创伤性神经瘤模型的构建及评价

背景:创伤性神经瘤是周围神经损伤的常见并发症,国内外通过创伤性神经瘤模型进行周围神经修复、再生的基础研究较少见.目的:建立创伤性神经瘤模型并进行鉴定.方法:实验方案经中国人民解放军总医院动物实验伦理委员会批准.选择15只8周健康SD大鼠,显微镜下暴露坐骨神经,用显微剪剪断股后皮神经以远1 cm处的坐骨神经,11-0显微线将神经近端缝合于周围肌肉上,远端神经反折后旷置,3周后使用超声和组织学验证神经瘤是否形成.结果与结论:①造模3周后,超声可见近端神经明显梭形膨大,为一低回声实质结节,不伴回声;②大体观察可观察到近端神经膨大,质稍硬,纤维结缔组织增生,与周围组织粘连;③苏木精-伊红染色可见瘤体内纤维组织增生,神经纤维杂乱生长,免疫荧光染色(S100、NF200)可见瘤体内许旺细胞和神经轴突不规则增生;④结果表明:实验成功构建了创伤性神经瘤模型.

2020

2021/07/20

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巨噬细胞S100A9/NF-κB/SAA3/miR-204环路对炎症相关性结肠癌发展影响的实验分析

目的 实验分析巨噬细胞S100A9/NF-κB/SAA3/miR-204环路对炎症相关性结肠癌发展影响.方法 对上海史莱克实验动物科技服务部提供的120只ICR小鼠的资料进行统计分析.结果 炎性肠粘膜上皮、不典型增生、结直肠癌中SAA3、S100A8、S100A9表达阳性率均显著高于正常肠粘膜上皮(P<0.05),不典型增生、结直肠癌中SAA3、S100A9表达阳性率均显著高于炎性肠粘膜上皮( P<0.05).S100A8/media、S100A9/media、pcDNA3.1/SAA3的穿透细胞数均显著多于Control、pcDNA3.1( P<0.05).结论 巨噬细胞S100A9/NF-κB/SAA3/miR-204环路对炎症相关性结肠癌发展影响显著.

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应用弹性蛋白酶诱导构建新型慢性阻塞性肺疾病合并骨质疏松症的动物模型

目的:建立并评价弹性蛋白酶诱导小鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)合并骨质疏松症模型.方法:24只健康雌性8周龄C57BL/6小鼠(重约18 g)随机分为3组,对照组予以气管内滴注生理盐水,实验1组和实验2组气管内滴注弹性蛋白酶,对照组和实验1组继续饲养8周后处死,实验2组继续饲养12周后处死.HE染色评估对照组和实验组小鼠肺组织与胫骨组织病理学改变.ELISA检测支气管肺泡灌洗液与血清相关炎症因子含量.Micro-CT检测小鼠股骨骨量相关参数.实时荧光定量PCR实验检测破骨与成骨相关基因表达情况.结果:肺组织病理显示实验组肺泡结构紊乱,肺泡壁变薄或断裂,肺泡腔扩大.肺泡灌洗液炎症因子IL-6与TNF-α较对照组明显升高(P＜0.001),血清炎症因子IL-1β与TNF-α较对照组明显上升(P＜0.001).实验组BV/TV(骨体积分数)、Tb.Th(平均骨小梁厚度)与Tb.N(平均骨小梁数)较对照组均明显降低(P＜0.05),实验组Tb.Sp(平均骨小梁分离度)和BS/BV(骨表面积分数)较对照组明显增加(P＜0.01).与对照组相比,实验组小鼠胫骨组织破骨相关标志基因表达增加(P＜0.05),成骨相关标志基因表达下降(P＜0.05).实验1组与实验2组结果均呈时间依赖.结论:该研究应用弹性蛋白酶成功构建COPD合并骨质疏松症模型,为今后探究COPD合并骨质疏松症的发病机制提供合适的动物模型.

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2021/07/20

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一例婴儿B型肉毒中毒的实验室诊断

目的 对2019年2月来自北京儿童医院1例疑似肉毒中毒的婴儿粪便样品进行实验室诊断,判定是否为肉毒毒素中毒.方法 按照GB 4789.12-2016稀释处理样品,利用动物实验鉴定肉毒毒素、接种增菌培养基观察变化、采用卵黄培养基进行分离纯化,扩增测序16S rRNA基因并进行序列比对,采用荧光定量PCR方法进行毒素基因分型.结果 粪便样本稀释后对小鼠进行腹腔注射,小鼠出现呼吸急促、腹式呼吸,并在4～6 h内死亡,呈现肉毒中毒典型症状.在卵黄培养基平板上分离到典型肉毒梭菌,镜检观察到芽孢形态,测得的16S rRNA基因序列与GenBank中公开的肉毒梭菌16S rRNA基因序列进行比对,相似率＞99％,荧光定量PCR检测显示B型毒素基因阳性,判定该婴儿为B型肉毒中毒.结论 此次实验按照国家标准和本实验室建立的荧光定量PCR方法进行鉴定,检测结果和诊断方案为我国婴儿B型肉毒中毒诊断提供参考,也为分析肉毒中毒地域性提供证据,为临床鉴定婴儿B型肉毒中毒提供参考案例.

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冠状病毒动物模型研究进展及2019-nCoV可能的易感小动物模型

建立高致病性冠状病毒动物模型对疫苗、抗体、药物、病毒致病机制研究意义重大.非人灵长类、雪貂、叙利亚仓鼠等动物均可用于建立冠状病毒的感染和疾病动物模型.不同动物模型能从不同层面模拟重现临床感染症状.然而,从适用性、经济性、易于获取等角度综合考虑,建立冠状病毒易感的小鼠模型,并快速提供数量充足的动物,对于冠状病毒疫情防控更有现实意义.本文简述了MERS-CoV、SARS-CoV以及新型冠状病毒(2019-nCoV)3种高致病性冠状病毒小鼠模型的研究进展.基于近日发表在Nature的研究成果,即SARS-CoV和2019-nCoV均利用hACE2受体感染宿主细胞推测,我们于2018年构建的hACE2-KI/NIFDC人源化小鼠模型有望用于2019-nCoV的相关研究.

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2021/07/20

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小鼠不同组织冰冻切片技术探讨

目的 探讨实验动物小鼠不同组织冰冻切片制作的方法与技巧,提高冰冻切片质量,更好地服务于单抗药物非临床安全性评价.方法 采用德国徕卡CM1950恒温冷冻切片机,对健康NIH小鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织进行取材、包埋、冰冻切片、HE染色、封片.结果 切片无褶皱、无刀痕、无破损,镜下组织无过多冰晶,细胞形态清晰,细胞核和细胞质颜色分明,染色良好.结论 在制作冰冻切片时,应该从取材、包埋、速冻、温度选择、恒温冷冻切片等各个环节进行严格控制,但是,不同组织根据自身特点会存在差异,应区别对待.此外,在掌握关键性技术要点的同时还应该具有高度的责任心和耐心,制作出高质量的冰冻切片,才能更好地服务于单抗药物非临床安全性评价工作.

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3D打印多孔矿化胶原-硫酸钙仿生组织工程骨修复兔股骨髁包容性骨缺损的实验研究

目的 探讨3D打印多孔矿化胶原-硫酸钙仿生组织工程骨(3D printing calcium sulfate hemihy-drate/mineralized collagen,3D-CSH/nHAC)对包容性骨缺损的修复能力和成骨效果.方法 水热法制备半水硫酸钙;传统模具方法制备矿化胶原-硫酸钙仿生组织工程骨(CSH/nHAC);采用3D技术制备新型组织工程骨(3D-CSH/nHAC),扫描电镜观察人工骨表面微观形态.选取新西兰白兔18只(由解放军总医院动物中心提供),雄性10只,雌性8只,兔龄15～18个月,体重2.5～3.0kg.随机分为三组,每组6只:A组,空白对照组;B组,CSH/nHAC组;C组,3D-CSH/nHAC组.制作临界性股骨髁骨缺损模型,分别植入相应修复材料.术后4、8、12周分批处死动物,通过大体观察、X线、Micro-CT及组织学观察骨缺损处修复效果.结果 扫描电镜示传统组织工程骨为棒状硫酸钙与不规则颗粒状矿化胶原的镶嵌复合结构;3D-CSH/nHAC具有多孔结构,大孔结构完整,孔隙之间壁较薄,孔孔之间相互交通.术后4、8、12周X线检查可见C组的骨密度高于其他两组,骨缺损修复较好;术后4、8、12周Micro-CT检查可见C组骨缺损处有较多新生骨组织生成,修复明显好于其他两组.术后组织学检查:C组术后1个月可见小片状类骨质出现,植入材料开始降解,术后3个月时新生骨呈现片状结构,3D-CSH/nHAC几乎完全降解,骨缺损处成骨量明显优于B组和C组.结论 临界性包容性骨缺损不能自我修复,可作为研究骨缺损的模型;3D-CSH/nHAC 骨组织工程修复材料修复骨缺损能力优于传统组织工程材料,是一种有前景的骨缺损修复材料.

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2021/07/20

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脂蛋白SA2275抗体治疗金黄色葡萄球菌脑脓肿的实验初探

目的 探讨脂蛋白特异性抗体通过血脑屏障及其在抑制金黄色葡萄球菌脑脓肿形成中的作用.方法 利用大肠埃希菌表达并纯化重组金葡菌脂蛋白SA2275,制备特异性小鼠多克隆抗体(anti-SA2275).制作金葡菌感染脑脓肿模型,利用ELISA法检测经腹腔注射的anti-SA2275在小鼠脑组织中的滴度,评估抗体通过血脑屏障的能力;再利用梯度稀释细菌计数法检测脑脓肿中的细菌载量,对脑脓肿进行连续病理切片检测脑脓肿的大小,评价抗体anti-SA2275治疗金葡菌脑脓肿的效果.结果 成功获得高纯度SA2275重组蛋白;免疫小鼠获得anti-SA2275,效价为1∶51 200;anti-SA2275注射金葡菌脑脓肿模型小鼠后,在动物脑组织中检测到抗体的存在;治疗组小鼠脑脓肿大小和菌载量显著低于阴性对照组.结论 在金葡菌感染小鼠所致的脑脓肿形成过程中,脂蛋白SA2275特异性抗体可以通过血脑屏障分布至脑组织,显著抑制脑脓肿的形成及细菌的定植,具有治疗金葡菌脑脓肿的应用前景.

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基于中西医临床病证特点的功能性消化不良动物模型分析

基于功能性消化不良(FD)的中西医临床病证特点,对现有FD动物模型与临床标准吻合度分析评价,为完善FD动物模型提供思路和参考.通过罗列中西医消化不良的临床表现和诊断标准,符合西医临床诊断标准主要1项赋值11.7％,次要5％,符合中医诊断标准主证1项为15％,次证5％,对现有FD动物模型评分.分析结果发现高吻合度的有“高脂饲料喂养+番泻叶煎剂灌胃+束缚+游泳”联合干预,此法基本吻合FD中西医临床病证特点,不足在于造模因素偏多,缺乏控制可能诱发FD动物模型偏离.一般吻合度的有“灌胃碘乙酰胺联合小平台站”“束缚”“夹尾刺激”,低吻合度的有“灌胃碘乙酰胺”“胃部植入电极”,以上方法均在一定程度上模拟出FD特点,但因素单一缺乏中医证候的体现.因此,联合运用多种单因素造模法,着重开发利用传统中药泻下药作造模药,控制造模进程,尝试制定一套FD动物造模期内各种干扰因素的时间部署表,不断优化动物模型评判标准,是今后完善FD模型的研究方向.

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2021/07/20

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特异性能谱CT评估阿西替尼抗兔VX2肝肿瘤血管生成效果

目的 观察特异性能谱CT增强扫描评估阿西替尼抗兔VX2肝肿瘤血管生成疗效的价值.方法 将40只VX2瘤兔随机分为实验组(25只,灌胃给予阿西替尼)和对照组(15只,灌胃给予等量生理盐水),干预时间均为14天.对实验组行一站式灌注联合能谱CT扫描,对照组依次行能谱动脉期增强扫描和灌注CT扫描.重建基于实验组灌注CT时间-强度曲线所获肝肿瘤对比度最大时的能谱图像,以之作为对照组增强扫描时间;比较实验组不同时相肝肿瘤灌注参数与均一化碘浓度(N IC)相关系数之间的差异.采用Spearman相关性分析观察实验组血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)表达与灌注参数及NIC间的相关性及相关系数间差异.结果 实验组肝肿瘤对比度最大时间为(18±4)s,可使对照组73.33％(11/15)肝肿瘤达到最大对比度.该时间点实验组血流量(BF)、血容量(BV)及肝动脉分数(HAF)与NIC均呈正相关,除BV外,各相关系数与各时相相应最大相关系数差异无统计学意义(P均＞0.05).实验组BF(r=0.828、P=0.008)及NIC(r=0.820、P=0.010)与VEGFR-2呈正相关,PS与VEGFR-2呈负相关(r=-0.782、P=0.010),且差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肿瘤特异性和个体特异性能谱CT动脉期增强可评估阿西替尼抗兔VX2肝肿瘤血管生成效果,能力与灌注CT相当.

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2021/07/20

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