| 中文名称Chinese name
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手足口病柯萨奇病毒A10型灌胃感染小鼠模型 |
| 编号Model number |
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| 英文名称English name |
Coxsackievirus A10 infected mice model |
| 物种Species name |
小鼠
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| 品系Strain name |
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| 人类疾病Human diseases |
ICR小鼠 |
| 传染性Infectivity |
是 |
| 微生物Microorganism |
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| 类别Category |
传染性疾病动物模型 |
| 造模因素Modeling factors |
CA10病毒灌胃感染7日龄ICR小鼠 |
| 制作方法Making method |
1. 病毒准备：CA10病毒(GenBank: MF688814.1)，由医院咽拭子分离得到，在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、扩增，并采用反复冻融法释放病毒，离心富集病毒。
（1）细胞病毒培养操作：
RD细胞经常规传代培养接种到T75细胞培养瓶，培养至融合度约80%；感染前弃去原培养基，细胞用含2%双抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入无血清DMEM培养基。接种适量的CA10病毒后，置于37℃ 5% CO2培养箱孵育1~2h；之后弃去无血清培养基，加入完全培养基继续培养。接种病毒后2~3d细胞病变CPE达到+++～++++，将T75细胞瓶置封口袋中，-80℃超低温冰箱冻化3次。然后将培养液转移至50mL离心管中，4℃ 2000rpm离心20min，沉淀细胞碎片。吸取病毒上清，分装后冻存，并测定病毒滴度TICD50。
（2）组织病毒培养操作：
将CA10病毒以肌肉点注方式感染10日龄ICR乳鼠，三天后取肌肉组织置于适量PBS中研磨均匀，3000rpm离心30min，上清即为病毒液，分装后置于-80℃冰箱保存。
2. 实验动物：采用SPF级7日龄ICR小鼠乳鼠，母鼠自然哺乳，在ABSL-2实验室独立饲养。CA10动物模型建立实验通过IACUC审核，符合动物实验要求。
3. 病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即107 TCID50 CA10病毒，将病毒经灌胃途径感染小鼠，感染剂量为100μl。对照组灌胃同等量的PBS。 |
| 生物学特征Biological characteristics |
小鼠灌胃感染CA10病毒后表现出典型的症状，即出现后肢单肢或双肢瘫痪，直至死亡；在感染动物血液和肌肉组织中可检测到高病毒载量的CA10病毒，表明病毒在血液和组织中大量扩增。病理检测可见后肢肌肉组织明显病变，说明病毒对肌肉组织产生损伤，与临床症状相一致。 |
| 医学用途Medical use |
用于CA10病毒感染、发病机制研究，以及病毒疫苗研制和抗病毒药物的药效学研究 |
| 临床表现Clinical manifestation |
1.临床症状：CA10病毒灌胃感染成功模型应具有典型的神经系统症状，即可观察到动物的重症肌无力表型，包括单后肢或双后肢瘫痪。根据临床评分标准，在灌胃感染CA10病毒观察期（12天）内，第5天可观察到临床症状，且症状持续加重、评分持续升高；第7天出现死亡，但死亡率低于腹腔注射感染，后者在观察期内全部死亡。
2. 血液和组织中病毒复制情况：动物在灌胃感染CA10病毒后第1天、第3天、第5天采集血液和后肢肌肉组织样本，在第5天采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺组织，测定其中的病毒载量。经灌胃感染CA10病毒后，第1天病毒载量都低于检测阈值。CA10病毒首先在血液中复制达到较高水平，第3天的检测值在106 copies/μl以上，而到第5天血液中病毒载量出现下降，检测值在105 copies/μl水平；而在后肢肌肉组织中，CA10病毒载量由第3天的106~107 copies/mg上升到107~108 copies/mg，说明病毒在肌肉中发生了大量扩增，具有典型的嗜肌性，与临床症状表现相吻合。在其他组织中，病毒载量大部分在检测阈值之上。 |
| 病理表现Pathology |
动物经灌胃感染CA10病毒后，经胃肠道进入机体内。病毒在入侵的局部上皮细胞中完成增殖，然后病毒侵入局部淋巴组织中继续增殖并释放入血导致第一次病毒血症。病毒随血液传播接触到正常靶细胞。病毒表面的VP1蛋白与靶细胞表面特异性受体结合，完成吸附过程，其基因组RNA进入胞质。之后，病毒以其正链RNA作为模板，合成互补的负链RNA，又以负链RNA为模板合成病毒正链RNA，从而得到大量病毒RNA，进入子代病毒颗粒组装阶段。通过转录、翻译，复制出二代病毒，再次释放入血形成第二次病毒血症并引起临床症状。 |
| 发病天数Days of onset |
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| 发病过程Pathogenesis process |
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| 临床诊断Clinical diagnosis |
病毒感染后，每天测量动物体重、观察动物临床症状、记录死亡率；并于感染后第1天、第3天、第5天采集血液样本和肌肉样本，用于检测病毒载量和病理情况。临床评分标准：驼背或炸毛（1分），后肢无力（2分），单后肢瘫痪（3分），双后肢瘫痪（4分），严重的直至死亡（5分）。血液和肌肉组织样本提取RNA后利用特异性引物进行荧光定量PCR检测，根据标准品得到的标准曲线测定其中的病毒载量。采集感染小鼠第5天组织，进行病理检测，对于病理损伤进行观察。 |
| 评价模型成功的指标Indicators for evaluating model success |
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| 保藏单位Preservation unit |
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| 参考文献Reference |
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| 录入/更新时间Date |
12-03-20 |
| 备注Remarks |
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当前位置：
