芹菜素治疗去卵巢骨质疏松模型大鼠的作用与剂量

背景:研究证实芹菜素具有抗病毒、抗炎、抗氧化、镇静安神等功效.目的:研究不同剂量芹菜素对大鼠骨质疏松的疗效并探讨其机制.方法:实验方案经南方医科大学动物实验伦理委员会批准.成年雌性SD大鼠42只,通过卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型,实验分为7组,每组6只大鼠,分别为假手术组、芹菜素20,40,60和80 mg/kg组、对照组、阳性对照组.假手术组未摘除卵巢,阳性对照组每天灌胃烯雌酚(0.02 mg/kg)、维生素D和钙;对照组给予同等量纯净水皮下注射;芹菜素各组分别给予相应剂量的芹菜素皮下注射;1次/d,用药8周.分别检测干预后第4周和第8周大鼠股骨密度和血清中钙、磷、骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基末端前肽、β-Ⅰ型胶原C-末端肽的水平.结果 与结论:①与对照组比较,芹菜素剂量为40,60和80 mg/kg时,大鼠的骨密度、血清中钙、磷在第4周和第8周时均较高(P＜0.05),Ⅰ型前胶原氨基末端前肽、β-Ⅰ型胶原C-末端肽、骨碱性磷酸酶较低(P＜0.05);②与阳性对照组比,芹菜素剂量为60 mg/kg和80 mg/kg时,大鼠的骨密度、血清中钙、磷和骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原氨基末端前肽、β-Ⅰ型胶原C-末端肽在第4周和第8周时均无明显差别(P＞0.05),剂量为20 mg/kg和40 mg/kg时,骨密度、血清中钙、磷、均比阳性对照组低(P＜0.05),Ⅰ型前胶原氨基末端前肽、β-Ⅰ型胶原C-末端肽比阳性对照组高(P＜0.05);③对照组和假手术组比较,在第4周和第8周时大鼠骨密度、血清中钙、磷均比较低(P＜0.05),Ⅰ型前胶原氨基末端前肽、β-Ⅰ型胶原C-末端肽均比较高(P＜0.05);④结果说明,去卵巢法建立大鼠骨质疏松模型确实有效;芹菜素对骨质疏松的治疗作用和剂量相关,一定剂量的芹菜素具有类似烯雌酚样的抗骨质疏松效果.

2020

2021/07/20

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中的分泌表达及免疫原性分析

根据杆状病毒表达系统的密码子偏好性,对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) VP2基因序列进行密码子优化,然后合成序列.优化后的序列被定向克隆至转移载体pFast BacTM1,转化DH10BacTM感受态细胞获取重组杆状病毒穿梭质粒,转染昆虫细胞SF9,获得P0代重组杆状病毒.间接免疫荧光鉴定和Western blot分析结果显示,病毒reBac-VP2感染昆虫细胞后,能够在昆虫细胞的上清中稳定表达VP2蛋白,而且能够与IBDV的抗体发生特异性结合,具有良好的免疫原性.本试验成功构建了能够分泌表达VP2蛋白的重组杆状病毒,为IBDV诊断试剂及亚单位疫苗研发提供了工具.

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2021/07/20

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猪作为人类疾病模型的研究进展

人类疾病动物模型在阐明疾病发生机制、探索治疗方法等基础医学及临床前研究具有重要作用.与啮齿类动物相比,猪在解剖、生理、营养代谢以及伦理方面更有优势,更适合做人类疾病动物模型.目前,通过基因编辑技术和体细胞克隆技术等方法产生了多种人类疾病模型猪.本文综述了近年来猪模型在糖尿病、心血管疾病、神经退行性疾病、遗传病以及肿瘤等多领域的研究进展,并探讨了不同模型存在的表型不稳定、不能准确模拟人类疾病等问题.本文为了解和推动猪在人类疾病动物模型中的应用提供重要参考.

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2021/07/20

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人巨细胞病毒孕早期先天性感染模型子代大鼠孤独症谱系障碍症状研究

目的:建立人巨细胞病毒(HCMV)孕早期宫内感染模型,探讨子代大鼠ASD症状.探讨HCMV孕早期先天性感染致子代孤独症谱系障碍(ASD)症状.方法:随机选取孕3天SD大鼠14只,实验组7只腹腔注射1×10-6TCID50病毒悬液0.5ml,对照组7只腹腔注射人胚肺成纤维细胞(HELF)上清液0.5ml.仔鼠中随机各取6只,实验组母鼠的仔鼠记为HCMV组(n=6),对照组母鼠的仔鼠记为HELF组(n=6),分别进行病理及行为学试验.结果:病理及电镜结果显示实验组子代大鼠海马髓鞘破坏.Morris游泳距离:HCMV组1-4天总路程(d1:17.97±3.82;d2:15.22±2.96;d3:14.22±2.08;d4:10.87±2.34)m,高于HELF组1-4天总路程(d1:9.36±1.95;d2:6.31±1.65;d3:5.36±1.23;d4:5.01±1.24)m,差异有显著性意义(P＜0.01).刻板行为结果:HCMV组刻板动作次数(40.7±3.98,38.7±3.4,38.3±4.13,40.2±3.4,39.7±2.01,38.5±3.00)次,明显多于HELF组(18.5±2.70,21.7±3.17,26.4±3.26,20.2±2.29,19.2±2.94,20.9±3.00)次,差异有显著性意义(P＜0.01).旷场实验结果:HCMV组站立次数(19.15±3.63)次、跨格子数(41.70±11.05)均显著低于HELF组站立次数(22.05±4.14)次、跨格子数(66.05±12.57)(P＜0.05).悬吊试验HCMV组仔鼠得分(1.52±0.61)显著低于对照组(2.70±0.73)(P＜0.01),斜坡试验HCMV组仔鼠评分(1.96±0.29)显著低于HELF组(4.25±0.48)(P＜0.01)、倾斜板试验HCMV组停留时间(48.17±7.15)s显著低于HELF组(63.99±5.76)s(P＜0.01). 结论:HCMV孕早期感染,子代大鼠有ASD样症状,表明HCMV孕早期官内感染可能是诱发ASD的病因之一.

2020

2021/07/20

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CDK4/6抑制剂哌柏西利对人黑素瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶4/6 (cyclin-dependentkinases 4/6,CDK4/6)抑制剂哌柏西利对人恶性黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:体外培养人黑素瘤A2058、SK-MEL-5和A375细胞,以耐药A2058细胞作为阴性对照.用不同浓度的哌柏西利处理细胞24和48 h后,采用CellTiter-Glo(R)发光法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞增殖的影响.碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色后检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞周期的影响,蛋白质印迹法检测哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞中细胞周期相关蛋白[CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1 (cyclin D1)、视网膜母细胞瘤蛋白(retinoblastoma protein,Rb)和磷酸化Rb (phospho-Rb,p-Rb)]表达的影响.Annexin V-FITC/PI双染法检测哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞凋亡的影响.采用NOD/SCID小鼠建立A2058、SK-MEL-5和A375细胞的皮下移植瘤模型,将小鼠分为2组[哌柏西利(80 mg/kg)处理组和乳酸钠缓冲液处理组],通过体内实验验证哌柏西利的安全性和疗效.结果:与阴性对照A2058细胞相比,哌柏西利对SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用(P值均＜0.001).哌柏西利能够引起SK-MEL-5和A375细胞中G1期细胞所占比例增高(P值均＜0.05);蛋白质印迹法检测发现哌柏西利能够使SK-MEL-5和A375细胞中细胞周期G1/S期检查点关键蛋白CDK4、CDK6、cyclin D1以及p-Rb的表达水平明显下调(P值均＜0.001).哌柏西利对A2058、SK-MEL-5和A375细胞均未见明显的促凋亡作用(P值均＞ 0.05).在荷瘤小鼠模型中,哌柏西利安全性高,对小鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用[对SK-MEL-5细胞移植瘤的抑制率为(64.6±9.8)％,对A375细胞移植瘤的抑制率为(76.3±6.6)％](P值均＜0.001).结论:哌柏西利对黑素瘤SK-MEL-5和A375细胞的增殖具有明显抑制作用,可引起细胞周期G1期阻滞.

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2021/07/20

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海藻酸钠复合工程化软骨细胞对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子RORγt mRNA、Foxp3mRNA表达的影响

目的 探讨组织工程学方法对兔佐剂性关节炎关节滑膜转录因子(ROR)γt mRNA、叉头蛋白(Fox)p3 mRNA的影响.方法 将新西兰兔分为:对照组(A组),模型组(B组),3个治疗组〔分别为支架治疗组(C组)、细胞治疗组(D组)、支架复合细胞组(E组)〕,每组8只.B、C、D、E组的关节炎模型用完全弗氏佐剂(FCA)诱导,治疗组用海藻酸钠支架、工程化软骨细胞及海藻酸钠复合工程化软骨细胞注入兔关节腔内治疗1个月,对照组给予等量生理盐水同法处理,观察各治疗组血清酶联免疫吸附试验(ELISA)和滑膜苏木素-伊红(HE)、RT-PCR结果.结果 E组Foxp3 mRNA表达量明显高于B组(P<0.05);E组RORγt mRNA表达量明显低于B组(P<0.05);各治疗组与B组相比,滑膜炎症反应均有所改善;E组外周血中转化生长因子(TGF)-β明显高于B组(P<0.05).结论 海藻酸钠复合软骨细胞可提高Foxp3 mRNA的表达、降低RORγt mR-NA的表达,这可能是其抗炎作用机制之一.

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2021/07/20

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光化学法诱导兔视网膜分支静脉阻塞模型的初步探讨

目的 探讨采用光化学法建立兔视网膜分支静脉阻塞(BRVO)模型的方法,观察模型的自然病程及造模后的病理改变.方法 健康成年新西兰兔共40只,分为3组,第1组8只进行连续观测,第2组24只,每个时间点6只分别进行单点观察,第3组8只为正常对照组.第1、2组均右眼造模,经兔耳缘静脉推注10％荧光素钠注射液(0.3 ml/kg)后,右眼在激光接触镜下,以能量100～300 mW,光斑直径100～300 μm,波长530 nm,持续时间0.2～0.5s,应用532激光距离视盘0.5个视盘直径(DD)外进行节段性光凝,光凝一侧或双侧分支静脉,每一静脉击射平均约30点.造模前后均行眼底彩色照相和荧光素眼底血管造影(FFA)检查,并分别在7、14、21和28 d行视网膜组织病理学检查.结果 (1)眼底彩照和FFA检查证实2组兔眼造模后均有BRVO表现,并且2组实验兔光凝血管阻塞程度表现大致相同,模型维持时间及血管再通时间也基本一致,个体差异中循环障碍维持时间各有不同,最长21d,最短7d,约81％能维持14～21 d.(2)组织病理学检查示在14d时,视网膜神经节细胞数:模型兔(2.83±1.17)个明显少于正常兔(12.33+8.07)个,t=2.480,P=0.02,差异有统计学意义;外核层细胞层数:模型兔(4.00+ 1.27)层少于正常对照组(5.83±0.75)层,t=4.166,P=0.000,有统计学意义.在其他时间点模型组基本同正常组.(3)总体上14d前模型兔眼视网膜形态结构改变、血栓形成及循环障碍性改变符合BRVO临床病理情况,21 d后逐渐恢复正常.结论 兔光化学法可建立与临床病理机制相似的、可靠的BRVO动物模型,造模操作方便,方法易于掌握和眼底观察.该模型的维持时间及病程演变,为BRVO的临床与基础研究提供了必要参考.

2020

2021/07/20

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NLRP3炎症小体在MS/EAE发病机制中的作用及其靶向治疗

多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)是由免疫细胞攻击中枢神经系统(central nervous system,CNS)而造成的一种自身免疫性疾病,其具有神经元脱髓鞘、神经胶质细胞增生和轴突损伤等病理特征[1].NLRP3炎症小体作为一种能识别病原体和危险信号的传感器,近年来被发现与许多自身免疫性疾病的发病关系密切[2].本文从NLRP3炎症小体激活的主要途径出发,综述了NLRP3炎症小体在MS及其动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发病中的作用以及靶向治疗研究进展.

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2021/07/20

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MST1通过促进PEPCK的表达调控小鼠肝脏糖异生

目的 探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制.方法 RT-qPCR检测MST1 mRNA在糖尿病模型db/db小鼠和对照db/m小鼠肝脏组织中的表达.通过腺病毒感染小鼠肝原代细胞,检测MST1过表达后肝细胞的糖输出能力.在HepG2细胞中,运用荧光素酶报告基因实验检测MST1对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)编码基因的启动子活性的作用.利用干扰腺病毒在小鼠肝原代细胞中敲低叉头盒转录因子O1(FOXO1),检测MST1过表达对PEPCK mRNA水平的影响.结果 MST1 mRNA在糖尿病db/db小鼠的肝脏组织中高表达(P<0.001).在小鼠肝原代细胞过表达MST1促进了葡萄糖的输出(P<0.05).在HepG2中,过表达MST1促进了PEPCK mRNA的表达(P<0.001)和启动子活性(P<0.01).进而,当敲低FOXO1表达后,MST1诱导PEPCK mRNA表达的作用消失.结论 MST1促进PEPCK表达参与调控小鼠肝脏糖异生依赖于FOXO1.

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2021/07/20

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关于建立子痫前期大鼠小鼠模型的研究进展

子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期独有的一种疾病,是导致孕产妇和围产儿发病和死亡的主要原因之一.其病因不明,终止妊娠是目前已知的有效治疗方法.随着社会的进步,人类对妊娠安全的要求逐渐增高,理想PE动物模型的建立无疑能为研究其病因、发病机制从而更好地预防或延缓疾病进展,降低母胎死亡率提高妊娠安全提供良好的基础和平台.大、小鼠因其经济、易获取、生存力强、妊娠周期短,所以被广泛应用于临床各大疾病动物实验中.参考国内外文献将PE大、小鼠模型归纳为子宫血流量减少、炎症免疫过度激活、血管内皮细胞损伤、血液高凝、基因修饰等模型,并就这类模型的构建方法及表型做一简要综述.

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2021/07/20

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