丁苯酞对路易体病小鼠认知改善作用的研究方案

目的:检测丁苯酞对路易体病小鼠认知功能的影响,在认知行为学改善的前提下探索其作用机制.方法:实验分为3组,即Con组、α-synuclein A53T突变的转基因小鼠组(A53T组)和NBP组(A53T突变的转基因小鼠+NBP),每组10只12月龄小鼠.NBP组腹腔注射NBP(0.2 ml/天,持续14天),Con组和A53T组腹腔注射生理盐水(0.2 ml/天,持续14天),NBP组腹腔注射NBP(0.2 ml/天,持续14天),通过旷场、条件恐惧、转棒、嗅觉检测等行为学测试.电镜观察小鼠线粒体、突触形态变化,显微镜计数小鼠黑质细胞数目,应用免疫组化检测小鼠纹状体及黑质的TH细胞以及α-synuclein含量变化.Western Blot:蛋白质印记检测线粒体自噬相关蛋白,融合分裂蛋白的变化.

2020

2021/07/20

查看

伤寒沙门菌外膜蛋白YncD的重组表达、纯化及其免疫保护作用观察

目的 通过基因重组表达方法制备伤寒沙门菌外膜蛋白YncD,观察其免疫保护效果.方法 通过PCR方法扩增伤寒沙门菌Ty2野生株的外膜蛋白YncD编码基因,构建原核表达载体pET28a-yncD,并测序鉴定.表达载体转入大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白,并通过亲和层析和离子交换柱进行纯化.获得的重组蛋白免疫接种小鼠,以Ty2株进行攻击,观察重组蛋白的免疫保护效果.结果 经DNA测序鉴定,pET28a-yncD原核表达重组载体构建成功,其在原核表达系统中表达量高,产物蛋白相对分子质量约为79 000,与预期相符.表达产物经亲和层析和离子交换柱纯化后,得到高纯度重组YncD蛋白.小鼠经重组YncD免疫接种后,可抵抗致死剂量的毒株攻击.结论 成功构建伤寒沙门菌外膜蛋白YncD基因重组原核表达系统,并获得高纯度重组YncD蛋白,动物实验初步显示重组蛋白具有良好的免疫保护作用,为进一步的免疫保护效能评价奠定基础.

2020

2021/07/20

查看

脑淀粉样血管病显像剂Al18F-PEG-芳基苯并噻唑衍生物的合成及评价

目的 设计合成聚乙二醇(PEG)链修饰的Al18F标记的芳基苯并噻唑衍生物,作为靶向β-淀粉样蛋白(Aβ)的脑淀粉样血管病(CAA)显像剂,并对其活性及生物性质进行初步评价.方法 以2-(4-(二甲氨基)苯基)苯并噻唑-5-酚为起始原料,经过Williamson反应、溴代反应、偶联反应、螯合反应制得Al19F-PEG-9和Al19 F-PEG-10;在水溶液中,通过“一锅两步”的螯合反应制得放射性产物Al18 F-PEG-9和Al18 F-PEG-10;放射配基体外竞争结合试验测试目标化合物对Aβ1-42聚集体的亲和力;动物分布实验测试目标化合物的体内药代动力学性质.结果 成功制备了PEG链修饰的Al18/19F标记的芳基苯并噻唑衍生物Al18/19F-PEG-9和Al18/19F-PEG-10,稳定氟化合物的结构经1H-NMR和MS谱确证,放射性氟化合物的结构经HPLC确证;体外活性测试结果表明,目标化合物对Aβ1-42聚集体具有中等亲和活性[K值分别为(75.3±31.5) nmol· L-1和(82.4±19.8) nmol·L-1];初步体内动力学分布结果显示,该类显像剂具有合适的初始脑摄取值(brain2min=0.17、0.24％ID/g)和快速的血浆清除率(plasma clearance,CL)(blood2min/60 min=36、61),而且与同类显像剂相比,肝脏摄取有一定降低,清除速率加快.结论 PEG链的修饰有效改善了显像剂的体内性质,Al18F-PEG-9和Al18 F-PEG-10具有成为用于CAA诊断的Aβ显像剂的潜力.

2020

2021/07/20

查看

表没食子儿茶素没食子酸酯通过TLR4/Myd88信号通路改善失血性休克大鼠肺脏损伤

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对失血性休克大鼠炎症反应的抑制作用,探讨TLR4/Myd88信号通路的作用机制.方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham)、失血性休克(Hematogenic shock,HS)组、EGCG治疗组;HS和EGCG组大鼠均采用35％放血法建立HS模型,EGCG组于HS发生后腹腔注射EGCG(50mg/Kg).HS发生4h后处死各组大鼠,HE染色观察肺组织病理学变化,ELISA检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度变化,Western blot及qPCR检测TLR4/Myd88信号通路相关蛋白表达情况.结果 大鼠HS组,肺组织损伤严重,病理学可见肺间隔增宽,肺泡萎陷,大量炎性细胞浸润,肺功能损伤严重,动脉血气分析提示PaCO2明显升高,PaO2明显降低,血清炎性因子TNF-α、IL-6水平升高,IL-10水平降低;EGCG干预后,大鼠肺组织病理学形态和肺功能明显得到改善,TNF-α、IL-6,PaCO2水平明显降低,IL-10、PaO2水平明显升高,EGCG下调肺组织中TLR4、Myd88、NF-κB水平表达.结论 EGCG明显改善HS大鼠肺功能及肺组织损伤,与调控TLR4/Myd88信号通路抑制大鼠炎性反应相关.

2020

2021/07/20

查看

山茱萸炮制前后血清中移行成分差异分析

目的:分析山茱萸炮制前后血清中移行成分的差异,从血清药物化学的角度揭示山茱萸炮制机理.方法:将山茱萸与制山茱萸水提液动物口服给药后制备含药血清,建立并分析比较空白组、山茱萸组和制山茱萸组大鼠血清HPLC特征图谱,确定山茱萸炮制前后血清移行成分差异,并进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)分析.结果:与空白组相比,山茱萸组新增6个色谱峰,制山茱萸组新增5个色谱峰,两给药组共有色谱峰为11号、12号、13号色谱峰,其中11号和12号色谱峰峰面积存在显著性差异;S-1、S-2和S-3号色谱峰为山茱萸组特有,Z-1和Z-2号色谱峰为制山茱萸组特有.PCA和PLS-DA分析结果显示,山茱萸和制山茱萸组均出现明显的聚类,且两组间分离明显.结论:山茱萸炮制前后血清移行成分存在量与质的显著差异.

2020

2021/07/20

查看

癌细胞膜修饰纳米载药体系的构建及其在乳腺癌治疗中的应用

目的 制备一种癌细胞膜修饰的仿生纳米靶向药物,并探讨其在乳腺癌治疗中的作用.方法 采用薄膜水化法制备药物乳糖多柔比星包载多柔比星(lac-DOX/DOX),同时提取小鼠乳腺癌细胞4T1的细胞膜,通过超声法将细胞膜包覆在lac-DOX/DOX外面,制备出lac-DOX/DOX@4T1m.测量其粒径、电位并通过透射电子显微镜观察lac-DOX/DOX@4T1m的形貌;通过凝胶电泳对4T1细胞膜上蛋白质成分进行分析;通过体外细胞摄取实验和小动物活体成像实验评价药物在体内外对同源癌细胞的靶向性;构建4T1荷瘤Balb/c小鼠模型,对lac-DOX/DOX@4T1的抗肿瘤效果及生物安全性做出评价.结果 成功制备lac-DOX/DOX@4T1m仿生纳米药物,平均粒径为(204.8±13.0) nm,在电镜下呈规则球状结构,且蛋白质完好地保留在细胞膜表面;细胞摄取实验和小动物活体成像实验结果显示,lac-DOX/DOX@4T1m对4T1细胞有靶向性;药效实验结果显示,lac-DOX/DOX@4T1m能更有效地抑制肿瘤生长,同时对肝功能的损伤显著降低.结论 本实验成功制备了一种仿生纳米药物,提高了对肿瘤的靶向性及治疗效果,降低了多柔比星的毒副作用,提高了用药安全性.

2020

2021/07/20

查看

基于斑马鱼模型的交泰丸安全性评价

目的:以斑马鱼胚胎为研究对象,观察交泰丸水提物对斑马鱼胚胎的生长发育毒性,心脏毒性及肝肾毒性,为交泰丸临床安全合理用药及新产品开发提供参考.方法:生长发育及心脏毒性实验以受精后12 h(hpf)发育正常的斑马鱼胚胎作为模型动物,以125,250,500 mg· L-1交泰丸水提物培养上述胚胎,于受精后72 h(hpf)观察半数致死量及药物对胚胎心率及心脏形态学的影响;肝肾毒性实验以受精后72 h(hpf)发育正常的斑马鱼幼鱼作为模型动物,以125,250,500 mg·L-1交泰丸水提物培养上述胚胎,于受精后7 d(dpf)观察半数致死量及药物对斑马鱼幼鱼形态学改变,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性和肌酐含量.结果:生长发育毒性实验中空白组斑马鱼胚胎发育正常,心脏发育完好,心跳均匀有力.交泰丸水提物对斑马鱼胚胎72 h的半数致死量(LD50)为1 023 mg·L-1.与空白组胚胎比较,250,500 mg·L-1交泰丸水提物组可以观察到胚胎头部变小,体长变短(P＜0.05),眼睛半径减小(P＜0.05),可见显著心包水肿,心率显著降低(P＜0.01),静脉窦-动脉球(SV-BA)间距明显增大(P＜0.05),心房、心室面积均明显减小(P＜0.05),瓣膜间距(AV channel)距离显著变大(P＜0.01),入血口距离显著变小(P＜0.01).急性毒性实验中,交泰丸水提物对斑马鱼幼鱼72 h的LD50为1 067 mg·L-1;与空白组比较,交泰丸水提物可明显降低斑马鱼幼鱼体内ALT活性(P＜0.05).结论:该实验发现交泰丸具有明显胚胎发育毒性,主要表现为生长发育延缓及严重的心脏毒性,对孕妇、哺乳期妇女及心脏病患者临床用药时应予以高度重视.

2020

2021/07/20

查看

山豆根醇提取物干预TGF-β1/Smad通路抑制兔耳增生性瘢痕的机制

目的:研究山豆根醇提取物对兔耳部增生性瘢痕组织中转化生长因子-β1(TGF-βl)和Smad3表达的影响,探讨山豆根醇提取物改善增生性瘢痕的作用与机制.方法:通过损伤新西兰大耳白兔耳内侧皮肤建立兔耳增生性瘢痕模型.49只大耳白兔随机分为空白组、模型组,山豆根醇提取物高、中、低剂量组(2.0,1.0,0.4 g·kg-1),积雪苷软膏组(5 mg·kg-1)以及复方肝素钠尿囊素凝胶组(20 mg·kg-1),7只/组.除空白组外,其余各组在模型建立后分别采用相应的药物涂抹于兔耳增生性瘢痕处,1次/日,连续给药42 d.实验结束后取耳部瘢痕组织,采用苏木素-伊红(HE)染色观察兔耳瘢痕组织病理改变并测定瘢痕增生指数;分别采用免疫组化,蛋白免疫印迹法(Western blot)以及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测瘢痕组织中TGF-β1和Smad3蛋白及mRNA的表达.结果:与空白组比较,模型组动物耳瘢痕组织病理显示增生明显,增生指数显著增加(P＜0.01);同时瘢痕组织中TGF-β1和Smad3表达也显著升高(P＜0.01);与模型组比较,山豆根醇提取物中、高剂量组耳部瘢痕组织病理结构明显改善,瘢痕组织TGF-β1和Smad3表达及增生指数明显下降(P＜0.05,P＜0.01),山豆根醇提取物各剂量组TGF-β1和Smad3蛋白与mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论:山豆根醇提取物可能通过降低瘢痕组织中TGF-β1和Smad3表达,抑制TGF-β1/Smads信号转导通路发挥抑制增生性瘢痕的疗效,这为山豆根治疗增生性瘢痕的临床应用提供了实验基础.

2020

2021/07/20

查看

NLRP3炎症小体激活在太赫兹暴露所致小鼠皮肤炎症中的作用

目的 研究太赫兹(terahertz,THz)辐射暴露对小鼠皮肤组织可能的损伤影响,探讨太赫兹暴露致皮肤无菌性炎症的潜在机制.方法 采用C57BL/6J小鼠为实验动物模型,使用频率为0.22 THz的太赫兹辐射局部暴露小鼠皮肤组织,太赫兹峰值功率密度为25、80、160 mW/cm2,占空比1:5,暴露时间5 min和10 min.暴露后观察动物皮肤炎症因子释放、氧化应激反应和NLRP3炎症小体激活.并通过Caspase-1抑制剂,探讨NLRP3炎症小体激活在太赫兹辐射致皮肤炎症中的作用.结果 160 mW/cm2太赫兹辐照10 min可导致小鼠皮肤氧化应激反应,并引起皮肤组织内IL-1β、IL-6和PGE2含量升高(P＜0.05).80 mW/cm2和160 mW/cm2暴露10 min均可导致皮肤组织NLRP3炎症小体激活,而Caspase-1抑制剂则可显著降低皮肤组织炎症因子水平(P＜0.05).结论 太赫兹电磁辐射暴露能够引起小鼠皮肤氧化应激反应和无菌性炎症,NLRP3炎症小体激活则介导了太赫兹暴露所致的皮肤组织炎症,并可能与氧化应激有关.

2020

2021/07/20

查看

IL-38减轻关节炎大鼠炎症反应及对NF-κ B/AP-1信号通路的影响

目的 探讨IL-38对胶原诱导性关节炎大鼠炎症反应的保护作用及对NF- κ B/AP-1信号通路表达的影响.方法 SPF级SD大鼠30只,随机分为3组,即正常对照组(CON)、CIA模型组(CIA )、CIA+IL-38(5ng/g)组(IL-38),CIA组、IL-38组采用大鼠尾根部皮下注射牛II型胶原乳剂建立CIA大鼠模型;IL-38组于初次免疫后第24天起每天注射重组鼠IL-38 (20-152) 5 ng/g,连续给药10 d;观察大鼠后足及关节情况,ELISA法检测相关炎症因子IL-6、IL-10、IL-23表达情况,免疫荧光、Westernblot及qRT-PCR检测NF-κB和AP-1的表达.结果 CIA组大鼠关节肿胀明显,血清总IL-6、IL-23的表达水平升高,1L-10降低(P＜0.05);经过IL-38治疗后,大鼠关节肿胀程度较CIA组明显减轻,血清中IL-6、IL-23的表达水平下降,IL-10则升高(P＜0.05),同时IL-38下调滑膜组织中NF-κB、AP-1的表达水平.结论 IL-38减轻胶原诱导关节炎大鼠炎症反应,与介导NF-κ B/AP-1信号通路相关.

2020

2021/07/20

查看