超声成像在早期干燥综合征小鼠模型中的评价作用

目的 探讨颌下腺超声成像在评价干燥综合征动物模型中的作用和价值.方法 C57BL/6雌性小鼠建立SS模型,在d 0、21、28和35对小鼠进行唾液量、饮水量和体重等常规指标检测,d 35检测颌下腺指数和病理改变,同时运用Vevo 2100小动物超声成像系统,对小鼠颌下腺部位进行纵切超声检查,将超声观察的结果与常规检测指标进行相关性分析.结果 SS小鼠造模d 28出现唾液量明显减少,饮水量显著增多,造模d 35颌下腺指数明显增高,颌下腺发生SS的典型病理改变.超声扫描在造模d 21发现SS组颌下腺轴面面积较正常组明显增高,颌下腺血流信号在d 28和35较正常组明显增多.分析表明,超声观察的结果与常规检测指标具有显著相关性.结论 颌下腺的超声成像可能为SS动物模型的评价提供早期线索和半定量指标,在评价SS模型病情变化以及治疗SS的药效学基础研究中具有重要价值.

2020

2021/07/20

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过表达miR-31对结肠炎模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路及凋亡蛋白的调控

目的:探讨miR-31对DSS诱发结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路和凋亡相关蛋白的影响.方法:①小鼠结肠炎实验:用1％葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠溃疡性结肠炎(UC).14只FVB非转基因小鼠随机分为control组(n=6),DSS组(n=8),16只FVB miR-31转基因小鼠随机分为miR-31过表达组(n=8),miR-31过表达+DSS组(n=8),DSS溶于水后通过饮水给予小鼠.DSS组和miR-31+DSS组第一周饮用1％DSS水,第二周饮用正常无菌水,第三周饮用1％DSS水,如此5周后造模完成,之后留取小鼠的结肠组织,通过Western blot和IHC检测小鼠结肠组织NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表达;TUNEL检测小鼠结肠组织细胞凋亡.②细胞培养实验:在人结肠上皮细胞系HCT 116细胞中通过脂质体转染的方法转染miR-31 mimic和inhibitor,使miR-31过表达或敲低,每组均进行三次重复,48 h后收取细胞,通过Western blot检测NF-κB p65、TLR4蛋白的表达.结果:①动物实验中,与control组相比,小鼠结肠组织中DSS组和miR-31过表达组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数均显著升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.05或P<0.01);且与DSS组相比,miR-31+DSS组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数也显著升高(P<0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01).②细胞实验中,与control组相比,HCT 116细胞过表达miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01),敲低miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平下降(P<0.05).结论:miR-31通过促进TLR4/NF-κB信号通路和介导肠上皮细胞凋亡促进结肠炎的发展.

2020

2021/07/20

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参苓白术散对NAFLD大鼠肝细胞mTORC1/STAT3信号通路的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食饲养的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)/细胞信号转导因子及转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响,从炎症角度揭示参苓白术散抗大鼠NAFLD的作用机制.方法:取SD大鼠80只,随机分为4组,分别为正常组、模型组、参苓白术散高、低剂量组(30,10 g·kg-1),每组20只.采用高脂饲料喂养大鼠8周,建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠灌服相应剂量的参苓白术散,8周后取血和肝组织样本,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)定量;对肝组织进行油红O,苏木素-伊红(HE)染色;采用Ⅳ型胶原酶离体循环灌注法分离肝细胞;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肝细胞肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,IL-5及IL-6含量变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠病理组织学改变表明,肝组织炎症及脂肪蓄积显著,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量显著升高,HDL-C显著下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平显著升高,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量显著升高(P＜0.01).与模型组比较,参苓白术散高、低剂量组肝组织脂质蓄积明显改善,血清ALT,AST,TC,TG及LDL-C含量明显下降,肝细胞TNF-α,IL-1β,IL-5及IL-6水平明显下降,肝细胞mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白相对表达量明显降低;参苓白术散高剂量组在改善脂质蓄积,抑制肝组织炎症反应方面,效果优于参苓白术散低剂量组,mTORC1,STAT3 mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:参苓白术散能够改善高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积及炎症反应,其作用机制可能与抑制肝细胞内mTORC1/STAT3通路相关mRNA及蛋白表达有关.

2020

2021/07/20

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白消安对2型糖尿病KKAy小鼠外周血细胞及骨髓细胞的影响

目的 观察白消安(busulfan)对2型糖尿病模型KK/upj-Ay/J(KKAy)小鼠的造血系统功能的损伤作用,并与对照C57BL/6 J(B6)小鼠进行比较.方法 雄性KKAy小鼠,随机分为白消安给药组和溶剂对照组,前者腹腔注射白消安,剂量40 mg/kg,后者注射同等剂量的5％的DMSO,B6小鼠进行相同处理分组.给药后15 d称重、计算免疫脏器系数,检测小鼠的外周血计数和分类,流式细胞术检测骨髓中造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)、造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)和长期造血干细胞(long term-hematopoietic stem cell,LT-HSC)的比例.通过粒细胞巨噬细胞集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte and macrophage,CFU-GM)测定实验评价小鼠造血祖细胞的功能.结果 白消安给药后15 d,KKAy小鼠的体重、白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,HGB)、血小板(blood platelet,PLT)、淋巴细胞(lymphocyte,LYM)、中性粒细胞(neutrophil,NEU)、骨髓中HPC、HSC和LT-HSC的比例均显著降低,CFU-GM数目明显降低,脾和胸腺细胞的比例未见明显变化.白消安给药后,KKAy小鼠的WBC、RBC、HGB和LYM明显低于B6小鼠,但PLT和HSC的比例明显高于B6小鼠.KKAy小鼠的PLT和HSC的降低幅度显著低于B6小鼠,而HPC的降低幅度明显高于B6小鼠.结论 40 mg/kg白消安给药能损伤小鼠的造血系统功能.白消安给药后,KKAy小鼠的WBC、RBC、HGB和LYM损伤较重,但PLT和HSC损伤较轻且耐受性更强,而造血祖细胞的耐受性低于B6小鼠.

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2021/07/20

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Ghrelin早期干预改善急性心肌梗死后心肌重构和心脏功能

目的 探讨急性心肌梗死(myocardial infarction,MI)后Ghrelin早期干预对心脏功能的影响及其机制.方法 结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性MI模型,并于1周时Ghre-lin干预(100 g·kg-1皮下注射,每日2次,持续4周).5周时超声测定心脏功能并直接记录颈交感神经放电.组织病理评估心肌细胞直径、心肌纤维化和梗死面积,Western blot评估心肌心房钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β肾上腺素受体(β-adrenergic receptor,β-AR)蛋白表达.结果 与假手术相比,MI后5周大鼠心交感神经放电活性明显增强,且左心室功能降低(P<0.01).Ghrelin可明显抑制MI后心衰大鼠交感神经活性、心肌细胞肥大和心脏纤维化、降低心肌ANP和BNP表达、恢复 β-AR表达、改善MI心衰动物的心脏功能.结论 本研究表明,Ghrelin早期干预可以减轻MI心肌重塑并预防心力衰竭,其作用机制可能与其抑制交感神经活性和毒性有关.因此,Ghrelin早期干预可能成为心力衰竭治疗的新方法.

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2021/07/20

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灭菌处理牛心包制备脱细胞支架的内皮化

背景:组织工程学研究常用的动物组织不可避免地存在各种微生物附着,而无菌是组织工程材料临床应用的一项基本要求.目的:观察体积分数75％乙醇灭菌对牛心包性能及生物相容性的影响.方法:将牛心包组织分别用无菌PBS(对照组)、含1％抗生素(青霉素/链霉素/两性霉素B溶液)的PBS、氯己定及体积分数75％乙醇进行灭菌处理.采用LB固体培养基评价4种方法的杀菌效果;采用VB染色评估4组处理对牛心包组织结构的影响;通过CCK-8实验测定4种处理抽提液的细胞毒性.将体积分数75％乙醇灭菌处理的牛心包制作为脱细胞支架,与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞的黏附与内皮化效果.结果 与结论:①体积分数75％乙醇和氯己定处理24 h的牛心包满足完全灭菌的要求,1％抗生素处理组和对照组可见明显菌落形成;②VB染色显示,体积分数75％乙醇、氯己定和1％抗生素处理的牛心包胶原纤维呈波浪状排列整齐,结构紧凑,弹性纤维含量较少但结构清晰;③体积分数75％乙醇灭菌处理的牛心包不影响L929细胞的增殖活性,培养1-3 d内的细胞存活率均在100％以上;氯己定灭菌处理的牛心包有很强的细胞毒性,导致细胞死亡;④人脐静脉内皮细胞可在脱细胞支架表面正常生长与黏附;在20 d的种植期内,第8-12天脱细胞支架表面黏附的细胞最多;⑤结果说明,体积分数75％乙醇能够有效消灭附着在牛心包上的所有微生物,不会影响牛心包的组织学完整性与生物相容性.

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2021/07/20

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咳喘宁对RSV诱导哮喘大鼠的治疗作用及对IL-33表达的影响

目的:探讨咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠的治疗作用及对IL-33表达的影响.方法:以呼吸道合胞病毒(RSV)滴鼻诱导+卵清白蛋白致敏的方法制作哮喘模型,实验动物随机分为正常组、模型组、咳喘宁高剂量组、咳喘宁中剂量组和咳喘宁低剂量组,各组分别给予生理盐水和相应药物处理.末次给药后进行大鼠气道高反应性测定;HE染色和Masson染色分别观察肺组织病理学改变和气道下胶原沉积情况;ELISA法检测血清中IL-33水平,qPCR法检测肺组织IL-33 mRNA表达.结果:与正常组相比,模型组大鼠哮喘症状严重,气道反应性升高,肺组织结构破坏,气道下胶原沉积增多(P<0.05),血清中IL-33蛋白和肺组织IL-33 mRNA表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,咳喘宁高、中、低剂量组哮喘症状明显减轻(P<0.05),气道反应性降低(P<0.05),肺组织病理改变轻微,气道下胶原沉积减少(P<0.05),血清中IL-33蛋白和肺组织IL-33 mRNA表达明显下调(P<0.05),其中以咳喘宁高剂量组的改变最为显著(P<0.05).结论:咳喘宁对RSV诱导哮喘大鼠的治疗作用显著,可有效减轻气道炎症,抑制气道重塑,阻断哮喘病理改变,其机制可能与降低血清与肺组织中IL-33表达有关.

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2021/07/20

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SD大鼠老龄化过程中外周血及免疫细胞表型的性别差异研究

目的 比较分析不同月龄SD大鼠外周血和免疫器官的免疫细胞分型指标性别差异.方法 选用12月龄SD大鼠和2月龄SD大鼠,雌雄各半,检测外周血细胞计数及分类、脏器指数、外周血和脾免疫细胞分型、脾T细胞P16表达量,并对结果进行性别差异比较.结果 年轻大鼠的各项检测指标未见性别差异.外周血计数与分类结果显示,与青年大鼠比较,老年雌性大鼠白细胞下降;老年雄性大鼠和老年雌性大鼠红细胞上升,两项指标均具有性别差异;老年雄性大鼠和老年雌性大鼠均表现为中性粒百分比上升、淋巴细胞百分比下降、嗜酸性粒细胞百分比升高,未见性别差异;外周血其他指标未见明显改变.老年雌性大鼠胸腺指数低于老年雄性大鼠;老年雄性大鼠脾指数升高,并高于老年雌性大鼠.外周血免疫细胞流式分析结果显示,老年雌性大鼠辅助T细胞、调节T细胞和细胞毒性T细胞上升;老年雌性大鼠B细胞下降;老年雄性大鼠自然杀伤细胞升高;这几项指标均具有性别差异.脾淋巴细胞分型结果显示,老年雌性大鼠CD3+升高,CD45RA+下降.脾T细胞P16表达量老年大鼠P16均升高,未见性别差异.结论 本研究各项指标在青年组大鼠未见性别差异,老年大鼠在外周血白细胞、红细胞计数,中性粒、单核细胞百分比;免疫脏器指数;免疫细胞分型分析中调节T细胞,细胞毒T细胞,自然杀伤细胞,B细胞,CD3阳性细胞等指标改变均存在性别差异.提示老年大鼠的免疫系统的内稳态(homeostasis)平衡失调,在老年性改变中的一些指标出现性别差异.本研究结果为研究老年疾病及衰老动物模型提供了性别对老龄化影响的基础数据.

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2021/07/20

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醒脑静注射液改善老龄大鼠全麻后认知功能障碍及其机制研究

目的:研究醒脑静注射液改善老龄大鼠麻醉后认知功能障碍作用.方法:雄性老龄大鼠采用七氟烷连续麻醉4h建立麻醉后认知障碍模型.记录首次给药后动物苏醒时间;分别在给药3和7d后进行新物体识别和Morris水迷宫检测;采用酶联免疫(Elisa)试剂盒检测脑脊液中多巴胺(dopamine,DA)和谷氨酸(glutamate,Glu)水平;脑组织HE染色后观察病理组织改变;采用WB检测海马组织N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR1)表达.结果:单次静脉(iv)给予醒脑静注射液能明显减少大鼠七氟烷连续麻醉4h后的苏醒时间,连续3或7d给予醒脑静注射液(1.8,3.6和5.4 mL· kg-1)能显著改善全麻后老龄大鼠学习能力,降低给药3d脑脊液中Glu水平,改善海马组织病理学改变,增加海马组织NMDAR1的表达.结论:醒脑静注射液能明显改善全麻后老龄大鼠认知障碍,其作用与增加海马组织NMDAR1表达有关.

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2021/07/20

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RNA结合蛋白HuR的研究进展及其在肝细胞癌发生发展中的作用

转录后事件,特别是mRNA翻转和翻译的改变,是哺乳动物细胞在应激反应中控制基因表达的主要机制.mRNA稳定性和翻译的变化主要是通过特定mRNA序列(顺式元件)与两种主要的反式作用因子——RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)和微小RNA(microRNA,miRNA)相互作用而启动的过程来控制的[1].

2020

2021/07/20

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