.方法:实验设5组,即假手术(sham)组、抑郁症模型(model)组及DEX(2.5、5和10 μg/kg)组,每组12只大鼠.抑郁症动物模型采用卵巢摘除加慢性不可预知性温和应激法制备. DEX各剂量组大鼠连续腹腔注射给药21 d.强迫游泳及旷场实验观察大鼠行为变化. Morris 水迷宫实验评价大鼠空间学习和记忆能力.海马神经元病理变化采用尼氏染色法检测.大鼠海马白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达水平采用RT-qPCR法检测. Western blot检测海马IL-1β、IL-6、TNF-α和BDNF蛋白表达水平及蛋白激酶A(PKA)、cAMP 反应元件结合蛋白(CREB)、原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和mTOR蛋白的磷酸化水平.结果:与model组相比,DEX各剂量组大鼠强迫游泳不动时间明显降低,自发活动明显增加,逃避潜伏期明显降低,穿越平台次数明显增加(P＜0.05或P＜0.01),海马神经元损伤显著减轻,IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平明显降低,PKA、CREB及TrkB的磷酸化水平和BDNF表达水平均明显升高,同时PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白磷酸化水平明显上调( P＜0.01).结论:右美托咪定可改善抑郁症大鼠行为及空间学习和记忆能力,其机制可能与其抗炎、调节海马BDNF蛋白表达及TrkB磷酸化水平、进而激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

2020

2021/07/20

查看

Scleraxis慢病毒转染人羊膜间充质干细胞促进兔腱-骨愈合

背景:人羊膜间充质干细胞来源广泛、免疫排斥低,具有多系分化潜能,研究证实Scleraxis基因能够诱导人羊膜间充质干细胞向韧带分化,加速腱-骨愈合进程.目的:探讨Scleraxis诱导人羊膜间充质干细胞分化后是否能够在体内促进兔腱-骨愈合,为临床腱-骨愈合提供新的思路和方向.方法:①经遵义医科大学附属医院伦理委员会批准,术前签署知情同意书,取健康足月产妇胎盘,经过2次胰酶消化分离培养人羊膜间充质干细胞,然后倒置显微镜下观察细胞形态,传代继续培养至第3代用于后续实验;②体外将携带有Scleraxis基因的慢病毒转染至人羊膜间充质干细胞,通过实时荧光定量PCR检测韧带相关基因的表达水平,免疫荧光检测韧带相关蛋白的表达水平;③将转染Scleraxis基因的人羊膜间充质干细胞注射到兔关节外腱-骨模型中,3个月后取标本观察腱-骨愈合情况.结果与结论:①传代至第3代的人羊膜间充质干细胞在倒置相差显微镜下呈长梭形、涡旋状贴壁生长;②第3代人羊膜间充质干细胞经过Scleraxis基因慢病毒感染24 h后表达绿色荧光,96 h荧光表达量最强且稳定;③CCK-8检测转染病毒后对细胞的生长速度无影响;④实时荧光定量PCR显示:慢病毒转染Scleraxis基因后,其mRNA表达量成倍的增加,并且韧带相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C的mRNA表达量也明显提高;⑤免疫荧光结果显示:慢病毒转染Scleraxis基因后其韧带相关蛋白Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C的表达水平提高;⑥动物体内实验证实:慢病毒转染Scleraxis基因后能够加速兔关节外腱-骨模型的腱-骨愈合.

2020

2021/07/20

查看

人源脱细胞羊膜与脱细胞羊膜下层组织修复皮肤缺损

背景:羊膜与羊膜下层具有同源性且均属于医疗废物,均具有较低的免疫原性与一定的韧性,羊膜作为组织工程支架材料已有较多报道,但羊膜下层作为组织工程支架的研究较少.目的:对比脱细胞羊膜与脱细胞羊膜下层分别复合骨髓间充质干细胞用于皮肤修复的差异.方法:采用十二烷基硫酸钠+核酸酶法制作脱细胞羊膜下层材料,采用TritonX-100+胰酶法制作脱细胞羊膜材料.采用两种脱细胞材料浸提液分别培养骨髓间充质干细胞,利用CCK-8法检测两种脱细胞材料的细胞毒性.将骨髓间充质干细胞接种于2种脱细胞材料表面,光学显微镜与扫描电镜下观察细胞的生长与黏附.在每只SD大鼠一侧脊柱背部制作深达真皮层的皮肤缺损,将36只造模大鼠随机分为3组处理,每组12只:空白组不植入任何材料,对照组植入脱细胞羊膜与骨髓间充质干细胞复合物,观察组植入脱细胞羊膜下层与骨髓间充质干细胞复合物,术后7,14,21 d分别进行创面愈合率、创面病理及创面基因与蛋白检测.动物实验获得江南大学动物伦理委员会批准.结果 与结论:①在培养的3-7 d内,两种脱细胞材料浸提液均可促进骨髓间充质干细胞的增殖;②光学显微镜与扫描电镜显示,骨髓间充质干细胞在两种脱细胞材料表面黏附、生长良好,细胞形态与培养瓶中培养的相同;③观察组与对照组术后各时间点的创面愈合率均高于空白组(P＜0.05),且观察组高于对照组(P＜0.05);④术后14d的病理观察显示,观察组与对照组的皮肤修复优于空白组,且观察组优于对照组;⑤观察组、对照组术后各时间点的Ⅲ型胶原、CK18、Ⅰ型胶原与血管内皮生长因子基因表达量均高于空白组(P＜0.05),且观察组高于对照组(P＜0.05);⑥观察组、对照组各时间点的CK18、血管内皮生长因子蛋白表达均高于空白组(P＜0.05),观察组高于对照组(P＜0.05);⑦相较于脱细胞羊膜,脱细胞羊膜下层可促进皮肤的修复.

2020

2021/07/20

查看

运动产生鸢尾素对心肌纤维化的影响

背景:心肌纤维化是现代医学研究的一个重要议题,与心律失常、慢性心力衰竭等常见心脏疾病密切相关.运动介入对心肌纤维化有显著改善作用,但运动改善心肌纤维化的机制及不同运动类型对心肌纤维化的影响缺乏系统、全面的认识.运动如何触发鸢尾素的产生而对心肌纤维化起作用？这个问题目前尚不清楚.目的:针对国内外学者有关运动刺激诱导鸢尾素的产生及其对心肌纤维化的影响进行全面综述,揭示其对心肌的保护作用机制,从而为提高心脏功能,预防心律失常、慢性心力衰竭等常见心脏疾病提供理论基础及实践参考.方法:搜寻ELSEVIER、Web of Science、CNKI资料总库、万方数据、维普中文期刊服务平台及台湾学术文献数据库,检索与运动训练、鸢尾素、心肌纤维化等相关的中英文文献,发表时间截止至2019年8月,根据研究需要确立相应的入选标准,对最终筛选所得的58篇文献进行论述.结果 与结论:①人体试验中已证实长时间及单次运动均可提高肌肉及循环鸢尾素水平,而这一结果也在动物实验中得到较好验证;少数试验结果表明长时运动对血液鸢尾素水平无显著影响;出现不同结果的原因可能是选择的研究对象、运动方式、运动强度、运动频率不同,而具体机制尚不明确;②运动可通过鸢尾素作用于心肌线粒体稳定、能量代谢、氧化应激和炎症反应对心肌起保护作用,从而改善心肌纤维化;③心肌纤维化的发生受神经内分泌的调节和氧化应激及炎症反应的影响,鸢尾素可通过抑制ROS/p38MAPK/NFKB信号通路、内源性活性氧和ROS-NLRP3炎症信号通路、调节解偶联蛋白2的表达和线粒体稳态,从而影响心肌纤维化形成机制里的氧化应激反应和炎症反应过程,因此运动改善心肌纤维化可能和运动提高鸢尾素表达从而对心肌起保护作用有关.

2020

2021/07/20

查看