| 中文名称Chinese name
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肠上皮NSD2条件性敲除小鼠结直肠癌模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
NSD2 flox/flox, Vil1-Cre Mouse Model |
| 物种Species name |
小鼠
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| 品系Strain name |
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| 人类疾病Human diseases |
结直肠癌 |
| 传染性Infectivity |
无 |
| 微生物Microorganism |
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| 类别Category |
结直肠癌动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
基因敲除 |
| 制作方法Making method |
1.小鼠的构建 NSD2-floxp(NSD2fl/fl)小鼠与Vil1-Cre小鼠由北京唯尚立德生物科技有限公司构建完成。根据NSD2基因组结构和蛋白功能保守区，NSD2存在多种转录产物，其中exon3为公共的外显子，位于蛋白保守功能区Msh6_like上，编码167 bp碱基数。因此条件性删除exon3后，可能会破坏蛋白保守功能区Msh6_like，使mRNA重新剪切形成新的mRNA，发生移码突变，导致蛋白失活。因此选取exon3两边插入floxP位点，实现将exon3条件性敲除，达到条件性敲除目标基因的目的。 利用CRISPR技术剪切目标基因内含子的DNA，同时提供同源模板Donor, 通过DNA的同源重组修复在特定外显子两端插入floxp。NSD2fl/fl小鼠与组织特异性表达Cre的Vil1-Cre小鼠交配，使得NSD2特定外显子被删除，NSD2将不翻译或者发生移码突变，引起蛋白失活，从而实现肠上皮细胞条件性敲除NSD2的目的。 2.结直肠癌模型的构建 实验第1天，每只小鼠按12 mg/kg腹腔注射溶于生理盐水的结肠嗜器官致癌物偶氮甲烷(azoxymethane，AOM；A5486, Sigma)，化学诱导小鼠结直肠癌。正常饲养小鼠5天后，将2.5%的右旋葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate，DSS；9011-18-1, Merck) 溶解在动物饮用水中，连续5天诱导小鼠结肠炎。随后，提供两周的正常饮水。接下来，重复进行两轮2.5% DSS诱导(第25-29天和第44-48天)。最后，在第90天对终止实验，处死小鼠进行样本分析。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
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| 医学用途Medical use |
用于深入了解结直肠癌发生发展病理机制。 |
| 临床表现Clinical manifestation |
与WT小鼠相比，NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠在实验过程中体重呈明显上升趋势。此外，NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠表现出较轻的结肠炎症状，包括未成形的粪便、直肠出血和结肠长度缩短。在NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠中，结直肠肿瘤数量明显减少。 |
| 病理表现Pathology |
小鼠主要脏器的HE染色结果显示，与 WT小鼠比较，NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠的主要脏器表型未见明显差异。 |
| 发病天数Days of onset |
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| 发病过程Pathogenesis process |
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| 临床诊断Clinical diagnosis |
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| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
（一）动物模型评价 1、DNA鉴定 剪取出生6~7天以内的小鼠尾尖，采用全式金DNA提取试剂盒提取尾部总DNA，进行PCR扩增后，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠DNA是否发生片段删除且为纯合子。 2、蛋白表达鉴定 分别提取小鼠主要器官组织总蛋白，采用赛默飞蛋白定量试剂盒进行定量后通过Western blot鉴定小鼠各组织中是否只有肠组织中无NSD2表达。 （二）评价指标验证 NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠为肠道上皮特异性敲除NSD2的动物，从小鼠肠组织中不应检测到NSD2表达。 AOM/DSS结直肠癌模型小鼠体重比正常健康小鼠减轻，且在实验终止时解剖可见结直肠中数量不等的肿瘤。通过WT与NSD2fl/fl-Vil1-Cre小鼠AOM/DSS模型各项数据的对比分析，显示特异性敲除肠上皮NSD2抑制了小鼠结直肠癌的发展。 |
| 保藏单位Preservation unit |
中国医学科学院医学实验动物研究所 |
| 参考文献Reference |
Mengyuan Li，Hanxue Chen，Xingjiu Yang，Wenlong Zhang，Chengyan MA，Qinghong WANG，Xinpei WANG，Ran Gao . Conditional Knockout of NSD2 Gene in Mouse Intestinal Epithelial Cells Inhibit Colorectal Cancer Progression. Animal Models and Experimental Medicine. 2024,1,16 |
| 录入/更新时间Date |
2024.1.30 |
| 备注Remarks |
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