四种有机溶剂对斑马鱼眼睛发育的影响

目的 评估乙醇、异丙醇、丙酮和二甲基亚砜四种有机溶剂对斑马鱼胚胎发育,尤其是眼睛发育的影响,为其作为溶剂在斑马鱼眼睛疾病模型研究中提供参考.方法 将发育至12 hpf斑马鱼胚胎暴露于0.5％乙醇、1％异丙醇、1.5％丙酮和2.5％二甲基亚砜至72 hpf,观察其存活率、致畸率及眼睛发育状况.结果 对照组和乙醇、异丙醇、丙酮、DMSO暴露组存活率分别为96％和93％、90％、90％、86％.对照组斑马鱼幼鱼形态正常,而有机溶剂暴露组则出现了不同程度形态变化如心包水肿、出血、卵黄缺损和身体弯曲等.其中,以DMSO致畸作用最严重,乙醇的致畸作用最弱.方差分析显示,斑马鱼幼鱼眼睛长度/身体长度比值在有机溶剂暴露组和对照组之间没有显著差异;但是DMSO暴露组斑马鱼幼鱼眼睛面积/身体面积比值显著低于其他组.另外与对照组相比,四种有机溶剂暴露组的视网膜分层均为正常,乙醇、异丙醇、丙酮暴露组视锥细胞、视杆细胞和视网膜神经元细胞信号正常,但DMSO暴露组各细胞信号均较弱.结论 因此,在以斑马鱼为模型动物进行眼睛疾病的相关研究时,我们应谨慎选择有机溶剂作为药物或其他化学受试品的溶解载体,并且应该进行预实验来确定其最佳使用浓度.

2020

2021/07/20

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猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的缺失第3外显子的肿瘤坏死因子受体介导细胞凋亡能力的探究

肿瘤坏死因子受体(TNFR)可以在肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员的作用下引起受体介导的细胞凋亡.为了探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和TNFR介导的细胞凋亡的关系,首先使用GenBank中发表的猪源TNFR1的序列设计并合成针对TNFR1的特异性引物,然后检测PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)后TNFR1的表达情况.结果 表明,在PRRSV感染的PAM细胞中,有两种分子量不同的TNFR1存在,序列测定分析表明,一种为野生型TNFR1,另一种为第3外显子缺失(129 bp)的TNFR1(TNFR1-d3).为探究缺失型TNFR1-d3在细胞凋亡中的意义,我们采用过表达的方法将携带TNFR1和TNFR1-d3的真核表达载体分别转染于HEK293细胞中,用TNF-α结合放线菌酮共刺激细胞诱导凋亡.通过流式细胞术检测发现,与野生型TNFR1相比,TNFR1-d3不再具有促进细胞凋亡的功能,说明缺失的第3外显子参与调控TNF-α诱导的细胞凋亡.本研究阐明了PRRSV和细胞凋亡的新机制.

2020

2021/07/20

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人源重建皮肤模型的体外光毒性试验方法建立

目的 建立国产人源重建皮肤模型EpiKutis的体外光毒性试验方法 .方法 评估不同长波紫外线(ultraviolet A,UVA)光照时间及不同浓度盐酸氯丙嗪溶液处理EpiKutis后的细胞活性,并采用该皮肤模型检测盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、8-甲氧基补骨脂及十二烷基硫酸钠等化学物的光毒性.结果 EpiKutis体外光毒性试验最佳条件为UVA的光照强度1.7 ± 0.1 mW·cm-2及光照时间60 min.浓度100 mg· L-1的盐酸氯丙嗪溶液是该模型的最佳阳性对照.EpiKutis接受光照处理后的细胞活性较无光照处理组降低30％以上,认为该受试物有光毒性作用.采用该皮肤模型评估的上述4个化学物光毒性与已知数据一致.结论 建立的EpiKutis体外光毒性试验方法 能够有效评估化学物的光毒性.

2020

2021/07/20

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国产新型腰椎棘突间撑开器体外生物力学测试及有限元分析

背景:腰椎棘突间撑开器非融合系统为腰椎退行性疾病提供了一种新的治疗选择.但目前国内临床对于腰椎棘突间撑开系统的应用及研究严重不足,对于适用于国人的国产化腰椎棘突间撑开器更是鲜有报道.目的:通过人体腰椎三维有限元分析技术和山羊腰椎体外生物力学实验分析国产新型棘突间撑开器生物力学特点,验证新型腰椎棘突间撑开器的科学性和有效性.方法:①国产新型腰椎棘突间撑开器有限元分析:通过正常成人腰椎CT资料建立L2-L5椎体三维模型,随后依次建立国产新型腰椎棘突间撑开器模型、国产新型腰椎棘突间撑开器腰椎非融合系统模型,赋予腰椎生理情况下的力学条件,对新型撑开器植入前后进行生物力学分析;②国产新型腰椎棘突间撑开器体外生物力学分析:获取24只成年雄性山羊腰椎(L1-L5),在L3-4棘突间植入国产新型腰椎棘突间撑开器,撑开器植入前后检测腰椎标本前屈、后伸、侧弯、旋转状态下的腰椎活动度与椎间盘压力.结果与结论:①在撑开器植入后,责任节段后伸时活动范围及椎间盘压力减小,相邻节段活动度和椎间盘压力几乎不受影响,从理论上验证了腰椎棘突间撑开器可以为腰椎退行性疾病的治疗提供了生物力学依据,为预防临椎病贡献了理论参考.②在后伸状态下,L3-4椎体植入撑开器后的椎体活动度明显小于植入前(P<0.05),L2-3、L4-5椎体植入撑开器后的椎体活动度与植入前比较差异无显著性意义(P>0.05);在前屈、侧弯、旋转状态下,L2-3、L3-4、L4-5椎体植入撑开器后的椎体活动度与植入前比较差异均无显著性意义(P>0.05).在后伸状态下,L3-4椎体植入撑开器后的椎间盘压力明显小于植入前(P<0.05),L2-3、L4-5椎体植入撑开器后的椎间盘压力与植入前比较差异无显著性意义(P>0.05);在前屈、侧弯、旋转状态下,L2-3、L3-4、L4-5椎体植入撑开器后的椎间盘压力与植入前比较差异均无显著性意义(P>0.05).③结果表明,国产新型腰椎棘突间撑开器的科学性和有效性均从三维有限元分析和体外动物腰椎标本实验得到了有力验证,为国产新型棘突间撑开器的活体动物实验、临床实验、临床应用以及临床生产提供了有力的依据.

2020

2021/07/20

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Notch3信号介导小胶质细胞活化在慢性前列腺炎疼痛中的作用

目的 观察Notch3介导L5～S2 脊段背角小胶质细胞活化在慢性前列腺炎疼痛中的作用.方法 大鼠分为实验组(慢性前列腺炎组)和对照组,实验组通过完全弗氏佐剂(CFA)注射前列腺来制作大鼠慢性前列腺炎疼痛模型,对照组注射生理盐水,采用热辐射甩尾痛阈测定和前列腺组织病理学检查鉴定疼痛模型,分别在注射CFA后0、4、12、24 d,采用qRT-PCR检测L5～S2脊段后角小胶质细胞活化标志物IBA-1 和受体Notch3 mRNA的表达,采用ELISA检测小胶质细胞炎症因子TNF-α和IL-1 β的分泌,并在鞘内注射小胶质细胞和Notch3抑制剂后检测小胶质细胞TNF-α和IL-1 β蛋白的表达.结果 前列腺组织病理和热痛域实验证实慢性前列腺炎疼痛模型建立成功.实验组大鼠Notch3、IBA-1 、TNF-α及IL-1β的表达在第4天开始增加,第12 天达到最高水平,第24天开始下降,均显著高于对照组,差异有极显著性统计学意义(P＜0.01).抑制小胶质细胞和Notch3 受体后,TNF-α和IL-1 β的分泌明显减少(P＜0.05).结论 慢性前列腺炎疼痛中Notch3 介导L5～S2 脊段中枢小胶质细胞活化,炎症因子分泌增加,与慢性前列腺炎呈现的持续顽固神经炎性疼痛有关.

2020

2021/07/20

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洛匹那韦/利托那韦用于病毒感染性疾病的有效性和安全性文献分析

目的 系统检索关于洛匹那韦/利托那韦用于病毒感染性疾病的文献并分析,为新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的治疗提供参考.方法 计算机检索Pubmed、Embase、Cochrane Central Register of Controlled Trials(CENTRAL)、中国知网(CNKI)、维普数据库、万方数据库,检索时限均为建库至2020年2月22日,对符合纳入标准的文献的主要结果进行描述性分析.结果 初筛文献2036篇,筛选后最终纳入洛匹那韦/利托那韦用于病毒感染性疾病文献392篇.其中用于获得性免疫缺陷综合征(AIDS)研究244篇,用于严重急性呼吸综合征(SARS)研究2篇,用于中东呼吸综合征(MERS)研究4篇,用于COVID-19研究2篇.洛匹那韦/利托那韦用于AIDS疗效确切.用于SARS的2个研究均显示"洛匹那韦/利托那韦+利巴韦林+糖皮质激素"的治疗方案有效.动物实验显示洛匹那韦/利托那韦与干扰素β1b单独使用或联合用于MERS有效,个案报道推荐"洛匹那韦/利托那韦联合干扰素 β1b"用于MERS的治疗方案.洛匹那韦/利托那韦与阿比多尔对比用于COVID-19的研究,未发现洛匹那韦/利托那韦和阿比多尔具有改善症状或缩短呼吸道标本病毒核酸转阴时间的作用.结论 洛匹那韦/利托那韦用于AIDS疗效确切,用于SARS的治疗方案有效.但是,用于COVID-19缺少高质量研究证据支持.安全性方面,腹泻、恶心等胃肠道反应为洛匹那韦/利托那韦短期给药的主要不良反应;合并用药时需要考虑药物的相互作用,用药剂量建议按照诊疗方案.

2020

2021/07/20

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结核分枝杆菌H37Rv株急性感染豚鼠模型的研究

目的 建立结核分枝杆菌(Mtb)H37Rv株急性感染豚鼠模型的方法.方法 18只豚鼠按随机数字表法分为6组:空白剂量组、皮下高剂量组、皮下低剂量组、滴鼻高剂量组、滴鼻中剂量组和滴鼻低剂量组,每组3只.皮下高、低剂量组采用腹股沟皮下注射的方式分别感染2×106 CFU/200μL和1×106 CFU/200μL的Mtb H37Rv PBS悬液.滴鼻高、中、低剂量组采用滴鼻的方式分别感染5×105、5×104 CFU/50μL和5×103 CFU/50μL的Mtb H37Rv PBS悬液.感染4周后,检测各组豚鼠的肺脾荷菌数和组织病理学改变情况.结果 感染4周后,皮下高剂量组的肺、脾Mtb荷菌数均高于皮下低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05).感染4周后,皮下高剂量组的肺Mtb荷菌数高于滴鼻高剂量组,差异有统计学意义(P<0.05).感染4周后,皮下高、低剂量组和滴鼻高剂量组豚鼠的肺组织有明显充血,肺泡壁间隔增厚,滴鼻中、低剂量组豚鼠的肺组织仅有轻微充血.感染4周后,各组豚鼠脾组织病理变化不明显.结论 采用腹股沟皮下感染的方式成功建立H37Rv株急性感染豚鼠模型,为结核病新型疫苗和药物的研究奠定了基础.

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2021/07/20

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脑心清对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护机制

背景:脑心清胶囊用于脑缺血再灌注损伤的治疗由来已久,然而针对其作用机制的深入研究则相对较少.目的:应用分子生物学手段考察脑心清胶囊对脑缺血再灌注损伤沙鼠模型的治疗作用.方法:实验方案经辽宁中医药大学动物实验伦理委员会批准(批准号为21000092017072).将80只雄性蒙古沙鼠随机分为假手术组、模型组、脑心清组及脑络通组,后3组沙鼠应用无创微动脉夹同时夹闭双侧颈总动脉5 min后松开,建立脑缺血再灌注损伤模型;假手术组不夹闭双侧颈总动脉.术后次日开始假手术组正常饲养,模型组灌服同体积的生理盐水,脑心清组按照100 mg/(kg·d)灌胃给药,脑络通组按照100 mg/(kg·d)灌胃给药,连续给药21 d.在实验结束前1周进行水迷宫实验,实验结束后麻醉下处死沙鼠取脑组织.检测沙鼠的学习记忆功能、海马神经元、脑血管及对应的分子变化情况.结果 与结论:①同假手术组相比,模型组沙鼠学习能力显著下降.而脑心清组及脑络通组则可有效提升术后的学习能力下降趋势;②与模型组相比,脑心清组及脑络通组神经元显著增多,且排列较为整齐,细胞轮廓清晰,结构完整;③与模型组相比,脑心清组及脑络通组沙鼠的超氧化物歧化酶和乳酸脱氢酶活性,谷胱甘肽含量显著升高,丙二醛含量显著降低(P＜0.01);④与模型组相比,脑心清组及脑络通组沙鼠海马组织ASC、NLRP3和Caspase-1蛋白表达下调(P＜0.05);⑤与模型组相比,脑心清组及脑络通组沙鼠的白细胞介素18和白细胞介素1β含量明显降低(P＜0.01);⑥与模型组相比,脑心清组及脑络通组沙鼠的血小板内皮细胞黏附分子1阳性细胞明显增多,细胞间连接紧密;⑦与模型组相比,脑心清组及脑络通组沙鼠海马组织血小板内皮细胞黏附分子1和磷酸化内皮型一氧化氮合酶表达显著上调,一氧化氮含量显著升高(P＜ 0.01);⑧结果说明,脑心清胶囊可有效保护沙鼠的海马CA1区形态;脑缺血再灌注时伴有脑血管功能紊乱,脑心清胶囊可以保护脑血管功能,进而抑制脑缺血再灌注损伤.

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2021/07/20

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低剂量唑来膦酸对去势拔牙大鼠破骨及成骨细胞的影响

背景:目前唑来膦酸虽能有效地预防绝经后妇女的骨丢失,但其对下颌骨的影响及其机制尚不清楚.目的:观察去势大鼠经低剂量唑来膦酸作用后下颌骨组织病理学改变,探讨RANKL/RANK/OPG信号系统在唑来膦酸抑制骨吸收过程中的调控效应与机制.方法:取36只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,后2组大鼠行两侧卵巢切除术,建立骨质疏松模型;对照组行假手术去除同等质量卵巢周围的脂肪.去卵巢3个月后,治疗组皮下一次性注射唑来膦酸20 μg/kg,对照组和模型组皮下注射相应剂量的盐水;用药1周后拔除大鼠左侧下颌磨牙,拔牙后4周麻醉动物取出拔牙侧下颌骨组织.通过影像学X射线大致观察大鼠拔牙窝剩余牙槽骨状况,苏木精-伊红染色检测下颌骨皮质和骨松质的病理结构改变,TUNEL凋亡实验检测凋亡的成骨细胞数量,利用免疫组织化学技术检测下颌牙槽骨内细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)、骨保护素、细胞核转录因子(NF-κB)的表达情况,最后Western blot检测核因子κB受体活化因子配基、细胞核转录因子蛋白的表达.结果 与结论:①拔牙4周后,治疗组相较模型组牙槽骨骨吸收减少,拔牙窝底有新骨形成;②苏木精-伊红染色可见,模型组的骨皮质变薄,骨小梁结构变细,甚至出现断裂,大量骨吸收陷窝,成骨细胞较少;治疗组骨皮质增厚,骨小梁结构正常,只有少量骨吸收陷窝,成骨细胞增多;③治疗组的成骨细胞凋亡数目显著低于模型组(P＜0.001);④免疫组织化学染色可见,治疗组RANKL蛋白、NF-KB p65蛋白表达显著低于模型组(P＜ 0.001,P＜0.002),骨保护素蛋白表达显著高于模型组(P＜ 0.001);⑤Western Blot结果显示,与对照组相比较,模型组的RANKL、NF-κB蛋白高表达,治疗组其表达量显著降低(均P＜0.001);⑥结果说明,唑来膦酸可通过下调细胞核转录因子信号通路抑制破骨细胞的分化,同时调控成骨细胞的凋亡.

2020

2021/07/20

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建立大鼠动脉粥样硬化模型的研究进展

动脉粥样硬化是受累动脉从内膜开始病变的一种常见血管病,是冠心病、脑梗死、外周血管病的主要发病原因,严重危害人类身体健康.建立动脉粥样硬化动物模型对深入了解动脉粥样硬化发病机制、发生发展过程、临床诊断和防治都具有重大意义.通过查阅国内外相关文献,本文归纳和总结大鼠动脉粥样硬化建模方法,比较各种建模方法的优缺点,概述建立动脉粥样硬化动物模型的现状与进展,总结发现单纯高脂饲料喂养很难形成动脉粥样硬化病变,而高脂饲料结合维生素D只能造成早期病变且造模时间较长,但高脂饲料结合维生素D的同时,加以手术机械损伤作用可形成与人类动脉粥样硬化相似的较成熟的病变斑块.

2020

2021/07/20

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