健脾消癌方对结肠癌细胞中Akt/mTOR信号通路的影响

目的:探讨健脾消癌方含药血清对人结肠癌HCT116细胞蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响.方法:以15％健脾消癌方含药血清处理结肠癌HCT116细胞,采用Transwell侵袭实验检测HCT116细胞迁移、侵袭作用,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HCT116细胞中Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),mTOR,磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR),核糖体S6蛋白激酶(S6K1),磷酸化核糖体S6蛋白激酶(p-S6K1),真核细胞始动因子4E结合蛋白(4EBP1),磷酸化真核细胞始动因子4E结合蛋白(p-4EBP1)等蛋白的表达,正常血清组设立相同浓度正常血清组(15％),10％胎牛血清组(FBS).结果:与正常血清组比较,健脾消癌方含药血清组迁移细胞数与侵袭细胞数均显著降低(P＜0.01);与正常血清组比较,Akt蛋白表达无明显下调,p-Akt蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,mTOR蛋白表达无明显下调,p-mTOR蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,S6K1蛋白表达无明显下调,p-S6K1蛋白表达显著下调(P＜0.01);与正常血清组比较,4EBP1蛋白表达无明显下调,p-4EBP1蛋白表达显著下调(P＜0.01).结论:健脾消癌方抗结肠癌复发转移的机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路的激活有关.

2020

2021/07/20

查看

不同加力时间下静止期牙周病大鼠牙槽骨骨微结构的变化

目的 建立静止期牙周病动物模型,观察不同加力时间下其牙槽骨骨微结构的变化.方法 选取156只28周龄SD雄性大鼠,随机分为对照组(50只)和实验组(106只),实验组建立静止期牙周病动物模型,再随机分为牙周治疗组和牙周+正畸治疗组(各50只),对牙周+正畸治疗组动物模型上颌右侧第一磨牙加力,力值为50 g.各组于加力后0、7、14、21、28 d各处死10只动物,取材,行Micro-CT检察.结果 ①加力0、7、14、21、28 d,实验组动物模型右侧上颌第一磨牙牙槽骨骨密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb·Th)均较对照组降低,骨小梁数量(Tb·N)、骨小梁分离距离(Tb· Sp)均较对照组升高;②相较牙周治疗组,加力14 d时牙周+正畸治疗组动物模型右侧上颌第一磨牙牙槽骨BMD、BV/TV、Tb·Th降低,Tb·N、Tb·Sp升高;加力28 d时,BV/TV升高,Tb·N、Tb· Sp降低;③加力14 d,牙周+正畸治疗组动物模型右侧上颌第一磨牙牙槽骨BMD、BV/TV、Tb· Th降至最低,Tb·N、Tb· Sp升至最高,但至28 d时各项指标已恢复至未加力时状态.结论 ①静止期牙周病动物模型牙槽骨骨质疏松且对力学刺激的反应变缓慢;②突然受力后静止期牙周病动物模型牙槽骨以吸收为主,但随着加力装置力量的减弱和力值的稳定,牙槽骨可逐渐恢复到加力前的状况;③较小的力值刺激有利于静止期牙周病动物模型牙槽骨的修复.

2020

2021/07/20

查看

褪黑素对糖尿病大鼠非酶糖基化产物及受体表达和心脏功能变化的影响

目的 观察褪黑素(MT)对糖尿病大鼠心脏收缩功能及心肌组织糖基化终末产物(AGE)和AGE受体(RAGE)表达的影响.方法 Wistar大鼠,雄性清洁级,高脂高糖饮食,协同腹腔内注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型后给予低剂量(10 mg/kg体重·d)和高剂量(20 mg/kg体重·d)MT灌胃16 w.测量实验大鼠的血糖、体质量和心脏指数;使用动物生理记录仪测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张期末压(LVEDP)、室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(-dp/dtmax)和室内压上升达最大速率所需时间(t-dp/dt)等心功能指标;HE染色观察心肌组织病理学改变;免疫组化测定心肌组织中AGE和RAGE蛋白表达.结果 MT可以改善糖尿病大鼠心脏功能,对其具有保护作用;HE染色显示低剂量和高剂量MT组心肌结构损伤程度均较模型组轻;MT可以下调心肌组织中AGE和RAGE蛋白表达.结论 MT对糖尿病大鼠心脏有保护作用;可改善心肌结构变化;可下调心肌组织中AGE和RAGE蛋白的表达.

2020

2021/07/20

查看

蒙药三味阿拉坦其其格散的急性毒性试验

目的:通过观察蒙药方剂三味阿拉坦其其格对小鼠的急性毒性反应和动物死亡情况,对三味阿拉坦其其格进行安全性评价,力求为其临床用药提供安全范围.方法:按照经典急性毒性实验方法进行,观察小鼠中毒反应及计算出半数致死量(LD50),给药后连续观察7d,实验结束后处死小鼠,观察重要器官是否存在病理改变.结果:蒙药方剂三味阿拉坦其其格LD50为16.03g· kg-1,95％置信区间(CI)为11.38 ～22.60g· kg-1.实验过程中小鼠体质量在给药3d后恢复正常,组织病理切片显示,肝脏空泡变性、椭圆形细胞增生病变、脾脏淋巴细胞凋亡等病变可能与药物使用有关.结论:实验表明蒙药方剂三味阿拉坦其其格具有一定的急性毒性,但在一定剂量范围内使用是安全的.

2020

2021/07/20

查看

脑损伤模型大鼠Pink1/Parkin介导的线粒体自噬作用

背景:哺乳动物中除了FUNDC1、Bnip3与Nix为与低氧环境联系紧密的线粒体自噬路径,介导脑损伤线粒体主要自噬路径为Pink1/Parkin,PINK1在Parkin的上游,Pink1/Parkin路径介导受损线粒体表层功能蛋白或者结构多聚泛素化,同时当做自噬体选择包括标志,在细胞自噬依赖去极化线粒体降解中有重要影响.目的:分析Pink1/Parkin介导的线粒体自噬在高血压脑出血后脑损伤中的作用.方法:实验方案经川北医学院动物实验伦理委员会批准.选取SPF级Wistar雄性大鼠45只,随机数字表法分为正常组、模型组和自噬抑制剂组.模型组和自噬抑制剂组制备高血压脑出血模型,造模前自噬抑制剂组大鼠将2μL溶有三甲基腺嘌呤(3MA,100 mmol/L)的PBS由腹腔注射,模型组和正常组大鼠2μL PBS腹腔注射.检测各组大鼠脑组织含水量、线粒体自噬、线粒体膜电位、脑梗死灶、线粒体LC3、Parkin蛋白和脑组织细胞内PINK1蛋白表达.结果与结论:①和正常组相比,模型组大鼠自噬染色、线粒体染色表达升高,共定位阳性细胞数量升高;和模型组相比,自噬抑制剂组大鼠自噬染色、线粒体染色表达降低,共定位阳性细胞数量降低(均P<0.05);②和正常组相比,模型组大鼠脑组织梗死比例升高;和模型组相比,自噬抑制剂组大鼠脑组织梗死比例升高(均P<0.05);③和正常组相比,模型组大鼠线粒体染色强度降低,自噬染色强度增加;和模型组相比,自噬抑制剂组大鼠线粒体染色强度降低,自噬染色强度增加(均P<0.05);④和正常组相比,模型组大鼠PINK1、LC3、Parkin蛋白表达量升高;和模型组相比,自噬抑制剂组大鼠PINK1、LC3、Parkin蛋白表达量降低(均P<0.05);⑤结果提示,线粒体自噬可缓解高血压脑出血后脑损伤程度,Pink1/Parkin通路在线粒体自噬中有重要作用.

2020

2021/07/20

查看

淫羊藿苷治疗骨性关节炎过程中对关节软骨、软骨下骨、滑膜等影响的机制

背景:淫羊藿苷是具有补肾强筋健骨功效的淫羊藿的主要有效成分,近年来大量的研究发现淫羊藿苷在治疗骨性关节炎方面有着显著作用.目的:综述淫羊藿苷治疗骨性关节炎的分子机制研究进展.方法:第一作者应用计算机以“Icariin、Osteoarthritis、Cartilage、Subchondralbone、Synovial membrane、Synovium、Inflammation”及“淫羊藿苷、骨关节炎、骨性关节炎、软骨、软骨下骨、滑膜、炎症”作为主题词检索PubMed、中国知网、万方、维普等数据库相关文献,按入选标准及排除标准进行筛选,最终纳入42篇文献进行分析.结果 与结论:淫羊藿苷通过促进骨髓间充质干细胞的成软骨分化及增强软骨细胞和成骨细胞的增殖,抑制软骨细胞外基质的降解、降低破骨细胞的活性和减轻炎症因子所致的滑膜炎症反应来有效的治疗骨性关节炎.但其最佳有效剂量及浓度安全性仍需要大量实验研究,目前绝大部分实验仍停留在动物及组织细胞等基础实验,尚需要大量临床研究,继续完善其具体机制,以期为淫羊藿苷治疗骨关节炎提供循证医学证据.

2020

2021/07/20

查看

乳腺癌预防模型研究进展

随着晚育少育的趋势上升,世界范围内乳腺癌的发病率在不断攀升〔1〕,在我国乳腺癌是女性最常见的癌症,也是中国女性第六大癌症死因〔2〕.根据美国国立综合癌症网络( NCCN )数据,目前全世界公认的乳腺癌预防手段主要是调整生活方式,包括减少酒精摄入、维持健康体重和化学药物预防〔3〕,方法有限,因此对于乳腺癌预防的研究急需有较大突破和进展.可应用于乳腺癌预防性研究的实验模型可以保证实验结果的真实性、客观性和有效性,从而能对乳腺癌进行有效预防,降低乳腺癌发病率.现阶段大多数研究都是通过建立动物模型或特定细胞株来研究乳腺癌在体内发生发展的规律及检测药物预防肿瘤发生的有效性,现将可用于预防乳腺癌的实验模型综述如下.

2020

2021/07/20

查看

长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-138对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激的影响及作用机制研究

目的:探究同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)与miR-138对脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激的影响及作用机制.方法:将大鼠分为Control组、CLP组、siRNA+CLP组、si-HOTAIR+CLP组,构建大鼠CLP模型,PanoView b1500检测大鼠左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末压(LVEDP),RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,HE染色检测心肌病理损伤,试剂盒检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、心肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平;将心肌细胞分为Control组、LPS组、siRNA+LPS组、si-HOTAIR+LPS组、si-HOTAIR+LPS+inhibitor组,RT-PCR检测HOTAIR和miR-138表达水平,荧光素酶报告检测HOTAIR与miR-138靶向关系,MTT检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测MDA和SOD的水平,Western blot检测NF-κB信号通路蛋白表达水平.结果:在动物实验中,与Control组比较,CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与CLP组比较,si-HOTAIR+CLP组LVSP、细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,LVEDP、病理性改变、细胞凋亡率、HOTAIR、cTnⅠ、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及NF-κB通路蛋白表达水平显著降低.在细胞实验中,与Control组比较,LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著降低,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平显著升高;与LPS组比较,si-HOTAIR+LPS组细胞活性、miR-138、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、HOTAIR、MDA、NF-κB通路蛋白显著降低;与si-HOTAIR+LPS组比较,si-HOTAIR+LPS+inhibitor组细胞活性、SOD水平降低,细胞凋亡率、MDA、NF-κB通路蛋白表达水平升高.在荧光素酶报告实验中,与HOTAIR wt组比较,HOTAIR wt+miR-138 mimic组荧光素酶活性显著降低.结论:HOTAIR可以通过沉默miR-138,促进脓毒症诱导的大鼠心肌炎症反应和氧化应激,其作用机制与NF-κB信号通路激活有关.

2020

2021/07/20

查看

复方脑肽节苷脂可改善宫内缺氧新生模型小鼠脑损伤并促进突触再生

背景:目前有关复方脑肽节苷脂的研究大多集中在临床一些颅脑损伤和新生儿缺血缺氧性脑病的疗效观察和分析,但其参与神经功能恢复的分子机制少有报道.目的:探讨复方脑肽节苷脂在宫内缺氧新生鼠脑损伤中的保护作用及机制.方法:15只昆明小鼠随机分为对照组、缺氧组和治疗组.于孕14 d开始,缺氧组和治疗组孕鼠置于体积分数10％氧培养箱中,制作胎鼠宫内缺氧模型.孕鼠分娩后,新生鼠经腹腔分别注入复方脑肽节苷脂和PBS,治疗后观察各组小鼠发育情况;对照组不缺氧,不治疗.用免疫荧光和Western blot检测脑胶质纤维酸性蛋白、神经蛋白聚糖、突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ的表达;小鼠跳台实验测试动物记忆功能.实验方案经漯河医学高等专科学校动物实验伦理委员会批准.结果与结论:①与对照组相比,缺氧组胶质纤维酸性蛋白和神经蛋白聚糖阳性细胞表达显著增加,而突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ的表达显著减少;②治疗组突触分化诱导基因1蛋白和胶原蛋白Ⅳ表达均较缺氧组显著增加,而胶质纤维酸性蛋白和神经蛋白聚糖的表达较缺氧组显著减少;③与对照组相比,缺氧组大鼠学习记忆能力明显下降,经复方脑肽节苷脂注射液治疗后学习记忆能力明显改善;④结果说明,复方脑肽节苷脂可减轻缺氧后脑损伤,改善学习记忆能力,具体机制可能与抑制星形胶质细胞活化、下调神经蛋白聚糖和上调胶原蛋白Ⅳ表达,减轻脑血管损伤,促进突触的重建有关.

2020

2021/07/20

查看

基于重组荧光病毒的流式细胞术检测抗CV-A16中和抗体的研究

建立基于重组荧光病毒CV-A16-EGFP的流式快速测定CV-A16感染或免疫动物血清中和抗体效价的方法.在Vero细胞上对不同感染时间点,不同病毒接种量情况下的CV-A16-EGFP病毒的增殖特性进行分析;随后,利用流式检测不同病毒滴度下的EGFP阳性细胞数量、EGFP阳性细胞百分比(％)、及EGFP阳性细胞的平均荧光密度值,并换算出不同病毒滴度与三者之间分别的数值对应关系.最后,以平均荧光密度值作为替代判断病毒病变效应的指标,并利用流式荧光检测及传统微量中和方法对CV-A16感染恒河猴血清及CV-A16免疫的羊血清中和抗体效价进行检测,并对两种方法的检测结果进行比较.在感染后24h,不同的病毒滴度与对应的平均荧光密度值呈良好的线性关系.利用流式荧光检测的CV-A16中和抗体效价与传统的微量中和实验相比,两者检测结果具有较好的线性相关性,线性回归系数为R2=0.8026;传统的微量中和实验检测的平均中和抗体效价略高于流式荧光检测的中和抗体效价,但是差异无统计学意义(P＞0.05).利用流式荧光检测可以迅速检测CV-A16中和抗体效价,并且实验结果与传统的微量中和实验具有较好的一致性.相比与传统方法,该方法更简单、快速、灵敏,为CV-A16抗血清的中和抗体检测提供参考.

2020

2021/07/20

查看