| 中文名称Chinese name
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静脉途径SHIV-KB9恒河猴感染模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
Venous route SHIV-KB9 Ganges RIver monkey infection model |
| 物种Species name |
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| 品系Strain name |
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| 人类疾病Human diseases |
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| 传染性Infectivity |
是 |
| 微生物Microorganism |
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| 类别Category |
感染性动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
感染毒株为SHIV-KB9中国恒河猴细胞适应株，RT-PCR测定病毒拷贝数为4.8×108copies/mL。 |
| 制作方法Making method |
1、实验用病毒：感染毒株为SHIV-KB9中国恒河猴细胞适应株，RT-PCR测定病毒拷贝数为4.8×108copies/mL。
2、感染动物：选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。
3、感染方法：4只恒河猴编号分别为A0423、A0424、A0425和A0426。病毒原液依次用无血清1640培养液做10倍系列稀释。经后肢静脉感染，每只猴注射1mL稀释好的病毒液。A0423-A0426分别注射10-1-10-4病毒液1mL。持续测定8个月。
4、SHIV-KB9静脉感染猴样品采集和指标测定：在感染前和感染后3、7、10、14、17、21、28、35、42、49、56、70及84天采集猴静脉血6mL，3mL EDTA抗凝，用于病毒载量和CD4+/CD8+值测定。
5、SHIV-KB9静脉感染猴血浆病毒载量的测定：提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA，使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。
6、SHIV-KB9静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞，流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值，并根据血常规结果，计算出CD4+T细胞绝对数。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
病毒血清学检查阳性。 |
| 医学用途Medical use |
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| 临床表现Clinical manifestation |
感染SHIV-KB9病毒后，A0425在感染后第120天出现食欲不振、水样腹泻、掉毛和体重减轻，到感染后第130天发展至严重水样腹泻，至18周后，愈发虚弱，直至感染后149天濒临死亡，动物安乐处死，并按计划取材留样。其余感染猴未出现皮疹、体重下降、食欲不振、机会性感染等典型的艾滋病症状。 |
| 病理表现Pathology |
在血浆病毒载量方面，A423和A424在感染后第7天首次出现阳性，之后载量上升，A423于感染后第14天达到它的最高峰（9.62×107 copies/mL），之后缓慢下降，但在我们的观察期（161天）内，一直维持在103 copies水平之上。A424在感染后第10天达到一个高峰（5.333×105 copies/mL），之后在103-106之间波动，到感染后第56天达到它的另外一个高峰（6.082×106 copies/mL），后在我们的观察期内未检测到病毒载量。A0425病毒载量在28天为7.22×105copies/mL，35天达到高峰3.51×108 copies/mL，随后下降，至10w降到了104 copies/mL，之后出现反弹，达到4.11×106 copies/mL，并长期维持在这个水平上直至发病。A426动物在整个实验期间，未检测到血浆病毒载量阳性。 |
| 发病天数Days of onset |
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| 发病过程Pathogenesis process |
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| 临床诊断Clinical diagnosis |
1、临床症状
感染SHIV-KB9病毒后，A0425在感染后第120天出现食欲不振、水样腹泻、掉毛和体重减轻，到感染后第130天发展至严重水样腹泻，至18周后，愈发虚弱，直至感染后149天濒临死亡，动物安乐处死，并按计划取材留样。其余感染猴未出现皮疹、体重下降、食欲不振、机会性感染等典型的艾滋病症状。
2、SHIV-KB9静脉感染恒河猴外周血病毒载量结果
在血浆病毒载量方面，A423和A424在感染后第7天首次出现阳性，之后载量上升，A423于感染后第14天达到它的最高峰（9.62×107 copies/mL），之后缓慢下降，但在我们的观察期（161天）内，一直维持在103 copies水平之上。A424在感染后第10天达到一个高峰（5.333×105 copies/mL），之后在103-106之间波动，到感染后第56天达到它的另外一个高峰（6.082×106 copies/mL），后在我们的观察期内未检测到病毒载量。A0425病毒载量在28天为7.22×105copies/mL，35天达到高峰3.51×108 copies/mL，随后下降，至10w降到了104 copies/mL，之后出现反弹，达到4.11×106 copies/mL，并长期维持在这个水平上直至发病。A426动物在整个实验期间，未检测到血浆病毒载量阳性（图1）。
图1 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血病毒载量结果
Fig.1 The viremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB9
3、SHIV-KB9静脉感染恒河猴CD4+/CD8+比值结果
四只实验猴CD4+/CD8+比例结果显示，实验前，其比值均大于1。接种病毒后，A423-A425在感染后前5周有个下降－回升－再下降的过程，其中A423于感染后21天降至最低值0.15，之后缓慢回升，在161天之前都在0.5之下徘徊，之后进入波动期，在0.26-0.78之间波动，但总体趋势是上升的，并于感染后357天回升至1.08。A424在前五周有几个幅度较大的波动，并于感染后35天达到最低点0.48，之后缓慢回升，从第35天的0.48一直波动回升到第329天的1.67。A425的初始CD4+/CD8+比值是四只猴中最高的，它在感染后第35天CD4+/CD8+比值达到最低点0.0125，之后缓慢回升，但一直维持在0.2以下，直至安乐处死。 A426的CD4+/CD8+比值在前三个月一直未见异常变化，到感染后91天出现下降，之后回升，维持于1附近（图2）。
图2 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值
Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB9
4、SHIV-KB9静脉感染恒河猴CD4+细胞绝对数结果
病毒感染前，A4023-A0426四只猴的CD4+ T细胞绝对数都在1000个/μL以上。SHIV-KB9感染后，四只猴在感染后前三周都有个上升－下降－再上升－再下降的过程，（图3）。A0423在感染后21天到达最低点每μL血液中244个CD4+细胞，之后缓慢上升，到感染后203天超过1000个/μL。A0424在感染后28天到达最低点每μL血液中418个CD4+细胞，之后波动上升，到感染7周之后超过1000个/μL。A0425对SHIV-KB9的反应最强烈，在感染后3天它的CD4+ T细胞绝对数从最初的1073个/μL，迅速升到4270个/μL，到第10天更是升至5254个/μL，之后迅速下降，到感染后35天降为16个/μL，并维持这个水平一直到安乐。A0426也是在感染后28天到达最低点每μL血液中465个CD4+细胞，之后波动上升，到感染11周之后超过1000个/μL。
图3 SHIV-KB9静脉感染中国恒河猴外周血CD4+T淋巴细胞绝对数
Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV-KB9 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
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| 保藏单位Preservation unit |
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| 参考文献Reference |
1.王卫, 刘强，许琰，冯育芳，丛喆，佟巍，蒋虹，杨贵波，魏强，秦川。SHIV-KB9感染中国恒河猴动物模型的建立。中国比较医学杂志，2011，21（2）：1-6。Establishment of a Chinese-Origin Rhesus Macaque Model of SHIV-KB9 Virus Infection. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE, 2011，21（2）：1-6.
2.丛喆，陶真，王卫，陈霆，金光，姚南，苏爱华，魏强。SHIV-KB9病毒中国恒河猴细胞适应株的制备。中国畜牧兽医,2012,39(3):23-27. The Propagation and Evaluation of SHIV-KB9 adapative virus stock in Chinese original Rhesus Macaques. CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE. 2012,39(3):23-27.
3.Yue Li，Qiang Liu，Zhenwu Luo，Yan meng Feng，Zhe Li，Qiang Wei and Y iming Shao. Partial Protection of SHIV-Infected Chinese Rhesus Macaques Against Super-Infection with Heterologous SHIV Isolate. Current HIV Research,2012,10,627-635.
4.Wang W, Cong Z, Jiang H, Chen T, Jin G, Xiong J, Qin C, Wei Q. Comparison of viral burden and disease progression in Chinese-origin rhesus macaques infected with common experimentally applied chimeric virus: SHIV-1157ipd3N4, SHIV-162P3, or SHIV-KB9. J Med Primatol.2014 Aug;43(4):247-57. |
| 录入/更新时间Date |
12-03-20 |
| 备注Remarks |
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