免疫性卵巢早衰模型鼠制备的时间

背景:研究已经证实抗透明带抗体可以加速卵母细胞的破坏和耗竭而致卵巢早衰.目的:探讨以透明带3多肽(pZP3)诱导BALB/c小鼠建立免疫性的卵巢早衰模型的时间.方法:6-8周龄的健康雌性BALB/c小鼠30只,随机分为免疫实验组(20只)和空白对照组(10只).实验组小鼠首次免疫注射时间为0周,给予0.15 mL免疫试剂注射双足底及下腹部皮下,每日晨阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期的变化;2周后给予0.15 mL免疫强化试剂皮下注射相同部位,第4周和第6周的第1天,分别注射免疫试剂或免疫强化试剂各1次(交替注射).在每次注射前采血用酶联免疫法测小鼠血清性激素;最后观察小鼠卵巢组织及子宫形态.结果与结论:①实验组小鼠初次免疫注射及注射后2周,2组间血清促卵泡生长激素及雌激素水平差异无显著性意义;注射后4周实验组血清雌激素水平明显低于对照组,但促卵泡生长激素水平差异无显著性意义;注射后6周实验组血清雌激素水平明显低于对照组(P<0.05),促卵泡生长激素水平明显高于对照组(P<0.01);②实验组小鼠卵巢间质纤维化程度较对照组明显,卵巢体积减小,子宫萎缩,小鼠原始卵泡、初级及次级卵泡数均显著低于对照组,闭锁卵泡数量高于对照组(P<0.05);③结论:75μg透明带3多肽诱导BALB/c小鼠,建立自身免疫性卵巢早衰疾病模型,免疫后6周即可达到良好的建模效果.

2020

2021/07/20

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双氢青蒿素对肝癌细胞氨基酸代谢的影响及机制研究

目的:考察双氢青蒿素(DHA)对人肝癌细胞Huh7、BEL-7402中氨基酸类代谢产物的影响,为阐明DHA参与肝癌细胞代谢的调控机制提供理论基础.方法:采用CCK-8法,测定不同浓度DHA(12.5、25、50、100μmol/L)作用24、48、72 h后对两种细胞活性的影响.将两种细胞分别分为对照组和给药组(DHA,25μmol/L),加入不含药或含药培养基后培养24 h,均平行操作3份.对各组细胞样品进行衍生化处理后,采用气相色谱联用质谱(GC-MS)法检测细胞中氨基酸代谢物含量变化,结合SIMCA-P软件分析和化合物谱库的比对,筛选出两种细胞中的差异代谢物;采用Metaboanalyst 4.0软件对差异代谢物进行通路富集分析.结果:与对照组比较,给药组Huh7细胞或BEL-7402细胞中谷氨酰胺、谷胱甘肽、苯丙氨酸、富马酸、牛磺酸等含量均呈下降趋势.上述两种细胞中分别筛选获得28、29个差异代谢物,两者的共同差异代谢物有10个,包括谷氨酰胺、谷胱甘肽、牛磺酸、富马酸、苯丙氨酸等;两者的差异代谢物分别富集到8、6条通路上,其共同富集通路为氨基酸-tRNA生物合成、天冬氨酸-丙氨酸-谷氨酸代谢、氮代谢、苯丙氨酸代谢、戊糖磷酸途径.结论:DHA能明显降低Huh7细胞和BEL-7402细胞的活性,并能显著降低细胞中谷氨酰胺、谷氨酸、谷胱甘肽、苯丙氨酸等的含量;其可能通过影响天冬氨酸-丙氨酸-谷氨酸代谢通路等机制来调控两种细胞的生长.

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2021/07/20

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通过对比NSG小鼠探讨正常免疫小鼠人结肠癌移植瘤模型的特点和意义

目的 比较NSG小鼠和正常免疫小鼠两种人结肠癌移植瘤模型的特点,为研究结肠癌发病机制和研制抗结肠癌新药提供更合适的模型.方法 将C57BL/6、NSG小鼠分别按移植物的不同分为细胞对照组、细胞-微载体复合物实验组.首先将人结肠癌HCT116细胞与新型微载体共培养,建立细胞-微载体复合物,然后采用皮下注射方式将其接种于小鼠背部,记录肿瘤生长曲线,成瘤率及镜下病理学等特点.结果 C57BL/6小鼠实验组均成瘤,成瘤率达80％,对照组均未成瘤;NSG小鼠实验组与对照组均成瘤,成瘤率达90％.C57BL/6小鼠与NSG小鼠相比,虽然成瘤速度慢,但镜下病理组织、免疫组化表现一致,均证实异型细胞为人源性结肠癌细胞.结论 相比NSG小鼠,借助新型微载体构建正常免疫小鼠人结肠癌移植瘤模型,更确切,真实地反映肿瘤发生、发展与患者免疫功能变化之间的内在联系,同时也为人结肠癌的精准治疗提供了新的动物模型.

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2021/07/20

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小鼠侧脑室下区基因表达的增龄性变化研究

目的 研究幼年期、成年期和老年期小鼠侧脑室下区(subventricular zone,SVZ)中基因表达的增龄性变化.方法 分别提取3周龄、6月龄和20月龄C57小鼠SVZ的mRNA,基于转录组测序及实时荧光定量PCR技术,检测SVZ中在不同年龄阶段的基因表达差异.结果 以幼年期小鼠为对照,成年期检测到253个差异表达的基因,老年期检测到519个,以成年期作对照,老年期检测到147个差异表达的基因.GO分析发现成年期小鼠与幼年期相比差异表达基因主要涉及营养和代谢,老年期小鼠与成年期相比主要涉及中枢神经系统神经元分化等.KEGG分析发现差异表达基因主要涉及通路为蛋白质消化吸收、神经活性配体-受体相互作用等.结论 该研究提供了不同年龄段SVZ转录水平基因变化的数据,为探讨SVZ的功能发育和退化,进一步治疗和抵抗神经衰老提供新的理论依据和方法.

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2021/07/20

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经皮冠状动脉球囊结合凝胶海绵联合栓塞法建立急性心肌梗死小型猪模型方法探讨

目的:通过经皮冠状动脉球囊结合凝胶海绵联合栓塞的方法,建立持久稳定的急性心肌梗死小型猪模型.方法:通过经皮冠状动脉介入成形术,将自制的栓子置入6头巴马小型猪冠状动脉左前降支第一对角支以下1 ～2 mm的位置进行冠状动脉血流的封堵.造模术同时进行冠状动脉造影及12导联心电图的检测.20 d后应用单光子发射型计算机断层(SPECT)心肌灌注显像检测梗死心肌的部位、范围和程度,并记录总体动物实验的成功率和存活率.结果:6头猪冠状动脉造影均显示栓塞处远端血流被阻断;10 min后4只猪出现ST段弓背向上抬高的急性心肌梗死特征性心电图改变,2只猪出现ST段下移型心肌缺血心电图改变.术后20d,SPECT心肌灌注显像结果显示,6只猪均于前壁和心尖部出现了不同程度、范围的心肌灌注缺损区,分别占整体左心室壁范围的46％、37％、27％、20％、47％和45％,精确验证了心肌梗死的部位和范围.6头动物建模成功率和存活率均为100％.结论:通过自制球囊结合明胶海绵制成的栓子,可以有效阻断冠状动脉血流,获得较为满意的小型猪心肌梗死模型.

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2021/07/20

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酒精灼烧致青脚麻鸡股骨头坏死造模方法的可行性分析

背景:目前股骨头坏死的病理机制尚不明确,且当前的股骨头坏死实验动物模型均有其不足之处.目的:使用青脚麻鸡建立一个简单、可靠、稳定并接近人体生物力学特征的股骨头坏死的动物模型.方法:成年青脚麻鸡24只,随机平均分成实验组和对照组.对青脚麻鸡任意选择一侧股骨头进行中心钻孔,其中实验组使用乙醇灼烧钻孔内骨组织后将原骨植入;对照组钻孔后直接将原骨植入;其对侧为未处理组不作手术处理.术后1个月行X射线检查和CT扫描检查,随后取股骨头进行大体观察,显微CT观察及病理切片染色观察.实验方案经徐州医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为AEC2018-020).结果 与结论:①所有青脚麻鸡均未出现异常死亡,术后1-3 d均能直立行走,无明显跛行;②X射线和CT显示实验组股骨头骨小梁不清晰且股骨头有塌陷,大体标本可见实验组股骨头表面不光滑且有股骨头塌陷,③microCT显示与对照组和未处理组相比,造模后实验组的骨小梁增粗,骨小梁数量减少,骨小梁间距增加,骨体积分数增加,差异均有显著性意义(P＜0.05);④病理切片染色显示对照组和未处理组形态接近,未有明显坏死征,但对照组软骨下血管数量较少,而实验组细胞排列紊乱,可见空骨陷窝等明显坏死征象;⑤结果说明,使用乙醇灼烧青脚麻鸡股骨头内骨组织可以用于建立典型股骨头坏死的动物模型,与人的股骨头坏死的病理特征接近.

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2021/07/20

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斑马鱼幼鱼整鱼石蜡切片制作

目的 探讨斑马鱼幼鱼整鱼的石蜡切片制作.方法 以4d斑马鱼幼鱼为材料,探讨使用不同固定剂和脱水剂的切片效果.结果 4％PFA过夜不适合幼鱼脑组织和肌肉固定,组织脆裂严重,但对肠道影响较小.Bouin's液适合幼鱼固定,后续使用叔丁醇脱水稍优于乙醇.Bouin's液固定的幼鱼脑组织脱水1 min,肌肉组织脱水4 min能获得良好的切片效果.结论 在优化条件下,制作的切片基本达到了切片完整,薄厚均匀,无褶无刀痕,裂痕;染色核质分明,红蓝适度,透明洁净等要求.可供需进行斑马鱼幼鱼石蜡切片的研究者参考.

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2021/07/20

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TRIM26在人和小鼠主要组织器官中的表达谱

目的 明确TRIM26在人和小鼠不同组织器官中的表达定位和水平.方法 表达定位研究采用免疫组织化学PV-9000二步法(非生物素),利用BioGPS数据库分析TRIM26在人体组织中的表达水平,RT-qPCR检测小鼠主要组织器官中TRIM26表达水平.结果 IHC的结果显示,TRIM26蛋白信号定位于细胞质和细胞核,其表达多见于上皮细胞.TRIM26蛋白在人和小鼠的食管鳞状上皮细胞、胃上皮细胞、小肠上皮细胞、结肠上皮细胞、胰岛细胞、脑胶质细胞、肾小管上皮细胞和肾小球细胞以及子宫内膜腺上皮细胞中的表达定位一致.另外,TRIM26分别在人体气管组织和小鼠脾组织上的相对表达量最高.结论 TRIM26在人和小鼠组织上的表达定位具有一致性,表达量略有差异.TRIM26在人和小鼠主要组织器官上的表达谱的明确,将为利用TRIM26条件性敲除小鼠解析TRIM26在不同组织器官的功能奠定了良好基础.

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2021/07/20

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早期皮下寄生多房棘球蚴的蛋白组学分析

目的 了解皮下寄生多房棘球蚴的蛋白质组特征.方法 每只BALB/c小鼠皮下多点注射约600只原头蚴,一月后分离皮下寄生的包囊,制备组织切片,HE染色,糖原染色,利用显微镜观察虫体形态,同时提取蛋白质并进行测序、GO基因功能分析和COG分析,最后利用Western blotting对部分蛋白质进行验证.结果 皮下寄生的多房棘球蚴呈半透明状,如绿豆大小,包囊内含有囊液.在光学显微镜下,可见包囊中含有子囊,囊中仅有少数原头蚴,且一些原头蚴头节上还带有小钩;囊壁糖原染色阳性,呈粉红色.测序共鉴定203种蛋白质,其中多种蛋白酶的表达水平很高,如磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、柠檬酸合酶等.在功能上,所鉴定的蛋白质主要富集在翻译后修饰、蛋白质转换和伴侣分子信号通路、能量合成与转换以及碳水化合物运输与代谢方面,而参与免疫应答、脂质运输与代谢等方面的蛋白质则较少.在丰度较高的前20种蛋白质中,多数为参与糖代谢过程的蛋白质.Western blotting结果显示,VCP、Enolase、14-3-3和β-actin在包囊蛋白中均有不同程度地表达,而GST不表达或表达水平非常低,这与测序结果基本一致.结论 研究结果表明,皮下寄生的多房棘球蚴在糖代谢和脂质代谢方面可能发生了明显地改变,这为探索包囊不育的机理提供了有价值的线索.

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2021/07/20

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腰椎间盘生物力学体内外研究的新进展

背景:腰椎间盘退变造成的一系列临床症状已经是影响人类健康的常见疾病.过去研究中指出在腰椎间盘退变的发生发展中,腰椎间盘生物力学改变起到重要作用.目的:简述腰椎间盘解剖学、组织学特性,总结近年来腰椎间盘生物力学的研究方法及进展.方法:通过输入“生物力学,腰椎间盘,动物标本,人类尸体模型,有限元分析,影像学、磁共振成像,biomechanics, Intervertebral disc, lumbar spine, finite element analysis, imaging, MRI, DFIS, DSXS”等关键词,利用计算机检索CNKI、万方、维普、PubMed、Elsevier和Web of Science数据库,通过阅读标题及摘要进行初步筛选,排除与主题相关度低的文献,最终共纳入67篇文献进行结果分析.结果 与结论:①腰椎间盘的生物力学研究目前主要分为体外研究和体内研究;②体外研究包括动物标本实验、人类尸体标本实验、有限元分析,体外实验设计灵活,操作性强,但实验对象脱离人体生理环境,材料的力学特性存在差异,需要经过长期不断验证,筛选出在人体的适用性;③体内研究主要通过影像学手段,实时记录椎间盘在体运动受力形态变化,真实可靠,但受影像技术发展的限制,需要合理运用.最新出现的双平面荧光成像系统以及高速动态立体射线照相系统在这一领域具有独特优势,被越来越多的人所重视.

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2021/07/20

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