潜在的神经侵袭特性可能是新型冠状病毒肺炎患者呼吸窘迫的原因之一

继SARS冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)之后,另一种高致病性冠状病毒SARS-CoV-2自2019年12月开始在中国引起流行性重症肺炎(COVID-19),并且造成世界性恐慌.此次SARS-CoV-2与SARS-CoV具有高度同源序列和相似的发病机制,并且能够利用SARS-CoV细胞受体侵入宿主.SARS-CoV受体除了存在于呼吸道黏膜和肺泡上皮之外,还广泛存在于神经元的细胞膜上,因此SARS-CoV-2很可能具有潜在的神经侵袭特性.临床资料表明,COVID-19患者最典型的症状是呼吸窘迫,需要重症监护的患者大多数不能自主呼吸.除此之外,COVID-19患者还出现头痛、恶心和呕吐等神经症状.现有研究数据表明,神经侵袭特性是β冠状病毒的一个共同特性,而且动物实验已经表明冠状病毒能够通过呼吸道和肺内的化学和机械感受器侵入周围神经并到达脑干,进而破坏与呼吸有关的感觉和运动神经元.因此我们推测SARS-CoV-2的神经侵袭特性很可能是重症患者出现呼吸窘迫的原因之一.认识SARS-CoV-2潜在的神经侵袭特性对于预防和治疗COVID-19引起的呼吸窘迫具有重要的指导意义.

2020

2021/07/20

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“五味甘露”药液浸浴对缺血脑卒中大鼠记忆功能影响研究

目的:观察五味甘露药液浸浴对缺血脑卒中大鼠记忆功能的影响.方法:采用Longa线栓法建立右侧大脑中动脉栓塞模型,神经功能评分达到2分～5分的大鼠纳入实验.将纳入实验的大鼠随机分为模型组、发酵优选组、煎煮组、热水组,各组施加浸浴干预,并进行神经行为学评分、Morris水迷宫实验测试,采用荧光定量PCR测定大鼠海马组织中VEGF、BDNF的表达.结果:①发酵优选组7d、14d的大鼠神经行为学评分明显小于模型组(P＜0.05),动物行为障碍减轻;发酵优选组14d的大鼠神经行为学评分明显小于热水组(P＜0.05).②煎煮组、发酵优选组的潜伏期明显短于模型组大鼠、热水组(P＜0.05);14 d发酵优选组大鼠的潜伏期短于煎煮组(P＜0.05).③发酵组大鼠的总路程短于模型组和热水组(P＜0.05).④7d时煎煮组、发酵组大鼠穿越站台次数多于模型组、热水组、煎煮组;14d时发酵组的大鼠穿越站台次数多于模型组、热水组、煎煮组(P＜0.05).⑤发酵组大鼠的BDNF表达高于模型组;热水组、煎煮组、发酵组大鼠VEGF的表达均高于模型组(P＜0.05),且发酵组VEGF的表达高于热水组(P＜0.05).结论:五味甘露药液浸浴可改善缺血性脑卒中大鼠记忆功能,并可上调缺血性脑卒中大鼠海马组织VEGF、BDNF的表达,发酵的五味甘露药液对缺血脑卒中大鼠记忆功能的疗效较好.

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2021/07/20

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粪菌移植对非酒精性脂肪肝大鼠肠黏膜的保护作用

目的 探讨粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肠黏膜屏障的保护作用.方法 健康雄性SD大鼠30只,随机分为3组:正常对照组(control group,C组)10只,予正常饮食;高脂模型组(model group,M组)10只、粪菌移植治疗组(treatment group,T组)10只,M组和T组均予高脂饮食.T组予粪菌液灌胃2 mL/次,隔日1次,粪菌液灌胃的前一天晚上及当天早上均予奥美拉唑镁肠溶片灌胃;C组及M组同时予奥美拉唑及生理盐水灌胃.喂养12周后实验结束,测定血中TG、ALT、AST水平;苏丹黑B染色观察肝脏病理学变化;取回肠末端肠组织行HE染色及扫描电镜观察肠黏膜结构变化.结果 与M组大鼠相比,T组血清TG、ALT、AST水平降低,差异有统计学意义(均P＜0.05).T组大鼠肝脏苏丹黑B染色可见肝细胞内脂肪沉积明显减少,脂肪变性程度较M组减轻.T组大鼠肠组织HE染色肠绒毛轻度水肿,排列较整齐、紧密.扫描电镜中可见T组大鼠肠绒毛形态较饱满,排列比较紧密,微绒毛之间的间隙变小.结论 粪菌移植能改善肝功能,减轻肝脏脂肪变,降低肠道通透性,改善肠黏膜屏障功能.

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2021/07/20

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隐丹参酮改善小鼠化疗性肠黏膜炎的作用及机制研究

研究隐丹参酮改善小鼠化疗性肠黏膜炎(chemotherapy-induced intestinal mucositis,CIM)的活性及作用机制.腹腔注射5-氟尿嘧啶及伊立替康制备CIM小鼠模型;灌胃混合抗生素(甲硝唑、万古霉素和青霉素)建立伪无菌小鼠模型.动物福利和实验过程均遵循中国医学科学院药物研究所动物伦理委员会的规定.观察动物体重、疾病活动指数(disease activity index,DAI)及肠黏膜损伤程度,确定隐丹参酮对CIM小鼠的改善作用.测定血清炎性因子、总甘油三酯(total triglycerides,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)含量及脂肪酶活性,进行小鼠粪便菌群多样性分析、粪便菌群与环境因子相关性分析,探索隐丹参酮改善小鼠CIM的作用机制.结果 显示:隐丹参酮显著降低CIM小鼠DAI及血清中白介素6(interleukin 6,IL-6)、白介素11 (interleukin 11,IL-11)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)及二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)含量.此外,隐丹参酮显著增加CIM小鼠血清中TG含量,而降低血清中TC含量及脂肪酶活性.伪无菌造模组小鼠CIM发生率显著降低,血清炎性因子及TG/TC比例与正常对照组无显著差异.CIM小鼠粪便菌群多样性及组成结构与正常小鼠相比差异显著,隐丹参酮可有效恢复CIM小鼠粪便菌群至接近正常状态,并显著增加g_norank_f_Muribaculaceae丰度.相关性分析显示:g_Ruminiclostridium及g_norank_f_Muribaculaceae的相对丰度与血清TG含量呈正相关,而与血清中DAO、MPO、IL-6、TC含量及脂肪酶活性呈负相关.隐丹参酮显著增加CIM小鼠粪便中g_norank_f_Muribaculaceae和g_Ruminococcaceae_UCG-014丰度.本研究报道了隐丹参酮可有效改善5-氟尿嘧啶及伊立替康诱导的小鼠肠黏膜炎,这一作用与其对肠道菌群、炎性因子及血脂的调控密切相关.

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2021/07/20

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灯盏花素对TBI小鼠学习记忆能力及海马胶质细胞增生的影响

目的 探讨灯盏花素对创伤性脑损伤后小鼠学习记忆能力及海马胶质细胞的影响.方法 两月龄CD1雄性小鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、灯盏花素低剂量组[12 mg/(kg·d)]、灯盏花素高剂量组[48 mg/(kg·d)].采用多重闭合性颅脑轻度撞击法建立创伤性脑损伤模型,创伤后灯盏花素组立即按相应剂量腹腔注射,空白对照组和模型组腹腔注射磷酸盐缓冲液.连续给药7 d后,各组随机取4只小鼠制作损伤区切片进行免疫荧光染色检测小胶质细胞和星形胶质细胞,给药14 d后对剩余小鼠进行学习记忆测试.结果 与空白对照组相比,模型组小鼠的巴恩斯迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P＜0.05);Morris水迷宫实验平台区穿越次数明显减少(P＜0.05);海马区的小胶质细胞显著增多(P＜0.01).与模型组比较,灯盏花素低剂量组与高剂量组巴恩斯迷宫的逃避潜伏期均显著缩短(P＜0.05或P＜0.01),Morris水迷宫实验平台区穿越次数显著增加(P＜0.01或P＜0.01);低剂量组海马CA1与DG区之间的小胶质细胞明显减少(P＜0.05).结论 灯盏花素可以改善创伤性脑损伤后小鼠学习记忆能力下降的状况,可能与其抑制小胶质细胞的过度增殖有关.

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2021/07/20

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辅酶Q10脂质体的制备及其抗紫外线损伤的作用

目的 研究辅酶Q10脂质体的制备及其抗紫外线损伤的作用.方法 采用乙醇注入法制备辅酶Q10脂质体.然后进行动物实验,将32只SPF级小鼠随机分成正常(CON)组、模型(MOL)组、辅酶Q10脂质体(COQ)组、二氧化钛(TiO2)组,每组各8只.CON组小鼠脱毛后不作任何处理,其余组小鼠脱毛后每天涂抹相应霜剂并进行紫外线照射,其中MOL组涂抹空白霜剂,COQ组涂抹辅酶Q10脂质体,TiO2组涂抹TiO2霜剂,照射剂量为最小红斑量,实验持续8周,结束后进行小鼠皮肤病理学观察与丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、基质金属蛋白酶(MMP-1)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量测定.结果 辅酶Q10脂质体最优处方为温度60℃、水相pH 7.7、辅酶Q10百分比0.9％、卵磷脂百分比1.6％,其包封率为44.7％,且脂质体大小均匀,成球状.MOL组小鼠皮肤组织的MDA含量与MMP-1相对表达量均高于CON组,SOD含量低于CON组,差异有统计学意义(P＜0.05);COQ组小鼠皮肤组织的SOD含量高于MOL组,MMP-1相对表达量低于MOL组,差异有统计学意义(P＜0.05);TiO2组小鼠皮肤组织的MDA含量低于MOL组,差异有统计学意义(P＜0.05);COQ组小鼠皮肤组织的GSH-Px含量高于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 制备的辅酶Q10脂质体大小均匀,且具有抗小鼠皮肤紫外线损伤的作用.

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2021/07/20

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基于脑-肠互动功能探讨痛泻要方治疗腹泻性肠易激综合征机制的研究进展

腹泻型肠易激综合征(IBS-D)是临床上常见的功能性胃肠病之一,发病机制多样,因其发作突然、缠绵难治,严重影响了患者的工作生活.IBS-D患者因病情反复难愈,影响生活常伴随焦虑、抑郁等精神症状.其焦虑,抑郁的状态亦可影响内脏感受,增加肠道敏感性,躯体症状与精神症状相互影响,加重病情.IBS-D的主要发病机制如内脏高敏感性、胃肠动力紊乱、肠道感染、社会心理因素等均与脑肠互动紊乱相关.IBS-D患者长期精神慢性应激状态易诱发脑肠互动功能紊乱,脑肠互动是脑肠轴调控胃肠功能的主要调控方式,以脑肠轴及脑肠肽为物质基础进行脑与肠之间的交互作用.中医认为IBS-D患者的主要证型为肝郁脾虚证,肝郁则情志不畅,而脑内各类神经递质的分泌及含量与情绪密切相关.痛泻要方为临床治疗IBS-D肝郁脾虚证的常用基础方,具有柔肝补脾,祛湿止泻的功能,临床疗效显著.目前已有多项动物实验、临床研究探讨痛泻要方治疗IBS-D的机制及其对脑肠互动功能及脑肠肽含量的影响,但未将肝主疏泄与脑肠互动联系起来.笔者以肝主疏泄与脑肠互动的相关性为切人点,基于脑肠互动紊乱探讨痛泻要方治疗IBS-D的机制,阐释三者之间的相关性.笔者综合近5年来痛泻要方治疗IBS-D及痛泻药方与脑肠互动关系的研究文献,探讨痛泻要方通过影响脑肠轴及脑肠肽来治疗IBS-D.

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H9N2亚型禽流感病毒二重荧光RT-LAMP检测方法的建立

根据H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA和NA基因的保守序列,设计2套特异性LAMP引物和2条探针引物,同时在2条探针的5'端分别标记不同的荧光基团,在3'端都标记猝灭基团,然后使用多色荧光成像仪观察反应后是否有荧光产生来判断反应管里是否有阳性扩增,通过荧光颜色的不同来分析阳性扩增产物的类型.特异性试验结果显示该方法能特异性扩增H9亚型和N2亚型AIV,对其他15个HA亚型和其余8个NA亚型AIV以及禽类常见病原体均无扩增;干扰性试验结果显示H9和N2两种亚型AIV可以在同一反应管中独立完成扩增,二者互不干扰;敏感性试验显示其最低检测限度为100拷贝/μL.试验结果表明本试验建立的二重荧光RT-LAMP检测方法具备反应快速、灵敏、特异性强同时可以用肉眼直接观察辨别扩增产物的优点,对H9N2亚型AIV临床快速检测具有较好的应用前景.

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细粒棘球蚴原头节miR-71的分泌表达特征分析

目的 分析在胰岛素、阿苯达唑和人工胃液刺激下,细粒棘球蚴原头节miR-71的分泌表达特征. 方法 从新疆屠宰场采集绵羊肝、肺细粒棘球蚴包囊,经固定、包埋及切片后,用miR-71探针进行杂交.与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗Digoxin抗体(Anti-Digoxin-FITC)作用,经4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)核酸染料染色后,在荧光显微镜下观察miR-71在包囊壁和原头节中的定位,分析miR-71在原头节中的分布,确定miR-71在原头节中的表达情况.在人工胃液(人工胃液组)、胰岛素(胰岛素组)或阿苯达唑(阿苯达唑组)等不同条件下培养原头节,收集上清并用差速离心法分离外泌体,采用透射电镜观察外泌体形态结构,利用纳米粒径分析仪测定外泌体的粒径分布;利用外泌体生物标志分子烯醇化酶和14-3-3蛋白的抗体蛋白质免疫印迹(Western blotting)鉴定外泌体;采用实时荧光定量PCR (qPCR)检测外泌体中miR-71的丰度. 结果 原位杂交结果显示,miR-71在囊壁生发层和原头节中均有表达.人工胃液组、胰岛素组和阿苯达唑组原头节分泌的外泌体粒径分别为48.9、49.7和65.4 nm,均在40～120 nm内;外泌体形态呈由膜包裹的球形.Western blotting 从外泌体中检出烯醇化酶和14-3-3蛋白,表明外泌体提取成功.qPCR结果显示,人工胃液组、胰岛素组和阿苯达唑组原头节分泌的外泌体中,miR-71的表达量分别是其对照组的1.84、1.87和2.38倍(t=12.8、26.7、29.3,均P＜ 0.01). 结论 miR-71在细粒棘球蚴囊壁和原头节中广泛表达,且可以通过外泌体进行分泌;经胰岛素、人工胃液和阿苯达唑刺激后其分泌表达水平升高.

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断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响

目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制.方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1 000,800,600 mg·L-1),甲氨蝶呤(MTX)组(20 μmol· L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析.将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg· kg-1),DTYMD低、中、高剂量组(6.25,12.5,25 mg· kg-1).除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型.给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分.结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P＜0.01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P＜0.01).与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P＜0.01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P ＜0.05,P＜0.01).在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P ＜0.05,P＜0.01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P＜0.05).在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P＜0.01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P ＜0.05,P＜0.01).结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应.

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